微小扇头蜱P0基因的克隆及其编码蛋白的生物信息学分析

为探究微小扇头蜱P0基因序列特征,预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,筛选出P0蛋白的B、T优势抗原表位,本研究克隆了微小扇头蜱P0基因,运用Clustal X软件分析P0基因序列特征,用在线软件EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL筛选P0蛋白的B、T优势抗原表位。试验结果显示:微小扇头蜱P0基因全长957 bp,碱基A含量为24.0%,T含量为20.3%,G含量为27.5%,C含量为28.2%,A+T含量为44.3%,G+C含量为55.7%,共编码318个氨基酸;P0蛋白分子量为34 ku,理论等电点(pI)为5.86,平均亲水系数为-0.153,不稳定指数为38.15;P0蛋白的二级结构含163个α螺旋(占比51.25%),130个无规卷曲(占比40.88%),25个延伸链(占比7.86%),其中以α螺旋为主要结构;P0蛋白的三级结构以α螺旋的含量最高,该蛋白的全局模型质量评估(global model quality estimation, GMQE)、定性模型能量分析(qualitative model energy analysis, QMEAN)值分别为0.49和0.52±0.05,无信号肽和跨膜结构域,但存在40个磷酸化位点和1个糖基化位点;P0蛋白有13个B淋巴细胞优势抗原表位和6个T淋巴细胞优势抗原表位。综上所述,微小扇头蜱P0基因序列呈GC偏好,P0蛋白是以α螺旋为主要结构成分的亲水性酸蛋白,具有B、T淋巴细胞优势抗原表位,是今后研制防控微小扇头蜱疫苗的理想靶标。

燃油车48V混动系统P0架构混动模式性能优化策略研究

汽车的普及引发环境污染问题,目前国家出台一系列措施降低汽车排放,减少尾气对环境的污染,其中包括推广应用不同拓扑结构的混动车辆系统等。基于此,提出了一种基于48 V混动系统P0架构的燃油车混动模式性能优化策略,对车辆混动模式进行优化改进和升级,然后进行分析验证。结果表明,该48 V混动系统P0架构的燃油车污染排放、功能、经济性和整车动力性等均提高约23%以上,满足了混动系统升级改造需求。

LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达

目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果:(1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论:LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。

抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义

目的对抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其他自身免疫性疾病诊断中的意义进行深入的分析和研究。方法收集收治的110例自身免疫性疾病患者(56例SLE、26例类风湿关节炎、10例干燥综合征、4例强直性脊柱炎、5例系统性血管炎、6例混合性结缔组织病、3例皮肌炎)的基本资料,应用蛋白印迹法对患者体内的血清抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体、抗-sm、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体等自身抗体的水平进行分析和研究,进而衡量自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义。结果本次研究的110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体、抗-sm、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体诊断SLE的敏感性分别是38.26%、53.66%、28.18%、34.55%、30.9%。特异性分别是99.19%、99.83%、99.09%、96.45%、86.43%。抗核糖体P0蛋白抗体在本研究的110例患者中的阳性率为11.82%,抗dsDNA抗体在本研究的110例患者中的阳性率为17.27%,抗-sm抗体在本研究的110例患者中的阳性率为3.64%,抗核小体抗体在本研究的110例患者中的阳性率为4.55%,抗组蛋白抗体在本研究的110例患者中的阳性率为10.91%。结论抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中有良好的应用价值,在实际的操作过程中要注意选择多种类型的抗体进行组合,可以实现各种抗体之间的相互补充,有利于提高身免疫性疾病诊断的正确率。

马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用

马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶病毒编码的一个基因沉默抑制因子。通过序列分析发现PLRV-P0基因序列中含有两个重复的WG基序,我们将PLRV-P0基因序列中第87位和第140位的色氨酸(W)点突变为丙氨酸(A)(命名为P0WA),构建植物表达载体pCAMBIA1300-CE-P0,pCAMBIA1300-CE-P0WA,农杆菌渗透注射本氏(Nicotiana benthamiana)烟草叶片,通过荧光显微镜观察发现PLRV-P0和AGO共同注射后有绿色荧光出现而PLRV-P0WA和AGO共同注射后则没有绿色荧光出现。研究结果初步表明,PLRV-P0能够和AGO蛋白发生相互作用,重复的WG基序是其与AGO蛋白相互作用的关键氨基酸。

周围血清P0蛋白抗体表达对快速进展性自身免疫性内耳病和梅尼埃病的诊断价值

目的探讨周围血清P0蛋白(myelin protein zero,MPZ)抗体水平对快速进展性自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear diseases,AIED)和梅尼埃病的诊断价值。方法 40例AIED患者(研究组)包括快速进展性AIED 14例、梅尼埃病11例和遗传性聋15例,通过酶联免疫标记法,分别定量检测患者周围血清MPZ抗体IgG和IgM浓度,结果与对照组(其他自身免疫性疾病40例,听力损伤者除外)比较。结果研究组周围血清MPZ抗体浓度(IgG:61.53±13.55ng/L和IgM:60.34±13.96ng/L)明显高于对照组(IgG:30.77±9.80ng/L和IgM:20.82±12.29ng/L)(P<0.01),MPZ抗体浓度由高至低依次为快速进展性AIED、梅尼埃病、遗传性聋,双侧梅尼埃病患者周围血清MPZ抗体浓度接近快速渐进性AIED患者(P>0.05),检测IgM浓度更具临床诊断意义。结论周围血清MPZ抗体的表达特别是IgM的表达,在诊断快速进展性AIED与双侧梅尼埃病方面,有较高的敏感性和特异性。

基于P1/P0四面体宏元的三维注塑充填速度场压力场有限元数值模拟

计算效率和解的稳定性是影响三维注塑充填有限元数值模拟的关键因素。针对黏性不可压缩聚合物熔体三维充填过程的速度场和压力场,以提高计算机求解速度为出发点,分析了采用P1/P0四面体单元(速度线性,压力常数)得到的有限元方程的解不收敛的原因,提出一种采用P1/P0四面体宏元离散空间域的求解方案,从而降低了求解的自由度数量,提高了计算速度。通过模拟'圆管中定黏度流体的稳态流动'考察了该求解方案的模拟精度,通过模拟'圆管中定黏度流体的瞬态充填'比较了采用P1/P0四面体宏元和P2/P1四面体单元(二次速度,线性压力)的计算时间。最终将该方案应用到三维注塑充填的数值模拟中。

甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性

【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0Δ2-15(N端缺失15个氨基酸)和P0Δ155-256(C端缺失102个氨基酸),然后定向克隆到单子叶植物表达载体p Ubi-nos(空载体)上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合Image J软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%—98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1—60、76—125和161—210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器(http://www.datamonkey.org)提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的p TEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48—120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与p Ubi-nos空载体(不含沉默抑制子)对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0倍以上。P0与P19抑制RNA沉默活性水平没有显著差异(P>0.05)。P0蛋白N端缺失15个氨基酸(P0Δ2-15)和C端缺失102个氨基酸(P0Δ155-256)均丧失了沉默抑制子的功能,荧光表达与不含沉默抑制子对照组相当。【结论】在甘蔗嫩叶组织EYFP瞬时表达体系上,P0能够显著地提高外源基因EYFP表达水平。P0蛋白N端15个氨基酸和C端102个氨基酸含有显著的保守区域,是P0发挥沉默抑制子功能所必需的。

重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价

目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析。结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD。Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性。结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础。

预钻式旁压试验确定粘性土P0的方法探讨

预钻式旁压试验确定P0的方法比较多,一般是在旁压曲线上面找特征点,但效果一般不理想。笔者在通州地区进行旁压试验,根据P0值的物理含义得出一种确定粘性土P0的方法,并与监测数据进行对比,验证方法的合理性。

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响

目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59～535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。

IL-12和IL-18的体外联合孵育协同增强P0_(180-199)T/Th1细胞增殖和分化的实验研究

目的 研究 IL- 12和 IL- 18是否能够协同增强 P0 1 80 - 1 99T/ Th1淋巴细胞的增殖和分化。方法 用 IL-12和 /或 IL- 18体外孵育的 P0 1 80 - 1 99T细胞过继免疫正常动物 ,引发 AT- EAN后 ,用流式细胞仪检测单独组和联合组的脾 T淋巴细胞的增殖 ,EL ISA法检测单独组和联合组的细胞培养上清和血清中 Th1和 Th2细胞因子的变化。结果 与 IL- 12组或 IL- 18组比较 ,IL- 12和 IL- 18的联合孵育使 P0 1 80 - 1 99T细胞的 CD4 +T/ Th1分化能力增强 ,表现为脾细胞的 CD4 +/ CD8+的比值显著上调 ,细胞培养上清和 AT- EAN血清中 IFN-γ的显著上调 ,具有显著性差异。结论 IL - 12和 IL - 18能够协同增强 P0 1 80 - 1 99T/

大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的DNA序列和mRNA水平比较

目的 P0蛋白与内耳和周围神经自身免疫性疾病的发生有关,本研究拟通过比较耳蜗神经和坐骨神经中该蛋白的一致性和mRNA水平,为自身免疫性内耳病的诊治提供线索。方法分别提取36只SD大鼠的耳蜗神经和坐骨神经总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及半定量RT-PCR测试P0蛋白的mRNA表达水平,将RT-PCR产物进行cDNA序列测定,比较大鼠耳蜗神经和周围神经P0蛋白的cDNA序列和mRNA转录水平。结果大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的cDNA序列相同,但二者之间的mRNA转录水平有显著性差异。结论大鼠耳蜗神经和坐骨神经的P0蛋白具有一致性,其mRNA转录水平有显著性差异。

基于J2EE+C3P0的用户管理模块设计与实现

本文简述了基于人才招聘网站的用户管理模块设计与实现。该模块主要用于管理两种用户:公司用户和个人用户。本模块采用了目前网站开发的主流技术J2EE、C3P0和My SQL,较详细地陈述了用户管理模块的设计、实现和测试,重点部分是用户管理模块的设计。本模块可移植到其它类似系统的用户管理。

P0蛋白的分布及其与自身免疫性内耳病的关系

P0蛋白是周围神经系统髓鞘形成细胞Schwann细胞膜上的一种结构蛋白 ,对维持髓鞘正常的结构和功能有十分重要的意义。资料表明P0蛋白还与周围神经系统及内耳自身免疫病的发生有关。本文就P0蛋白的结构和功能、分布及其与自身免疫性疾病的关系作一综述。

抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义

目的:研究抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其它自身免疫性疾病诊断中的意义。方法:采用线性免疫分析法检测137例SLE患者及156例其它自身免疫性病患者(75例类风湿关节炎、39例强直性脊柱炎、27例干燥综合征、15例皮肌炎)血清中抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体等抗体,比较以上抗体在SLE及其它自身免疫性疾病诊断中的意义。结果:抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体等抗体诊断SLE的敏感性,分别为37.23%、52.55%、29.2%、26.28%、57.66%、49.64%、32.85%。抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体在SLE诊断有较高的特异性,分别为98.08%、98.72%、94.87%、96.15%。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB抗体特异性较差,分别为48.08%、53.85%、66.03%。结论:在诊断SLE的特异性抗体中,尽可能选择多种抗体组合,使各种抗体相互补充,定能提高SLE诊断率。

DLE和SLE患者血清中抗RPLP0抗体水平及临床意义

目的:了解盘状红斑狼疮(DLE)和系统性红斑狼疮(SLE)抗RPLP0抗体的表达水平,分析其与各临床表现和实验室指标的关系。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗RPLP0抗体;直接免疫荧光(DIF)检测皮损部位的免疫复合物;常规方法检测自身抗体及补体。结果:健康对照组、DLE组、SLE组的抗RPLP0-IgG抗体的吸光度(A.U.)均值分别为:0.72±0.16,0.53±0.18和1.23±0.62。DLE组患者的抗RPLP0-IgG抗体与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而SLE组高于DLE组和健康对照组(P<0.05)。SLE血清抗RPLP0抗体高水平组患者的关节炎、肾脏损害和特征性皮损的频率高于抗RPLP0抗体低水平组(P<0.05),而抗RPLP0抗体水平与其他临床表现、SLEDAI、CLASI评分无相关性(P>0.05)。结论:DLE患者与健康人血清抗RPLP0抗体水平无差异,SLE患者血清抗RPLP0抗体水平高于DLE患者,且与关节损害、肾损害及特征性皮损相关。

MCS-51单片机P0口扩展技术研究

为了解决MCS-51单片机应用系统设计需要对单片机P0口进行适当的扩展的问题,文中给出了一种使用输出带锁存的74HC377芯片来进行输出口扩展,并使用具有三态缓冲的74HC244芯片进行输入口扩展的并行扩展方法。同时给出了具体的电路连接和部分汇编代码。

48V P0轻混系统设计及开发

基于某型1.5TGDI汽油发动机多用途乘用车,设定NEDC工况油耗目标为不高于8L/100km,正向开发48V P0轻混动力系统,通过仿真进行BSG电机和动力电池的选型匹配,并建立样车对仿真结果进行验证。开发了增强起停、滑行和制动能量回收、电机助力、发动机工况优化等混动功能。实车验证结果表明,48V P0轻混系统能够提升车辆动力性和经济性,实现整车NEDC工况综合油耗节油14%。

长链非编码RNA RPLP0P2在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖的影响研究

目的探讨长链非编码RNA RPLP0P2在胃癌组织中的表达,及其对胃癌细胞增殖的影响。方法选取行手术切除治疗的胃癌患者56例,留取术中切除的胃癌组织与配对的癌旁正常组织,采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁正常组织RPLP0P2表达水平,并比较不同临床病理特征的胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平。采用转染小干扰RNA RPLP0P2(si-RPLP0P2)的方法敲除RPLP0P2,比较转染si-RPLP0P2与转染si-NC的胃癌BGC-823、SGC-7901细胞与正常胃上皮GES-1细胞增殖情况。结果除Borrmann分型、肿瘤大小以及是否有神经侵犯外,不同临床病理特征的胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平比较均无统计学差异(均P>0.05)。即胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平不受患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤直径、肿瘤分化程度、TNM分期、Lauren分型、癌胚抗原、糖类抗原19-9等影响。与转染si-NC相比,转染si-RPLP0P2的胃癌BGC-823、SGC-7901细胞与正常胃上皮GES-1细胞增殖受抑制,即下调RPLP0P2会抑制细胞增殖。结论 RPLP0P2在胃癌组织中表达上调,下调RPLP0P2可抑制胃癌细胞增殖。RPLP0P2或可成为胃癌的生物标志物与潜在的治疗靶点。