发酵床饲养方式对猪情绪因子及抗抑郁因子P11基因mRNA表达的影响

【目的】本文探讨了饲养模式对猪血清情绪相关物质(5-羟色胺5-HT、β-内啡肽β-EP、皮质酮Cortisol等)及抗抑郁因子P11基因mRNA表达的影响。【方法】试验选择60头体况良好、体重相近(28.4±0.30)kg 60日龄苏钟猪(阉割,公母各半)作为试验动物,随机分为2组:发酵床饲养组(垫料基质为菌糠)、水泥地面饲养组,每组3个重复,每个重复10头,试验期90 d(育肥前期、后期)。试验第45、90天采集血液测定血液情绪物质,90 d屠宰取下丘脑组织,用于p11蛋白RT-PCR检测。【结果】(1)唾液中,发酵床饲养组5-HT、Cortisol浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),β-EP、乙酰胆碱(Ach)浓度则无显著差异(P>0.05)。(2)血清指标方面,育肥前期(试验第45天)发酵床饲养组猪血清β-EP、Cortisol、锌(Zn)浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),5-HT、Ach浓度有提高的趋势(P=0.065,P=0.062),镁(Mg)浓度则无显著差异(P>0.05);育肥后期(试验第90天),发酵床饲养组猪血清β-EP、cortisol、5-HT浓度显著高于水泥地面饲养组(P<0.05),Ach浓度与前期结果相反,则显著低于水泥地面饲养组(P<0.05),Zn、Mg浓度则无显著差异(P>0.05)。(3)RT-PCR检测结果显示,发酵床饲养组下丘脑P11蛋白基因mRNA相对表达量高于水泥地面饲养组,且有提高趋势(P=0.062)。【结论】发酵床模式可以显著提高猪机体的情绪物质的分泌,促进脑分泌抗抑郁P11蛋白,减少生理应激,趋于愉悦状态,改善动物福利,促进健康。

p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 。

T7噬菌体衣壳蛋白P11的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备

目的:表达、纯化T7噬菌体衣壳蛋白P11,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达T7噬菌体P11蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了P11蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为27000。获得了1株稳定分泌抗P11抗体的杂交瘤细胞株(2G11),其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG2b。ELISA检测,对应腹水mAb的效价为1∶8.1×105。Western blot结果显示抗P11mAb具有良好的特异性。结论:成功地制备了P11蛋白及其mAb。

载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠及家兔中的动态变化

目的探讨载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠以及家兔中的变化,比较融合蛋白在三种动物中的反应原性,确定适于评价载脂蛋白A1-P11药效的动物种类。方法大鼠、小鼠及家兔各14只,随机选取7只按照1mg/kg体重静脉注射载脂蛋白A1-P11融合蛋白,隔天给药;各组余下的7只动物注射生理盐水作为对照。并在给药前1天、第2、4、8、12、15、18和20次给药时及停药后第1、2、3和4周采血。用酶联免疫吸附法检测不同时间点的中和抗体。结果载脂蛋白A1-P11在这三种动物中抗体变化的消长规律基本一致,但是家兔产生抗体显著高于小鼠和大鼠。结论三种动物中,大鼠和小鼠更适合作为评价载脂蛋白A1-P11长期功效的动物,因而这两种动物的病理模型可作为评价载脂蛋白A1-P11药效的候选动物,为探讨载脂蛋白A1-P11治疗高脂血症和干预动脉粥样硬化奠定基础。

褪黑素受体激动剂Neu-P11对3T3-L1小鼠脂肪细胞蛋白激酶B及其磷酸化的影响

糖尿病（diabetes mellitus,DM）特征性病理生理改变是高血糖、碳水化合物和脂肪代谢紊乱导致的胰岛素抵抗或胰岛素分泌的绝对或相对不足以2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）为主。T2DM发病原因主要是胰岛素信号转导通路破坏,产生胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）。

T7噬菌体尾蛋白P11的表达、纯化及鉴定

目的:表达、纯化T7噬菌体尾蛋白P11并进行鉴定。方法:PCR扩增T7噬菌体尾蛋白P11基因片段,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接表达载体pTIG-TRX,重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化目的蛋白,SDS-PAGE分析P11蛋白的相对分子质量大小,并多次免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体,Western blot鉴定蛋白活性。结果:PCR扩增P11基因后,成功诱导表达了含6×His标签的P11蛋白,SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量约为25 000,通过多次免疫获得了抗P11的多克隆抗体并对其纯化;制备的多克隆抗体能够识别T7噬菌体和P11蛋白,具有较高特异性。结论:成功表达了P11蛋白并制备了其多克隆抗体,为T7噬菌体展示系统的应用奠定了基础。

肽P11通过上调miR-126表达抑制分化型甲状腺癌细胞增殖和侵袭

目的:揭示肽P11对人分化型甲状腺癌细胞生长和转移的影响,以及肽P11与miRNA-126表达之间的关联。方法:采用qRT-PCR分别检测30份乳头状甲状腺癌和滤泡性甲状腺癌组织及配对癌旁组织中miR-126的表达。分别应用miR-126模拟物转染TPC-1和FTC-133细胞系。应用500μmol·L^(-1)的肽P11培养两种甲状腺癌细胞24 h。采用MTT法测定细胞活力,膜联蛋白V(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)测定法检测细胞凋亡,伤口愈合实验检测细胞迁移,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭,Western blot检测脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)及Wnt/β-catenin信号通路下游基因MMP-7、c-Myc和cyclin D1的表达。结果:miR-126在分化型甲状腺癌组织和细胞系中表达下调(P<0.05),并且miR-126的异常表达与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。肽P11处理显著上调了分化型甲状腺癌细胞中miR-126的表达(P<0.05)。肽P11处理和miR-126的过表达均抑制了分化型甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。肽P11处理和miR-126的过表达下调了细胞中LRP6、MMP-7、c-Myc和cyclin D1的表达(P<0.05)。结论:肽P11可通过上调分化型甲状腺癌细胞中miR-126的表达来发挥抗癌作用。miR-126可能是乳头状甲状腺癌治疗的潜在靶标,而肽P11可通过靶向miR-126来发挥抗癌作用。

膜联蛋白A2在癌症发生和进展中的作用

膜联蛋白A2是一种钙依赖性蛋白,它在各种类型肿瘤中起正向调节作用,在调节细胞功能上亦扮演多个角色,包括血管生成、增殖、凋亡、细胞迁移、入侵和粘附。膜联蛋白A2与血纤溶酶原以及细胞表面的组织纤溶酶原激活物结合,导致纤溶酶原转化成血纤维蛋白溶酶。血纤维蛋白溶酶是一种丝氨酸蛋白酶,可以激活基质金属蛋白酶和降解细胞外基质,对癌症转移发挥着关键作用。研究发现膜联蛋白A2在卵巢癌细胞中表达增多,能促进癌细胞转移。越来越多的证据表明,膜联蛋白A2及其结合蛋白在恶性肿瘤微环境中发挥重要作用,共同促进癌症的转移。本文综述了膜联蛋白A2及其结合蛋白在恶性肿瘤包括卵巢癌中的生物学作用。