恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1表达的影响

目的:研究恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1表达的影响。方法:将受孕后雌鼠用随机分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激造模,正常组不予刺激,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。补肾组灌胃中药左归丸浓缩剂,2m L/100g体质量/d,正常组及模型组则根据雌鼠体质量予以等量0.9%氯化钠溶液灌胃。仔鼠出生当天每窝随机取1-2只仔鼠断头取全脑,后将全脑固定,切取包含皮质的脑片。结果:模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。与正常组比较,补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达均下调(P<0.01);与模型组比较,补肾组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论:恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过调节Reelin信号通路可阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。

海马微量注射酪氨酸激酶受体结合蛋白B3激动剂对癫痫模型大鼠自发性痫性发作的影响及其机制

目的探讨海马内注射酪氨酸激酶受体结合蛋白B3(Ephrin-B3)激动剂对癫痫模型大鼠自发性痫性发作及海马组织分泌型糖蛋白Reelin及磷酸化接头蛋白(p-Dab1)表达的影响。方法将78只大鼠按照体质量匹配原则随机分成对照组和模型组,每组39只。对照组大鼠正常饲养,模型组大鼠采用氯化锂-匹罗卡品注射法建立大鼠癫痫模型,在癫痫持续状态诱导成功后的急性期(7 d),静止期(14 d)和慢性期(60 d)取海马组织,采用免疫组化及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测癫痫模型大鼠和正常大鼠海马组织Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化,每个时间点每组随机选取13只大鼠。另取48只大鼠,按照随机数字表法分为正常对照Fc-control组、正常对照EphB3-Fc组、癫痫Fc-control组和癫痫EphB3-Fc组,每组12只,前两组正常饲养,后两组进行癫痫造模,造模后7 d,所有大鼠按照分组分别进行双侧海马内注射Ephrin-B3的激动剂(EphB3-Fc)和Ephrin-B3激动剂的对照剂Fc-control,1次/d,连续7 d。给药结束后,观察两周内大鼠行为与脑电图的变化,采用免疫组化及Western blot检测Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化。采用SPSS 21.0进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用Tukey's检验。结果免疫组化和Western blot结果均显示,模型组大鼠海马组织中Reelin和p-Dab1蛋白在致痫后7 d、14 d、60 d表达均低于对照组(均P<0.01)。免疫组化结果显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白的平均光密度值更高[(0.41±0.04),(0.58±0.06),P<0.05]。Western blot结果显示,癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白表达显著高于癫痫后Fc-control组[(1.34±0.04),(2.26±0.10),P<0.01]。动物行为学监测显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组大鼠自发性痫性发作持续时间更短[(39.00±1.79)s,(26.50±1.87)s;t=23.21,P<0.01],频率更低[(2.00±0.89)次,(0.50±0.55)次;t=2.32,P<0.01],潜伏期延长[(6.33±1.37)d,(12.50±1.87)d;t=2.52,P<0.01]。脑电图结果显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组的大鼠脑电图痫性放电幅度下降[(37.30±1.21)μV,(29.00±1.41)μV;t=25.14,P<0.01],发作持续时间缩短[(5.35±0.19)s,(2.35±0.19)s;t=3.13,P<0.01]。结论Ephrin-B3通过上调Reelin和p-Dab1减轻颞叶癫痫大鼠自发复发性癫痫发作。

恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达影响

目的观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响。方法将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激。同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变。另每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化。结果模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩。补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P<0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P<0.01)。结论恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。