应用光阱技术测量P-selectin/PSGL-1键解离的断裂力

选择素(selectin)与配体相互作用在诸如炎症反应、肿瘤转移等生物学过程中具有重要作用;作用力影响受体-配体键解离。本文发展了基于光阱技术的新实验方法,用于考察P-选择素(P-selectin)与P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin Glycoprotein Ligand1,PSGL-1)相互作用的解离过程。采用黏滞力法对光阱刚度系数进行标定,并通过分子在玻璃小球表面的功能化表征,研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离,得到了在较低加载率(<25pN/s)下键解离的断裂力分布,发现键的最可几断裂力随加载率而增加。实验结果在较低加载率下补充和验证了已有的结论。

利用光镊技术研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离

采用光镊技术研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离,得到了在较小的加载率(＜25 pN/s)下键解离的断裂力分布,发现键的最可几断裂力随加载率增加而增加;测量了较低的力范围(＜30 pN)内P-selectin/PSGL-1键解离的寿命,发现键的寿命随作用力增加而下降,呈现一个从"滑移键"到"逆锁键"的过渡相.研究结论深化了力作用下受体/配体键的认识.

加味柴胡桂姜汤介导乳腺癌细胞黏附分子PSGL-1改善炎症-黏附-转移作用研究

目的研究炎症微环境下黏附分子PSGL-1异常表达对乳腺癌细胞增殖、黏附、侵袭及迁移能力的影响及加味柴胡桂姜汤干预作用机制。方法制备加味柴胡桂姜汤含药血清,选择高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞株,筛选药物最佳浓度;运用脂多糖刺激乳腺癌细胞形成炎症微环境模型,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、顺铂组、PSGL-1中和抗体组、加味柴胡桂姜汤组、加味柴胡桂姜汤与PSGL-1中和抗体联合组,采用CCK-8法、明胶黏附、Transwell及细胞划痕实验检测细胞增殖、黏附、侵袭和迁移能力;qRT-PCR和Western blot实验检测PSGL-1与其受体及Vimentin等EMT相关基因表达。结果LPS刺激乳腺癌细胞后细胞生物学行为改变,黏附分子及EMT基因表达增加,加味柴胡桂姜汤、PSGL-1中和抗体均能抑制LPS诱导的增强作用,联合组较加味柴胡桂姜汤组抑制作用降低。结论炎症微环境下肿瘤细胞侵袭及迁移能力增强,加味柴胡桂姜汤能够靶向调控PSGL-1抑制乳腺癌细胞侵袭及迁移。

急性下肢深静脉血栓患者置管溶栓前后D-D、F1+2、P-selectin变化及意义

目的 探究急性下肢深静脉血栓形成(DVT)患者置管溶栓前后D-二聚体(D-D)、凝血酶原片段1+2(F1+2)、P选择素(P-selectin)变化及临床意义。方法 选取2020年3月至2022年3月云南省第三人民医院186例急性DVT患者作为研究对象,均行置管溶栓术,术后12个月以门诊形式进行随访,4例失访,共182例完成术后随访。根据术后12个月是否发生血栓后综合征(PTS)分为PTS组(n=27)、非PTS组(n=155),比较2组一般资料及溶栓前后血浆D-D、F1+2、P-selectin表达,Logistic分析PTS发生影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)、曲线下面积(AUC)分析血浆D-D、F1+2、P-selectin预测PTS发生价值,采用相对危险度(RR)分析不同血浆D-D、F1+2、P-selectin表达对PTS的影响。结果 PTS组年龄、BMI、静脉通畅评分及溶栓后1周、1个月血浆D-D、F1+2、P-selectin表达高于非PTS组(P <0.05);Logistic显示:BMI及溶栓后1周、1个月血浆D-D、F1+2、P-selectin是急性DVT患者发生PTS的影响因素(P <0.05);ROC曲线,溶栓后1个月血浆D-D、F1+2、P-selectin联合预测PTS效能明显优于溶栓后1周D-D、F1+2、P-selectin联合预测效能;溶栓后1个月血浆D-D、F1+2、P-selectin高表达患者发生PTS风险是低表达的4.211、2.550、3.189倍。结论 急性DVT患者置管溶栓后血浆D-D、F1+2、P-selectin表达升高,其联合预测患者发生PTS具有一定预测效能。

慢性乙肝患者血清可溶性黏附分子P-selectin、ICAM-1与病情变化的相关性研究

目的:探讨慢性乙肝患者血清可溶性黏附分子P-selectin、ICAM-1与病情变化的相关性。方法:119例慢性乙肝患者根据病情严重程度分为慢性乙肝组(n=83,普通慢性乙肝患者)、重症乙肝组(n=36,重症乙肝患者),另取同期在本院进行体检的健康志愿者50例作为正常对照组。对比3组研究对象血清中可溶性黏附分子P-selectin、ICAM-1以及乙肝病毒载量(HBV-DNA)、肝功能指标(AST、ALT、TP、TBil)、肝纤维化指标(CⅣ、HA、LN)的差异,进一步分析慢性乙肝患者血清P-selectin、ICAM-1含量与上述病情指标的内在联系。结果:慢性乙肝组、重症乙肝组患者血清中P-selectin的含量分别高于正常对照组,ICAM-1的含量分别低于正常对照组,随病情加重P-selectin、ICAM-1血清含量改变加剧。慢性乙肝组、重症乙肝组患者血清HBV-DNA水平分别高于正常对照组,且重症乙肝组患者血清HBV-DNA水平更高;重症乙肝组患者血清中AST、ALT、TBil的水平高于慢性乙肝组、正常对照组,TP的水平低于慢性乙肝组、正常对照组;慢性乙肝组、重症乙肝组患者血清中CⅣ、HA、LN的含量分别高于正常对照组,且重症乙肝组患者血清CⅣ、HA、LN含量更高。相关性分析发现,慢性乙肝患者血清中P-selectin、ICAM-1含量与乙肝病毒载量、肝功能、肝纤维化程度均直接相关。结论:P-selectin在慢性乙肝患者血清中含量异常增高,而ICAM-1含量异常下降,其具体血清含量可用于衡量患者病情严重程度。

PS/PSGL-1在冠心病合并颈动脉粥样斑块痰瘀互阻证中的作用

目的:检测颈动脉内-中膜厚度(IMT)、斑块指数(Crouse积分)以及血清P-选择素(PS)、血清P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)水平,探讨血小板-白细胞相互反应在冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互阻证中的临床意义。方法:冠心病合并颈动脉粥样硬化患者80例(观察组),按照中医辨证分型分为痰瘀互阻证组、非痰瘀互阻证组,健康人30例(对照组),分别检测3组血清PS、PSGL-1水平与IMT、Crouse积分。结果:(1)观察组IMT、Crouse积分、PS、PSGL-1均明显高对照组(P<0.01);痰瘀互阻证组IMT、Crouse积分、PS、PSGL-1明显高于非痰瘀互阻证组(P<0.01)。(2)PS和PSGL-1的表达呈正相关性(r=0.714,P<0.01)。血清PS与IMT、Crouse积分呈正相关(P<0.01)。血清PSGL-1含量与IMT、Crouse积分亦呈正相关(P<0.05,P<0.01)。(3)冠脉造影结果中病变分支越多,PS、PSGL-1的水平越高(P<0.01,P<0.05)。结论:(1)颈动脉IMT及斑块积分可反映冠状动脉粥样硬化的程度。(2)PS、PSGL-1在冠心病合并颈动脉斑块发病过程中具有重要意义,可能与痰瘀互阻的实质存在一定关系。

蒙药嘎日迪-13对脑缺血大鼠不同时相海马中IL-1β IL-8、ICAM-1、P-selectin表达的影响

目的观察蒙药嘎日迪-13对脑缺血大鼠不同时相海马中IL-1β、IL-8、ICAM-1、P-selectin表达的影响。方法 360只雄性SD大鼠随机分为脑缺血模型组、假手术组、嘎日迪-13大、中、小剂量组,每组又随机分为6个时相组,灌胃给药,一次/d,连续27 d后,线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,神经功能评分后免疫组化法测定海马IL-1β、IL-8、ICAM-1、P-selectin的表达。结果嘎日迪-13明显降低脑缺血大鼠神经功能评分,并明显降低脑缺血大鼠海马IL-1β、IL-8、ICAM-1、P-selectin的表达水平。结论蒙药嘎日迪-13对大鼠脑缺血有较好的保护作用,其机制可能与降低IL-1β、IL-8、ICAM-1、P-selectin等因子的表达水平有关。

PSGL-1——一种介导白细胞粘附的重要分子

PSGL - 1是 90年代初期发现的一种粘附分子 ,具有同源二聚体的结构 ,为一种跨膜的糖蛋白 ,表达于白细胞的表面 .成熟PSGL - 1分子上具有很多O -连接的糖基化位点 ,岩藻糖基化、唾液酸化和NH2 末端酪氨酸的硫酸化对于PSGL - 1的功能十分重要 .PSGL - 1是选择素P的配体 ,与选择素P具有特殊的亲和性 .PSGL - 1同时也是选择素L和选择素E的配体 .PSGL - 1与选择素分子的相互作用在白细胞粘附的起始阶段发挥着重要作用 .PSGL - 1在介导白细胞粘附的同时可以转导胞外信号 ,促进白细胞活化并使其稳定粘附 .白细胞粘附具有重要的生理意义 .

PSGL-1基因敲除小鼠血中MIP-1γ和TNF-α的表达

目的研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响,并检测外周血中炎症因子IGFBP-6、TNF-α和MIP-1γmRNA表达水平。方法用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠(PSGL-1-/-小鼠)的外周血中血常规的差异;其次,提取两种鼠的血液的mRNA,逆转录为cDNA,采用real-time PCR方法,检测C57小鼠与PSGL-1-/-小鼠外周血中炎症因子TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞(*P<0.05)、淋巴细胞(**P<0.01)和白细胞细胞(***P<0.001)总数显著增加炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加(P<0.05)。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子并影响了外周血的血细胞组成,MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调,有可能影响了小鼠的免疫功能。

力经PSGL-1介导ERM蛋白ITAM-like序列上磷酸化位点的暴露

炎症反应阶段,P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)与埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)的结合在招募脾酪氨酸激酶(Syk)并促进白细胞激活中发挥了重要作用.文中通过晶体结构分析发现,位于ERM蛋白非传统的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM-like)上的两个磷酸化位点(Y191和Y205)周围存在较大的空间位阻,这将阻碍其被Src家族激酶酪氨酸磷酸化继而招募Syk的过程.文中用拉伸分子动力学模拟的方法模拟力学环境下PSGL-1与根蛋白FERM结构域的相互作用,构象分析和残基溶剂可及表面积的变化都表明,经由PSGL-1传导的力学信号可以介导根蛋白ITAM-like序列上磷酸化位点Y205的暴露.文中结果揭示了一条经由PSGL-1胞内域激活Syk的力学信号通路,并且在原子层面上对PSGL-1/ERM/Syk之间的相互作用给予了阐释.

氟西汀结合眼针干预急性脑梗死患者急性期神经功能、血糖及PSGL-1水平的临床观察分析

目的:探讨采用氟西汀结合眼针干预对急性脑梗死患者神经功能、血糖及PSGL-1水平的影响,分析患者神经功能、血糖及PSGL-1缓解程度间相互关系。方法:病例均来自我院治疗的急性脑梗死患者153例,按随机对照原则分组,对照组72例采用在常规治疗的基础上,采用氟西汀干预治疗,研究组81例在采用在常规治疗的基础上,用氟西汀结合眼针干预治疗,根据脑血管病学术会议制定临床疗效评定标准评价临床效果,对比患者治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分,采用pearson相关分析治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c及NIHSS评分改善程度间的相关性。结果:虽然对照组治疗有效率84.72%低于研究组治疗有效率91.36%,但无差异(P>0.05);2组治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分均显著降低(P<0.01),2组治疗后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分无差异(P>0.05);所有患者治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c及NIHSS评分改善程度两两间均存在显著正相关(P<0.01);2组患者不良反应上无差异(P>0.05)。结论:急性脑梗死患者神经功能、血糖及PSGL-1水平关系密切,在氟西汀基础上采用眼针干预治疗,在降低血糖水平及缓解神经功能上效果不显著。

银杏叶复方制剂对家兔肾脏缺血再灌注损伤时ICAM-1、P-selectin表达的影响

目的探讨银杏叶复方制剂对家兔肾脏缺血再灌注损伤时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、p-选择素(P-selectin)表达的影响。方法 40只家兔随机分为对照组、缺血组、再灌注组和银杏复方治疗组,每组10只,治疗组家兔应用银杏叶复方制剂灌胃(10mL/kg),每天1次,共4周;对照组、缺血组、再灌注组家兔均给予等量生理盐水灌胃。各实验组家兔均于再灌注30min后处死取材。光镜下观察肾脏组织学改变,免疫组织化学方法检测肾脏ICAM-1、P-selectin表达。结果缺血再灌注组肾组织ICAM-1、P-selectin表达升高,治疗组表达抑制,与缺血再灌注组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ICAM-1、P-selectin参与肾缺血再灌注损伤机制,银杏叶复方制剂能够明显减少其表达,从而保护缺血再灌注损伤肾脏。

P-selectin、VCAM-1和VEGF三种细胞因子标志物联合检测对冠心病的诊断价值探讨

目的探讨P-selectin、VCAM-1和VEGF三种细胞因子标志物对冠心病的诊断价值。方法使用流式细胞仪检测75例冠心病患者和80例健康对照组的P-selectin、VCAM-1和VEGF血清含量,用ROC曲线确定临界值并分析其对冠心病的诊断性能参数,以确定其临床诊断价值。结果冠心病患者P-selectin、VCAM-1和VEGF血清浓度水平在稳定型心绞痛患者组、不稳定型心绞痛患者组和急性心肌梗塞患者组之间差异均有显著意义(P<0.05);三项指标对冠心病诊断的cut-off值分别为9 855.2 ng/L、864.05 ng/L和94.55 ng/L,敏感性SE(%)分别为85.31%、84.03%和89.35%、特异性SP(%)分别83.84%、83.85%和92.56%,ROC曲线下面积(AUC)分别为0.942、0.931和0.947。结论血清P-selectin、VCAM-1和VEGF在冠心病的发生发展过程中起一定的作用,对冠心病的诊断和分层有一定的临床价值。

猪静脉血栓形成后内皮细胞IL-1、TNF-α、P-selectin的变化

目的 :观察比较猪下腔静脉 (IVC)血栓形成后第 1、4、7天内皮细胞表达IL 1、TNF α、P selectin含量的变化。方法 :取仔猪 30头 ,15头进腹结扎肾下段IVC制成血栓模型为实验组 ,5头开腹不结扎IVC为对照组。待形成血栓模型后第 1天 (A组 )、第 4天 (B组 )和第 7天 (C组 )取出结扎段静脉标本 ,以酶解法收集内皮细胞 ,采用半定量RT PCR法检测细胞内IL 1,TNF α及P selectin表达变化情况。结果 :酶解法收集的内皮细胞纯度达 99.4 2 %± 0 .0 7%。TNF α在A组即有表达 ,B组达高峰 (P <0 .0 5 ) ,C组则降低 ;P selectin的表达随时间的延长而逐渐升高 (P <0 .0 5 ) ;IL 1只在A组表达 ;上述三种炎症因子在对照组均不表达。结论 :(1)内皮细胞不仅是炎症介质的靶细胞 ,也能自主表达多种活性因子促进静脉血栓形成。 (2 )IL 1mRNA仅在血栓形成早期短暂表达 ;TNF αmRNA表达在血栓形成早期逐渐增强 ;P selectinmRNA表达在血栓形成急性期呈逐渐增强的趋势。

心痛方对冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互结气郁证患者PS/PSGL-1等的影响

目的:通过观察心痛方对冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互结气郁证患者PS、PSGL-1、CD40、CD40L及临床疗效的影响,探讨心痛方的的作用机制。方法:60例患者随机分入治疗组和对照组,每组30例。治疗组服用心痛方,对照组服用拜阿司匹灵、阿托伐他汀钙,疗程3个月。分别检测治疗前后患者血浆PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,记录IMT、颈动脉Crouse积分、中医证候积分、ECG、综合临床疗效。结果:治疗组和对照组均能明显抑制PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,降低IMT、Crouse积分和中医证候积分,改善心电图,提高综合临床疗效(P<0.01);治疗组在抑制CD40、CD40L的表达、降低Crouse积分与中医证候积分、提高综合疗效方面均明显优于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论:心痛方能明显降低PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,可能是通过抑制血小板-白细胞相互反应相关因子,从而取得良好的临床疗效。

P选择子和PSGL-1之弯曲刚度的热分析方法

在炎症和凝血过程中,白细胞在血管壁各处是否顺利滚过或受阻停滞,受到P选择子和PSGL-1之间相互作用的调制.在应力环境之中,P选择子和PSGL-1分子均将承受环境荷载的作用而变形,进而可能影响其功能与其相互作用.因而,研究这些分子的刚度及其隐含着的功能信息,具有重要意义.本文中,我们通过建立了蛋白分子在环境分子布朗运动所引起之热激励条件下的动力学模型,分析电子显微镜图像所显示的P选择子与其配体(PSGL-1)的几何形态特征,从而提取了P选择蛋白和PSGL-1分子弯曲刚度的信息.

PSGL-1在Apc^(Min/+)小鼠肠道肿瘤发生中的作用

目的研究P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)在ApcMin/+小鼠肠道肿瘤中的作用。方法PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠和肠道肿瘤模型ApcMin/+小鼠杂交后,统计ApcMin/+小鼠与(ApcMin/+;PSGL-1-/-)杂交小鼠小肠及大肠肿瘤的数目和总负荷,观测其肠道肿瘤的发生变化。结果相比ApcMin/+小鼠,(ApcMin/+;PSGL-1-/-)杂交小鼠在18周龄时肠道肿瘤数目与总负荷有明显增加。结论 PSGL-1的缺失促进了ApcMin/+小鼠肠道肿瘤的发生,PSGL-1在人类肠道肿瘤中可能发挥着抑制肿瘤形成的作用。

心痛方对急性心肌缺血大鼠CD40/CD40L、PS/PSGL-1的影响

目的:观察心痛方对急性心肌缺血大鼠血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1表达及大鼠心肌梗死面积的影响。方法:40只SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、心痛方组、欣康对照组,采用结扎法制备心肌缺血模型,NBT染色法测定心肌梗死面积,酶联免疫法检测血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1的表达。结果:与模型组相比,心痛方和欣康均缩小心肌梗死面积(P<0.01),且心痛方组较欣康组更有优势(P<0.01)。心痛方组、欣康组及模型组造模后分别与假手术组相比,血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1均明显增高(P<0.01);用药后心痛方组、欣康组分别与模型组相比,CD40/CD40L、PS/PSGL-1的表达均明显降低(P<0.05);心痛方与欣康在抑制CD40/CD40L、PS/PSGL-1表达方面作用相近。结论:心痛方能抑制急性心肌缺血大鼠血浆CD40/CD40L及PS/PSGL-1的表达、缩小大鼠心肌梗死面积。

CD44增强E-选择素与PSGL-1配体互作的结构基础

目的选择素-体相互作用在炎症级联反应过程中起重要作用。E-选择素由于具有多种配体,而且不同配体间存在协同作用,从而导致其在炎症级联反应过程中的作用更为复杂。PSGL-1、CD44作为E-选择素的典型配体,二者间存在协同作用,但机制尚不清楚,且E-选择素-D44相互作用的微观结构特征也尚无报道。

PSGL-1缺失导致MDSCs上调

目的 P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)主要特异性表达在白细胞上,我们的研究PSGL-1缺失在小鼠体内脾脏、骨髓中MDSCs的变化。方法利用我们实验室现有的PSGL-1-/-小鼠进行试验,经过鉴定后,PSGL-1-/-后代小鼠;利用流式细胞术检测C57和PSGL-1-/-小鼠脾脏、骨髓中Gr-1和CD11b阳性细胞的变化。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠MDSCs在脾脏、骨髓中显著上调(P<0.001),结论 PSGL-1的缺失导致小鼠脾脏、骨髓中MDSCs升高。