盐酸小檗碱通过P13K/AKT信号通路抑制MMP2和MMP9的表达影响膀胱癌T24细胞侵袭性

目的:探讨盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride)对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响及机制.方法:采用利用CCK8法检测膀胱癌T24细胞的生存率;transwell侵袭试验检测盐酸小檗碱对T24细胞侵袭能力的影响;Western-blotting分析盐酸小檗碱对P13K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT),细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的改变.结果:CCK8显示盐酸小檗碱对T24细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性(P<0.05);与对照组比较,经盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞侵袭能力明显降低.P13K抑制剂LY294002可通过抑制P13K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达,相对应的盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞p-PI3K、pAKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降(P<0.05).结论:盐酸小檗碱可有效抑制膀胱癌T24细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT通路抑制MMP2和MMP9的表达.

荧光假单胞菌株P13分泌铁载体抑制油菜菌核病菌

通过铬天青(CAS)检测法和400 nm特异光谱吸收法测定了在无铁条件下,荧光假单胞菌株P13能大量分泌铁载体,对油菜菌核病菌有较强的抑制作用.随着铁离子浓度的提高,铁载体分泌减少,对油菜菌核病菌的抑制作用减弱.

P13K／Akt／mTOR信号通路参与缺氧诱导因子-1α在急性胰腺炎大鼠的表达调节

目的探讨急性胰腺炎（AP）大鼠P13K／Akt/mTOR信号通路与HIF-1α表达的关系。方法56只雄性SD大鼠随机分为7组：空白对照组（n=8）、假手术组（n=8）、AP模型组（n=8）、wortmannin预处理组（n=8）、rapamycin预处理组（n=8）、wortmannin＋rapamycin预处理组（n=8）和溶剂对照组（n=8）。用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备大鼠AP模型，wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组分别于AP模型复制前30min腹腔注射wortmannin、rapamycin、wortmannin＋rapamycin DMSO／PBS溶液，溶剂对照组仅注射DMSO／PBS溶液。模型复制成功后6h处死大鼠取胰头部胰腺组织，应用Westernblot检测HIF-1α、Akt、P—Akt、p70^s6k、P—p70^s6k蛋白的表达。结果Akt、p70^s6k蛋白在胰腺组织中表达稳定，各组间差异无统计学意义（P〉0．05），HIF—1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白在空白对照组和假手术组中均有极少量阳性表达，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。AP模型组HIF-1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白含量与空白对照组相比明显升高（P〈0．01）；wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组中HIF-1α、P—p70^s6k蛋白表达明显高于空白对照组（P〈0．01），但较AP模型组明显降低（P〈0．01），其中HIF-1α蛋白表达在wortmannin＋rapamycin预处理组比wortmannin预处理组、rapamycin预处理组降低更明显（P〈0．05）。HIF-1α、P—Akt、P—p70“蛋白含量在溶剂对照组和AP模型组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论P13K／Akt／mTOR信号通路阻断剂wortmannin、rapamycin能够显著降低急性胰腺炎大鼠HIF-1α的表达，P13K／Akt／mTOR信号通路参与了HIF-1α的表达调控，P13K／Akt／mTOR信号通路可作为AP防治中的新靶点。

微切割喉鳞状细胞癌9p13-23区域微卫星杂合性缺失的研究

目的 探讨喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )在 9p13 2 3区域微卫星 (microsatellite)发生杂合性缺失 (lossofheterozygosity,LOH)的热点。方法 采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织 ,选取位于 9p13 2 3区域的 13个高多态性微卫星引物对 42例喉鳞癌组织进行聚合酶链反应和变性凝胶电泳。结果 ① 42例喉鳞癌在 9p13 2 3区域等位基因LOH的总发生率是 97 6 %(4 1/ 42 )。在 13个微卫星引物中 ,LOH发生率最高者是位于 9p2 2 2 3的D9S16 2 (89 5 %) ,其次是位于 9p2 1的D9S171(80 0 %)。与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅 5 0 0 %。②等位基因缺失作图分析发现 42例喉鳞癌组织在 9p13 2 3上存在 2个明显的LOH较小区域 ,分别位于 9p2 1的D9S16 1～D9S171之间和 9p2 2 2 3的IFNA和D9S16 2之间。结论 喉鳞癌在 9p13 2 3区域除抑癌基因p16以外可能还存在 2个或 2个以上候选抑癌基因 ,这些候选抑癌基因也许和p16一样与喉鳞癌的发生、发展密切相关。

P13-K／Akt和MAPKs信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨P13-K／Akt、有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen—activatedproteinkinases，MAPKs）信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用不同浓度的过氧化氢（H2O2）刺激细胞建立氧化应激损伤的模型，采用M1Tr法检测细胞活力，用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡，双氢罗丹明123（DHR）染色检测细胞内活性氧（ROS）水平，Westernblot检测P13-K／Akt和MAPKs信号通路关键蛋白的表达情况。结果各浓度H2O2组细胞活力（OD值）较对照组明显降低（P〈0．01），各浓度H2O2组不同作用时间点OD值差异无统计学意义（P〉0．05）；200μmol／LH2O2刺激HU-VECs24h后，细胞凋亡率及胞内ROS水平较对照组明显升高（P〈0．05）；H2O2组P—Akt、P—C—Jun、p—p38及p—ERKl／2蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．05），而采用抗氧化剂白藜芦醇（RES）预处理2h后，这-作用被逆转。结论P13-K／Akt和MAPKs信号通路可能参与ROS介导的HUVEC细胞凋亡。

乳腺癌组织染色体17p13的杂合性缺失分析

目的检测乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３区各位点的杂合性缺失。用方法通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析ＶＮＴＲ探针ＹＮＺ２２的杂合性缺失。用ＰＣＲ扩增微卫星重复序列后，同位素标记、变性胶分离分析微卫星ｍａｒｋｅｒ的杂合性缺失。结果１１例乳腺癌组织中有３例在染色体１７ｐ１３．３区有杂合性缺失，占２７％。缺失的上限为紧邻端粒的Ｄ１７Ｓ１８６６位点，缺失至Ｄ１７Ｓ１８４０位点，缺失的下限尚待确定。位于染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点有１例变化产生新长度的微卫星重复序列，４例存在杂合性缺失，其中２例在１７ｐ１３．３区也有杂合性缺失。结论乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３．３区有较高的杂合性缺失。预示该区可能存在有关的抑癌基因。１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点也有变化。

喉鳞癌9p13-23区域微卫星杂合性缺失精细作图及其临床意义

背景与目的:微卫星(microsatellite)是广泛分布于生物基因组中的DNA重复序列,与许多重要基因紧密连锁。在肿瘤中微卫星象抑癌基因一样常常发生杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)。在某些特定肿瘤中有些微卫星位点存在高频发的LOH“热点”,而与该肿瘤发生、发展相关的抑癌基因很可能就隐藏在这些“热点”附近。微卫星LOH的研究是寻找新的抑癌基因的重要方法。本研究旨在探讨喉鳞癌9p13-23区域微卫星LOH的热点及其与喉鳞癌患者临床病理特征的关系。方法:采用显微切割法从喉鳞癌组织石蜡切片中挑取肿瘤组织,苯酚氯仿抽提肿瘤组织和外周血淋巴细胞基因组DNA,应用9p13-23区域13个多态性微卫星标记对42例喉鳞癌组织及其相应的外周血淋巴细胞DNA进行PCR扩增和变性凝胶电泳,并对频发微卫星LOH的发生与喉鳞癌患者临床病理特征的关系进行比较分析。结果:(1)42例喉鳞癌组织9p13-23区域微卫星LOH的发生率是97.6%(41/42),LOH发生率最高者是位于9p22-23的D9S162(89.5%),其次是位于9p21的D9S171(80.0%),与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅50.0%;(2)等位基因缺失作图发现42例喉鳞癌组织在9p13-23上存在两个明显的LOH较小区域,分别位于9p21的D9S161～D9S171之间和9p22-23的IFNA～D9S162之间;(3)年龄<60岁。

TRPM7-P13K在治疗性浅低温（34℃）处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用

目的在离体大鼠心肌缺血一再灌注模型中，检测常温下心肌缺血-再灌注损伤后TRPM7的表达水平变化以及治疗性浅低温（34qc）在心肌缺血-再灌注中对TRPM7的影响及其与P13K通路的关系。方法SPF清洁级健康成年雄性SD大鼠108只，随机分为六组，每组18只，SHAM组：正常大鼠组；UR组：37℃灌流液灌流大鼠心脏30min，缺血30min，37℃灌注液再灌注120min；VR＋2-APB组：37℃灌流液灌流30rain，缺血30min，灌注液中加2-APB后行37℃灌注液再灌注120min；34H＋I／R组：37℃灌流液灌流30min，缺血30min，34℃灌注液再灌注120min；34H＋L／R＋WORT组：37℃灌流液灌流30rain，缺血30min，在灌注液加womannin后行34℃灌注液再灌注120min；34H＋L／R＋2-APB组：37℃灌流液灌流30min，缺血30min，在灌注液中加2-APB后行34℃灌注液再灌注120min。以压力换能器连接Medlab生物信号采集系统记录平衡灌流30rain末（哟，基础值），再灌注30min（T1），60min（T2），90min（T3），120min（T4）各时间点的心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压上升／下降最大速率（±do／dtmax）。在再灌注120min末，取心脏进行HE染色观察心肌损伤，WesternMot测定TRPM7蛋白含量，并测定TTC染色后的心肌梗死面积。结果UR组TRPM7的表达量升高（P〈0．05），心肌梗死面积明显增多（P〈0．05）；L／R＋2-APB组与SHAM组和I／R组比较，TRPM7表达量明显减少（P〈0．05），心肌梗死面积与I／R组比较明显减少（P〈0．05）；34H＋VR组TRPM7的表达量与SHAM组和UR组相比明显减少（P〈0．05），心肌梗死面积与L／R组相比明显减少（P〈0．05）；34H＋I／R＋WORT组TRPM7表达量与34H＋L／R组相比增多（P〈0．05），心肌梗死面积与34H＋L／R组相比有所增加（P〈0．05）；34H＋L／R＋2-APB组TRPM7表达量与34H＋∥R组相比差异无统计学意义（P〉0．05），与34H＋L／R＋WORT组相比其TRPM7表达量减少（P〈0．05）；34H＋VR＋2-APB组心肌梗死面积与34H＋L／R组相比差异无统计学意义（P〈0．05），与34＋I／R＋WORT组相比，其心肌梗死面积减小（P〈0．05）。各组之间血流动力学变化差异无统计学意义（P〈0．05）。结论在离体心肌缺血-再灌注模型中，心肌缺血-再灌注损伤时TRPM7蛋白呈现高表达；治疗性浅低温（34℃）可以抑制心肌缺血一再灌注中TRPM7的高表达，并且这种保护作用是通过P13K通路介导产生的。

西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌患者组织PTEN及P13K表达的影响

目的探讨西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案对老年结肠癌患者组织抑癌基因PTEN及P13K表达的影响。方法选取2013年10月~2015年7月浙江省台州医院收治的结肠癌老年患者62例,按治疗方法不同分组,对照组（n=27）采用单纯FOLFOX4方案化疗,研究组（n=35）在FOLFOX4化疗方案基础上给予西妥昔单抗治疗,疗程均为4个周期,对比2组间临床疗效,治疗前后采用免疫组化测定病理组织PTEN及P13K表达状况。结果研究组有效率（51.4%）与对照组有效率（44.4%）,研究组疾病控制率（80.0%）与对照组疾病控制率（62.9%）比较差异均无统计学意义（χ2=0.298,P=0.585;χ2=2.223,P=0.136）。在组织PTEN及P13K表达上,研究组治疗后PTEN阳性率显著高于对照组（82.86%vs.59.26%,P〈0.05）,治疗后P13K阳性率显著低于对照组（37.14%vs.62.96%,P〈0.05）。结论采用西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗老年结肠癌能提高组织PTEN表达,降低P13K表达,效果显著。

染色体12p13的rs12425791位点基因多态性与急性缺血性卒中短期预后的关系

目的：探讨染色体12p13的rs12425791位点基因多态性与急性缺血性卒中（AIS）短期预后（1年）的关系。方法选择401例AIS患者，运用PCR-RFLP法检测染色体12p13的rs12425791位点基因型，患者出院后随访1年，观察患者死亡和再发缺血性卒中情况。运用Logistic回归模型分析个体基因型和脑卒中预后的关系。结果401例AIS患者中，有31例发生死亡和复发卒中。在校正了年龄、性别和病史等因素后，Logistic回归分析结果显示，rs12425791纯合子突变（AA型基因）的AIS患者1年内发生死亡或再发卒中的危险度较高，是GG型基因患者的2．602倍（95％CI1．216～5．564）。结论染色体12p13的rs12425791位点纯合子突变是AIS患者短期预后不良的独立危险因素。

s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用研究

目的探讨s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用。方法选取上海生命科学研究院细胞资源中心的HepG2肝癌细胞作为研究标本,随机分为阴性对照组、阳性对照组和观察组,并比较三组间HepG2肝癌细胞的增殖、凋亡情况以及HepG2肝癌细胞自噬相关标记物记LC3B和Bclin1表达水平。结果 s腺苷蛋氨基酸作用24 h、48 h和72 h时抑制HepG2细胞增殖的IC_(50)分别为24.34μmol/L、10.26μmol/L、6.24μmol/L,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率分别为(26.28±1.34)%、(22.34±1.82)%和(11.18±0.60)%,而阴性对照组其HepG2细胞48 h后的凋亡率为(6.28±0.02)%,即观察组凋亡率随着药物浓度的增高而降低,且与阴性对照组比较,观察组各浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48h后出现的凋亡率均明显较高,即s腺苷蛋氨基酸具有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.05);经流式细胞仪结果显示,不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后其LC3B和Bclin1水平均呈逐渐降低(P<0.05)。结论 s腺苷蛋氨基酸可通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控进一步增强HepG2肝癌细胞自噬作用。

家蚕生长阻遏肽结合蛋白与杆状病毒P13蛋白互作关系的研究

为探明生长阻遏肽结合蛋白(Growth blocking peptide binding protein,GBPBP)与杆状病毒P13蛋白的互作关系,以家蚕Bombyx mori Linnaeus为供试昆虫,采用GST pull-down试验的方法,检测了家蚕生长阻遏肽结合蛋白(BmGBPBP)与黏虫核型多角体病毒P13蛋白(LsP13)间的相互作用。结果表明,GBPBP蛋白与P13蛋白发生了结合反应,暗示两者生理功能之间具有一定的联系。

过表达miRNA-217由P13/AKT信号通路促进膀胱癌T24细胞增殖作用

目的研究miRNA-217是否通过P13/AKT信号通路上调E2F3促进膀胱癌T24细胞增殖作用。方法收集2017年12月至2018年4月收治的64例膀胱癌患者临床组织。QRT-PCR分别肿瘤组织和癌旁组织中miRNA-217的表达;Western blot检测肿瘤组织和癌旁组织中PI3K、P-AKT、E2F3表达;转染过表达载体miRNA-217上调T24细胞中miRNA-217的表达作为RSK4-miRNA-217组,空白载体microRNA-NC转染T24细胞为RSK4-NC组,以未转染的细胞为空白对照组。qRT-PCR检测3组细胞miRNA-217的表达;CCK-8及平板克隆形成实验、裸鼠皮下荷瘤模型检测3组细胞的增殖及克隆形成能力及成瘤能力;荧光素梅实验观察miRNA-217和PI3K的关系;Western blot检测3组细胞中PI3K、P-AKT、E2F3的表达。结果肿瘤组织中miRNA-217、PI3K、P-AKT和E2F3的表达高于癌旁组织;与空白对照组和RSK4-NC组比较,RSK4-miRNA-217组细胞OD450、细胞克隆数明显增加,移植瘤体积明显增大(P<0.05),空白对照组和RSK4-NC组间差异无统计学意义(P>0.05);经预测发现miRNA-217和PI3K有互补结合序列,双荧光素酶报告实验证实两者的靶向结合关系;与空白对照组和RSK4-NC组比较,RSK4-miRNA-217组细胞PI3K、p-AKT、E2F3蛋白表达明显升高(P<0.05),在空白对照组和RSK4-NC组细胞中差异无统计学意义(P>0.05)。结论miRNA-217通过P13/AKT信号通路上调E2F3从而促进膀胱癌T24细胞增殖作用。

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。

植物乳杆菌Saccharomy cescerevisiae P13对大黄鱼的促生长作用研究

[目的]研究植物乳杆菌Saccharomyces cerevisiae P13对大黄鱼生长和抗病能力的影响.[方法]用合0、104、106、108、1010cfu/kg植物乳杆菌Saccharomyces cerevisiae P13含量的饲料喂养大黄鱼4周后,测定大黄鱼的体重增长率、饲料转化率和感染病菌后的存活率.[结果]大黄鱼后肠中的Saccharomyces cerevisiae P13菌数量在喂食过程中显著增加,含106～1010 cfu/kg Saccharomyces cerevisiae P13的配方饲料明显促进了大黄鱼的体重增长率和摄食率.喂食含106～ 1010cfu/kg Saccharomyces cerevisiae P13的配方饲料后大黄鱼对Streptococcus sp.的抵抗力明显增强.[结论]植物乳杆菌Saccharomyces cerevisiae P13能促进大黄鱼生长,并增强大黄鱼的抗病力.

壮族人群缺血性卒中与染色体12p13基因多态性的关联研究

目的研究染色体12p13 rs11833579单核苷酸多态性(SNP)位点在壮族人群的分布,进一步分析该位点与壮族人群缺血性卒中易感风险关联的影响。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法检测178例壮族缺血性卒中患者和179例壮族健康对照者rs11833579位点的基因型。结果壮族人群缺血性卒中与SNP位点rs11833579的基因型在病例组和对照组间的分布无统计学差异(P>0.05)。结论染色体12p13上rs11833579可能不是壮族人群缺血性卒中的遗传易感风险因素。

P13K／Akt信号通路与肝纤维化

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时，以胶原为主的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肝内大量沉积的病理过程。肝星状细胞（hepaticstellate cell，HSC）在肝纤维化形成过程中居核心地位。在各种因素作用下，肝细胞、Kupffer细胞、内皮细胞和星状细胞自身可产生多种细胞因子与活化产物等，这些因子可以通过各种信号通路调节HSC的功能，P13K／Akt是其中重要的一条通路。

瓶霉Phialophora sp.P13木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析

从瓶霉Phialophora sp.P13菌株中克隆得到一个11家族的木聚糖酶基因,命名为xyn11P13。该基因ORF全长705 bp,共编码234个氨基酸和一个终止密码子,N端19个氨基酸为预测的信号肽序列。成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达,在摇床水平上木聚糖酶XYN11P13的表达量为11.8 U/mL。XYN11P13的最适pH为5.5,在pH 3.5～7.0可以保持80%以上的酶活性,在pH 4.0～10.0具有良好的pH稳定性。最适作用温度为65℃,并在60℃条件下保持稳定。以榉木木聚糖为底物,XYN11P13的比活,Km及Vmax值分别为205.3 U/mg,2.73 mg/mL,399.6μmol/min/mg。多数金属离子对XYN11P13酶活力没有明显的影响。因此,XYN11P13具潜在优势应用于食品与动物饲料工业。

17p13染色体上抑癌基因的研究进展

抑癌基因(tumor suppressor gene)也称抗癌基因(antloneogenes)，是一类可以抑制细胞增殖并能潜在抑制癌变的基因。但由于抑癌基因属于隐性癌基因，所以它的发现与分离难度较大。至今被确认的癌基因只有10多个。近年来，随着肿瘤的发生率日趋增高，人们对于抑癌基因的研究越来越重视，有关抑癌基因的定位、克隆。

乳腺癌化疗后继发伴t(8;16)(p11;p13)易位的急性髓系白血病1例报道

伴t（8;16）（p11;p13）易位的急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia,AML）是一种非常罕见的白血病亚型,主要分子机制为位于染色体8p11的MYST3（MOZ）基因和位于16p13的CREBBP（CBP）基因发生断裂重排而致使细胞发生致瘤性转化。该染色体易位多见于治疗相关性AML（t-AML）患者,具有独特的临床及实验室特征,目前国内尚未检索到文献报道,现报告我们发现的1例乳腺癌化疗后继发伴（t8;16）（（p11;p13）易位的t-AML患者,并结合文献进行复习。