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不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切 被引量:1
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作者 马金 李军强 +2 位作者 莘春林 段静留 朱涛 《微生物学免疫学进展》 2018年第1期1-6,共6页
目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒(Mahoney株)的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备... 目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒(Mahoney株)的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒。通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞(sf-9细胞)对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞(High five细胞)扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况。结果获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒。其中,重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-3CD)在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD)感染细胞后,3CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高(P<0.05)。结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 草地贪夜蛾细胞 3CD蛋白 p1前体蛋白 重组杆状病毒 类病毒颗粒
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口蹄疫病毒衣壳蛋自前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 韦 婷 郑 敏 +6 位作者 刘 棋 李雪梅 李铁征 张洪勇 郭志儒 夏志平 金宁一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期134-137,共4页
[摘 要]目的 对口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析,了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理,便于疫苗株的选择。方法 应用RT-PCR方法扩增了 CC-1毒株的衣壳蛋白前体 P1基因... [摘 要]目的 对口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析,了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理,便于疫苗株的选择。方法 应用RT-PCR方法扩增了 CC-1毒株的衣壳蛋白前体 P1基因和蛋白酶 3C基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体上,分别构建含有P1基因和3C基因的两个重组质粒pGEMP1和pGEM3C,并进行核苷酸序列分析。结果CC-1株与相同血清型毒株P1基因核苷酸序列和氨基酸序列存在较高的同源性,与不同血清型毒株P1基因氨基酸序列的同源性差异显著,而不同血清型毒株的蛋白酶3C基因氨基酸序列的同源性均在 90%以上。结论 成功地克隆了 FMDV P1区基因和蛋白酶3C基因,为选择口蹄疫病毒疫苗株提供了背景材料。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白p1基因 蛋白酶3C基因 基因克隆 序列分析
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Asia1型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 张中旺 张永光 +2 位作者 王永录 潘丽 张昱 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期973-976,共4页
目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,... 目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Westernblot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80.475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶25600,Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体,并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清,为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白p1 原核表达 多克隆抗
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Expression and Immunological Analysis of Capsid Protein Precursor of Swine Vesicular Disease Virus HK/70 被引量:3
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作者 Hong TIAN Jing-yan WU You-jun SHANG Shuang-hui YING Hai-xue ZHENG Xiang-tao LIU 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期206-212,共7页
VP1, a capsid protein of swine vesicular disease virus, was cloned from the SVDV HK/70 strain and inserted into retroviral vector pBABE puro, and expressed in PK15 cells by an retroviral expression system. The ability... VP1, a capsid protein of swine vesicular disease virus, was cloned from the SVDV HK/70 strain and inserted into retroviral vector pBABE puro, and expressed in PK15 cells by an retroviral expression system. The ability of the VP1 protein to induce an immune response was then evaluated in guinea pigs. Western blot and ELISA results indicated that the VP1 protein can be recognized by SVDV positive serum, Furthermore, anti-SVDV specific antibodies and lymphocyte proliferation were elicited and increased by VP1 protein after vaccination. These results encourage further work towards the development of a vaccine against SVDV infection. 展开更多
关键词 Swine vesicular disease virus Capsid protein precursor gene (vp1 Gene expression Immunere sponse
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