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类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析
1
作者
王凤芝
温立斌
+2 位作者
何孔旺
姚火春
王小敏
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2015年第4期90-94,共5页
为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水...
为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。
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关键词
p1
vp1
昆虫杆状病毒表达载体系统
RT-PCR
Western
BLOT
电镜
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职称材料
题名
类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析
1
作者
王凤芝
温立斌
何孔旺
姚火春
王小敏
机构
江苏省农业科学院兽医研究所
南京农业大学动物医学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2015年第4期90-94,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31272574
30972184)
江苏省农业科技自主创新项目(CX(14)2045)
文摘
为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。
关键词
p1
vp1
昆虫杆状病毒表达载体系统
RT-PCR
Western
BLOT
电镜
Keywords
p1 vp1
Baculovirus expression vector system
RT-PCR
Western Blot
SEM
分类号
S432.4 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析
王凤芝
温立斌
何孔旺
姚火春
王小敏
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2015
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