沉默P-REX2a对胃癌细胞SGC7901增殖、阿霉素敏感性的影响及其机制

目的观察沉默P-REX2a对胃癌细胞SGC7901增殖、阿霉素敏感性的影响,并探讨其机制。方法将胃癌细胞SGC7901分为正常培养组(NM组)、阴性对照组(NC组)、干扰组(siRNA组)。NM组正常培养,NC组细胞转染阴性对照序列,siRNA组转染P-REX2a siRNA,转染24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组P-REX2a mRNA,转染24、48、72 h时用MTT法观察各组细胞增殖情况(以OD570表示)。另取胃癌细胞SGC7901同法分组并转染48 h后加入0.3μmol/L阿霉素培养24 h,用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,用Western blotting法检测各组Bcl-2、Bax、PTEN、Akt、p-Akt蛋白,用基于PIP3底物的定磷比色法测定PTEN磷酸酶活性。结果 siRNA组P-REX2a mRNA低于NC组、NM组(P均<0.05),转染24、48、72 h时OD570高于NC组、NM组(P均<0.05),加入阿霉素培养后细胞凋亡率高于NC组、NM组(P均<0.05),Bax蛋白表达量、PTEN磷酸酶活性高于NC组、NM组(P均<0.05),Bcl-2、p-Akt蛋白表达量低于NC组、NM组(P均<0.05)。三组PETN、Akt蛋白表达量相比P均>0.05。结论沉默P-REX2a可以抑制胃癌细胞SGC7901增殖,提高胃癌细胞SGC7901对阿霉素的敏感性。这可能是由于沉默P-REX2a可以提高PTEN磷酸酶活性、抑制PI3K/Akt通路活化、抑制Bcl-2表达。

P-Rex2a干扰PTEN-long对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨P-Rex2a干扰PTEN-long对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 回顾性选取2018年1月至12月在上海市第八人民医院行胃癌根治术患者的胃癌组织和癌旁组织(距离癌组织5 cm)病理标本30例;收集胃癌细胞系BGC-823、AGS、MGC-803和SGC-7901,采用qRT-PCR检测胃癌和癌旁组织和细胞中PTEN-long mRNA的表达;将SGC-7901细胞处于对数生长期时进行实验,实验分为对照组(SGC-7901细胞未转染慢病毒)、NC组(SGC-7901细胞转染空白质粒)、PTEN-long-RFP组(将PTEN-Long-RFP转染到的SGC-7901细胞)、si-NC组(转染siP-Rex2a NC)、siP-Rex2a组(siRNA干扰技术对Rex2a进行沉默)和siP-Rex2a+PTEN-long组(将PTEN-long-RFP和siP-Rex2a共同转染到的SGC-7901细胞)。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫共沉淀(Co-IP)检测P-Rex2a与PTEN-long相互作用,蛋白质印迹法检测SGC-7901细胞中PI3K活性相关蛋白;构建P-Rex2a干扰表达载体,检测siP-Rex2a对细胞增殖和凋亡的影响。结果 胃癌组织中PTEN-long mRNA水平显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌细胞系BGC-823、AGS、MGC-803、SGC-7901中mRNA明显低于胃上皮细胞GES-1,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组和NC组相比,PTEN-Long-RFP组中的胃癌细胞SGC-7901增殖明显降低,凋亡能力显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。P-Rex2a与PTEN-long可以相互作用,P-Rex2a过表达可以增强P-Rex2a与PTEN-long的结合;当P-Rex2a蛋白水平随着时间增加时,PTEN-long的蛋白水平逐渐降低。培养后48~96 h,与对照组和si-NC组相比,siP-Rex2a组中的胃癌细胞SGC-7901增殖明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组和si-NC组相比,siP-Rex2a组中的胃癌细胞SGC-7901凋亡能力显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组和si-NC组相比,siP-Rex2a组中的P-Akt、P-PI3K、Bcl-2显著降低,Caspase3、PARP、Bax、Bad明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。培养后48~96 h,与对照组和si-NC组相比,siP-Rex2a组中的细胞增殖率明显降低;与siP-Rex2a组相比,siP-Rex2a+PTEN-long组中培养后48~96 h的细胞增殖率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组和si-NC组相比,siP-Rex2a组中的细胞凋亡率明显升高;与siP-Rex2a组相比,siP-Rex2a+PTEN-long组中的细胞凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PTEN-long参与胃癌的发生和发展,干扰P-Rex2a可以促进PTEN-long表达从而抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,促进其凋亡,有望成为胃癌潜在治疗的新靶标。