烟草野火病菌Pseudomonas syringae pv.tabaci yuexi-1信号肽预测及分析

利用Signal P 4.0、Lipo P 1.0及TMHMM v2.0对烟草野火病菌Pseudomonas syringae pv.tabaci yuexi-1菌株基因组中信号肽的数量、长度和氨基酸组成进行了预测及分类。结果确定其中432个ORFs（Open reading frame）所编码的N端有信号肽序列,占全部ORFs的8.81%。其中351条分泌型信号肽（SPI）,81条脂蛋白型信号肽（SPII）。在分泌型信号肽中,信号肽的长度为11~42个氨基酸,以长度为22个氨基酸的信号肽最多。同源性分析结果显示,具有相同信号肽序列的不同蛋白序列之间是高度保守的。该研究提供了野火病原菌致病因子的备选基因,提高该病菌致病因子的筛选效率。

我国大豆细菌性斑点病菌生理分化的初步研究

对来自我国不同地区的大豆细菌性斑点病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ｇｌｙｃｉｎｅａ）１９９个菌株，经过反复在国际鉴别品种上接种鉴定，确定１３４个菌株分属于生理小种１号（２个菌株）、２号（９个菌株）、４号（１１２个菌株）、５号（１个菌株）、９号（２个菌株）、１０号（２个菌株）、１１号（２个菌株）、１２号（４个菌株）。其中生理小种４号为我国及吉林省的优势小种，占分离频率的５６％，广泛分布于吉林、辽宁、黑龙江、武汉等大豆主产区；生理小种１０号、１１号、１２号经反复测定与国外报道的所有小种均不同，是我国新命名的小种。有些菌株还需进一步测定。同时发现，目前国际上采用的鉴别品种不完全适合我国的大豆细菌性斑点病菌生理小种的划分，应筛选我国自己的鉴别品种。

物理化学诱变选育冠菌素高产菌株

冠菌素是一种能够引起大豆叶片黄萎病的致病因子。它作为茉莉酸类物质的结构类似物在植物抵抗各种环境胁迫中起着重要作用。但是目前冠菌素产量比较低,这就限制了冠菌素生理作用的广泛研究。本试验通过紫外、亚硝基胍结合诱变选育冠菌素高产突变体,得到的突变体冠菌素产量是出发菌株的1.8倍,命名为M-18。该菌株在18℃下发酵生产冠菌素,产量大幅度提高,发酵周期明显缩短。

奉新县猕猴桃溃疡病病原菌鉴定

为明确江西省奉新县猕猴桃溃疡病病原菌种类。从该县7个猕猴桃生产基地采集呈典型症状的发病枝条和叶片,采用稀释分离法对其进行病菌分离并作致病性测定,共获得27个致病性细菌菌株。对各菌株进行培养性状、形态特征观察和生理生化测定,结果与文献中对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)的描述相吻合。提取各菌株基因组DNA,分别对其16S rDNA和16S-23S rDNA基因片段进行PCR扩增、测序、序列分析和构建系统发育树,结果各菌株16S rDNA和16S-23S rDNA序列长度均为1 500 bp和280 bp,且菌株间序列完全一致。将获得的两段序列利用Blast程序分别在GenBank中进行同源性搜索,发现其与丁香假单胞菌猕猴桃致病变种同源性均为100%。待鉴定菌株在系统发育树上与该变种处于同一分支。根据实验结果,将奉新县猕猴桃溃疡病的病原鉴定为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种。

丁香假单胞菌黑斑致病变种的侵染途径与群体动态研究

通过用不同方法接种证明,病原细菌可通过伤口和自然孔口侵染青菜(Brassica chinensis)的地上部分。青菜在整个生育期均感病,但在抽苔开花期及结果后感病性稍有下降。出苗至收获时的各个阶段,青菜健叶上都有病原细菌存活。病原细菌在土壤(含病残体)中可存活较长时间。

实时荧光定量PCR法检测十字花科细菌性黑斑病菌

为有效防控我国的检疫性有害生物十字花科细菌性黑斑病菌Pseudomonas syringae pv.maculicola在国内的传播与蔓延,通过设计1对特异性引物3539,利用132株靶标和非靶标菌为模板进行PCR扩增,建立了实时荧光定量PCR法,并进行了模拟种子带菌试验。结果显示,引物3539为只针对十字花科细菌性黑斑病菌扩增出的特异性产物;在模拟种子带菌检测中,常规PCR对菌悬液的检测限为10~5CFU/m L,实时荧光定量PCR的检测限为10~3CFU/m L,其中10~8CFU/m L菌液的Ct值最低,为22.90,10~3CFU/m L菌液的Ct值最高,为35.73,且不同浓度菌液间的Ct值均有显著差异;不同带菌率模拟种子的检测结果表明,常规PCR和实时荧光定量PCR能检测到的带菌率分别为0.5%和0.1%。研究表明,实时荧光定量PCR法不仅可用于病种的检测,也可用于病害的早期诊断。

进境油菜籽中十字花科黑斑病菌的检测

利用MT选择性培养基从加拿大进境油菜籽样品中分离到2株细菌分离物2305-1和5309-1，对分离物进行致病性测定、LOPAT测试、Biolog测试、hrpZ和印基因序列分析，以及多位点序列分析。结果表明：2株分离物人工接种油菜、花椰菜和番茄幼苗都能引起典型黑斑症状；LOPAT测试和Biolog测试结果与丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）的各项生理指标一致；hrpZ基因序列与十字花科黑斑病菌（P．syringaepv．maculicola）和番茄细菌性叶斑病菌（P．syringae pv．tomato）的序列相似性均为99．18％-100％；cfl基因序列分析表明分离物2305一l和5309—1基因组中存在冠毒素合成基因；选择gyrB、ropD、gltA、gap1、acnB和pgi6个看家基因进行多位点序列分析，系统发育树显示分离物2305．1和5309—1均与P．syringaepv．ma．culicola聚在一起。根据试验结果将分离物2305．1和5309．1鉴定为十字花科黑斑病菌P．syringaepv．maculicola。