DLC-1、FAK及p130Crk相关底物在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的:研究肝癌缺失基因-1(DLC-1)、粘着斑激酶(FAK)及p130Crk相关底物(p130Cas)在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化法检测正常卵巢和卵巢癌组织中DLC-1、FAK和p130Cas蛋白的表达。结果:卵巢癌组织中DLC-1蛋白表达低于正常卵巢组织(P<0.05);FAK和p130Cas蛋白的表达均高于正常卵巢组织(P<0.05)。DLC-1蛋白的低表达与卵巢癌的临床分期、腹水和淋巴结转移相关。FAK蛋白的高表达与卵巢癌的分化程度、腹水和淋巴结转移相关。p130Cas蛋白的高表达与卵巢癌的临床分期和淋巴结转移有关。卵巢癌中DLC-1与FAK和p130Cas的蛋白表达之间均呈负相关。结论:DLC-1低表达或表达缺失和FAK及p130Cas的高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关。DLC-1和FAK及p130Cas的联合检测有助于判断卵巢癌的恶性程度。

卵巢上皮性癌组织中肝癌缺失因子-1和Crk相关底物的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中肝癌缺失基因-1(DLC-1)和Crk相关底物(p130Cas)的表达及其与卵巢上皮性癌发生发展的关系。方法:分别采用RT-PCR和免疫组织化学技术检测卵巢上皮性癌组织和正常卵巢组织中DLC-1和p130CasmRNA及蛋白的表达。结果:卵巢上皮性癌组织中DLC-1mRNA和蛋白的表达低于正常卵巢组织(t=3.284,χ2=14.903,P<0.05),p130CasmRNA和蛋白的表达高于正常卵巢组织(t=27.196,χ2=24.955,P<0.05)。DLC-1mRNA和蛋白的表达与临床分期(t=3.156,χ2=4.846,P<0.05)、淋巴结转移(t=2.944,χ2=5.939,P<0.05)和腹水(t’=2.470,χ2=6.074,P<0.05)有关,p130CasmRNA和蛋白的表达与临床分期(t’=2.404,χ校2正=5.597,P<0.05)和淋巴结转移[t’(P)=2.507(0.018),P=0.021]有关。卵巢上皮性癌组织中DLC-1和p130CasmRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.375,P=0.015;rP=0.330,P=0.006)。结论:DLC-1和p130Cas可能与卵巢上皮性癌的发生、浸润和转移密切相关,且二者在卵巢上皮性癌发生发展中可能存在负调控作用。

脂肪组织中IRS-1相关的PI3K活性在多囊巢综合征胰岛素抵抗中的作用

【目的】探讨多囊卵巢综合征(PCOS)脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(IRS-1-Associcrted-PI3K)的活性在PCOS发病中的作用。【方法】PCOS患者和对照者根据体质量指数(BMI)分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组、肥胖对照组和非肥胖对照组,各12例,采用免疫沉淀、薄层层析、放射自显影半定量检测脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性。【结果】脂肪组织中IRS-1-Associated PI3K活性在PCOS肥胖组为55%±24%,较非肥胖对照组84%±16%明显降低(P<0.001);肥胖对照组为46%±22%,PCOS非肥胖组为71%±26%,均较非肥胖对照组明显降低(P<0.001和P<0.05),PCOS肥胖组和肥胖对照组之间以及PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组之间的差异均无显著性意义(P>0.05)。【结论】PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显减弱,可能抑制胰岛素受体后的信号传导,并与PCOS胰岛素抵抗的发生有关。

碘油羟基磷灰石纳米粒对兔VX2肝肿瘤Paxillin和P130Cas表达的影响

目的研究碘油羟基磷灰石纳米粒(nHAP)经肝动脉灌注治疗对兔VX2肝肿瘤转移相关基因Paxillin(桩蛋白)和P130Cas表达的影响。方法将100只新西兰白兔肝内肿瘤种植后2周,随机分为5组,每组20只,设生理盐水组(A组)、nHAP组(B组)、单纯碘油组(C组)、阿霉素碘油组(D组)和碘油nHAP组(E组)。经肝动脉灌注给药后2周,采用免疫组织化学和Western blotting检测这两个基因在蛋白水平的表达。结果两种方法结果均提示:兔VX2肝肿瘤中Paxillin呈低表达而P130Cas呈高表达。与A组相比,C组和D组残余肿瘤区的Paxillin表达降低,而E组表达则显著升高(P<0.05);与A组相比,C组和D组残余肿瘤区的P130Cas表达升高,而E组表达则显著降低(P<0.05)。结论兔VX2肝肿瘤中Paxillin的低表达和P130Cas的高表达可能与其高转移性有关。单纯碘油及阿霉素碘油经肝动脉治疗可降低Paxillin的表达,而碘油nHAP可升高其表达;单纯碘油及阿霉素碘油经肝动脉治疗可升高P130Cas的表达,而碘油nHAP可降低其表达。提示碘油nHAP可能可以抑制VX2肿瘤的转移。

Beclin1、p62和Ki-67在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及意义

目的探讨自噬相关蛋白(Beclin)1、自噬底物蛋白(p62)和增殖指数(Ki-67)在乳腺浸润性导管癌(IDC)患者中的表达及意义。方法选取沈阳医学院附属中心医院病理科IDC标本79例作为实验组,随机选取20例相应距肿瘤组织5 cm以上的正常乳腺组织为对照组,采用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶链接法(SP)检测两组中Beclin1、p62和Ki-67的表达水平,分析3种因子与IDC临床病理学参数的关系。结果实验组Beclin1阳性表达率[44.3%(35/79)]明显低于对照组[100%(20/20),P<0.05];p62和Ki-67阳性表达率分别[58.2%(46/79)、51.8%(41/79)]明显高于对照组[10%(2/20)、5%(1/20),P<0.01]。实验组中Beclin1和p62阳性表达与组织学分级及淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者发病年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。实验组Ki-67阳性表达与组织学分级相关(P<0.01),而与患者发病年龄、肿瘤大小及淋巴结是否转移无关(P>0.05)。实验组中Beclin1与p62和Ki-67呈负相关(P<0.01),p62和Ki-67呈正相关(P<0.01)。结论 Beclin1、p62和Ki-67蛋白异常表达可能与乳腺癌恶性程度分级及侵袭力有关。

Rac1和Pak1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨胃癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras related C3 botulinum toxinsubstrate 1,Racl)和p21蛋白活化激酶1(p21-activated kinase 1,Pak1)蛋白的表达特点及其与胃癌侵袭、转移的关系。方法:收集60例胃癌及20例癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学方法检测Rac1和Pak1的蛋白表达水平。结果:在胃癌组织中Rac1和Pak1的表达阳性率均高于周围正常组织(P<0.05);Rac1和Pak1的表达呈正相关(r=0.383,P<0.01),它们的表达均与肿瘤分化程度、浸润深度、Lauren分型和有无淋巴结转移有关。结论:Rac1和Pak1的表达与胃癌浸润、转移密切相关,并有可能作为反映其生物学行为的一种新型标志物。

miR-223-3p通过靶向RAC1调控肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-223-3p通过调控Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:选用2016年8月至2018年8月吉林市中心医院手术切除的30例HCC组织及其癌旁组织标本和人HCC细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2及人正常肝细胞QSG-7701,用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor和siRAC1转染至SMMC-7721细胞,通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p与RAC1的靶向关系,Western blotting检测细胞中RAC1蛋白的表达水平。结果:miR-223-3p在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关(P<0.05或P<0.01);miR-223-3p在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701细胞(均P<0.01),以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1是miR-223-3p靶基因,miR-223-3p靶向负调控RAC1的表达。转染miR-223-3p mimics显著抑制SMMC-7721细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05或P<0.01),并促进细胞凋亡(P<0.01);转染miR-223-3p inhibtor则逆转miR-223-3p mimics对细胞的抑制作用。结论:过表达miR-223-3p抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡,其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。

采用比较蛋白质组学方法研究p38β激酶对293T细胞蛋白质表达的影响

采用比较蛋白质组学方法研究了过表达p38信号通路激酶p38β对人类肿瘤细胞293T细胞蛋白质表达的影响,利用双向电泳和质谱技术分离鉴定了13个差异表达蛋白质.这些差异蛋白的分布从细胞质膜到核,其功能涉及核酸、蛋白质、糖脂类分子的转录、合成和成熟,细胞物质跨膜运输,细胞周期调控以及细胞防御等.文献分析并没有发现上述鉴定的差异表达蛋白是p38β激酶现有直接底物的证据,提示其可能为新的p38β激酶相关蛋白.这些结果表明,比较蛋白质组学方法是寻找激酶新靶标的一种有效工具.

miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。

PTEN、P130Cas与皮肤瘢痕癌上皮间质转化的关系研究

目的探讨磷酸酯酶及张力蛋白同源物(PTEN)、P130 Crk相关底物(P130Cas)与瘢痕癌上皮间质转化(EMT)的关系。方法收集8例瘢痕癌患者的瘢痕癌、癌旁瘢痕和正常皮肤组织,采用免疫组织化学法(S-P法)检测正常皮肤、瘢痕、瘢痕癌组织中PTEN、P130Cas、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果 PTEN、P130Cas、E-cadherin在瘢痕癌、瘢痕、正常皮肤组织的表达水平差异均有统计学意义(P <0. 05); Vimentin在正常皮肤、瘢痕组织内呈阴性表达,两者差异无统计学意义(P> 0. 05),但与瘢痕癌组织相比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。PTEN与P130Cas在瘢痕癌中的表达呈负相关(r=-0. 78,P=0. 023);瘢痕癌中E-cadherin的表达与PTEN的表达呈正相关(r=0. 83,P=0. 011),与P130Cas呈负相关(r=-0. 74,P=0. 035),PTEN、P130Cas与Vimentin的表达不相关。结论 PTEN与P130Cas可能通过影响上皮间质转化现象在瘢痕恶变过程中起重要作用。

参黛清肠汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜保护作用及机制探讨

目的观察参黛清肠汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道黏膜的保护作用,并探讨其机制。方法55只C57BL/6小鼠以2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)灌胃3个周期诱导建立UC模型,建模成功后随机分为5组,另10只C57BL/6小鼠记为正常组。美沙拉嗪组予以200 mg/kg小鼠体质量的美沙拉嗪溶于1 mL/100 g小鼠体质量生理盐水中灌胃,参黛清肠汤低、中、高剂量组分别予以15、30、60 mg/kg参黛清肠汤同法灌胃,模型组和正常组均予以等量生理盐水灌胃,1次/d,给药2周。干预后评价各组疾病活动指数(disease activity index,DAI)和肠道黏膜损伤指数(colonic mucosal damage index,CMDI);苏木素-伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变;酶联免疫法检测肠道黏膜组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时反转录荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting,WB)分别检测肠道黏膜组织Ras同源基因家族A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac-1)、p21激活激酶1(PAK-1)、核转录因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果HE染色证实UC小鼠建模成功;模型组DAI和CMDI评分,肠道黏膜组织IL-1β、TNF-α含量,肠道黏膜组织RhoA、ROCK-1、NF-κB mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均低于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),模型组肠道黏膜组织Rac-1、PAK-1 mRNA及蛋白表达均低于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均高于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),且参黛清肠汤中剂量组与美沙拉嗪组差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组肠道黏膜组织病理改变严重,美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组病理改变均减轻,且参黛清肠汤高剂量组效果最佳。结论参黛清肠汤能减轻UC小鼠病变,保护肠道黏膜组织,减轻炎症损伤,推测与抑制RhoA/ROCK通路,下调RhoA、ROCK-1与NF-κB表达,上调Rac-1、PAK-1表达有关。

补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13通过盐诱导激酶1/环磷酸腺苷调节转录共激活因子2通路参与高糖诱导的人肝窦内皮细胞滤过功能障碍

目的探讨血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)参与高糖诱导的人肝窦内皮细胞(HLSEC)滤过功能障碍的分子机制。方法体外培养HLSEC,构建慢病毒CTRP13过表达载体(LV-CTRP13)并感染HLSEC,依据不同处理条件将细胞分为正常对照(5.5 mmol/L葡萄糖,NC)组、高糖(25 mmol/L,HG)组、NC+LV-CTRP13组、HG+LV-CTRP13组、NC+空载对照(LV-CON)组、HG+LV-CON组、HG+LV-CTRP13+盐诱导激酶1(SIK1)抑制剂(HG-9-91-01)组、HG+LV-CON+HG-9-91-01组、HG+LV-CTRP13+环磷酸腺苷调节转录共激活因子2(CRTC2)抑制剂(GW4064)组、HG+LV-CON+GW4064组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting法检测CTRP13、SIK1、CRTC2、P130 Crk相关底物(P130Cas)的mRNA及蛋白表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。结果与NC组相比,HG组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低,CRTC2的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。与HG+LV-CON组相比,HG+LV-CTRP13组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达升高,CRTC2的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-CTRP13组相比,HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组CRTC2的mRNA和蛋白表达升高,而SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-CTRP13组相比,HG+LV-CTRP13+GW4064组CRTC2的mRNA和蛋白表达降低,P130Cas的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论CTRP13、SIK1、CRTC2、P130Cas参与了高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍,CTRP13过表达可以抑制高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍,这一机制是通过SIK1/CRTC2通路实现的。

结直肠癌组织中Vav1、Rac1、CyclinD1、p21表达的意义

[目的]通过检测Vav1、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析Vav1蛋白与Rac1、Cyclin D1、p21的关系及意义。[方法]180例结直肠癌肿瘤组织和162例癌旁组织的石蜡组织标本进行免疫组化染色,检测肿瘤组织和癌旁组织中Vav1、Rac1、Cyclin D1、p21蛋白表达。[结果]结直肠癌肿瘤组织中Vav1、Rac1、Cyclin D1蛋白表达高于癌旁组织,p21蛋白在癌组织表达低于癌旁组织(P<0.05)。Vav1蛋白表达与肿瘤的浸润深度、分化情况及淋巴结转移有关;Rac1与肿瘤的分化情况、淋巴结转移有关;Cyclin D1表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。Spearman相关分析显示,肿瘤组织中Vav1蛋白表达与Rac1、Cyclin D1蛋白呈正相关,与p21负相关(P<0.05)。[结论]Vav1在结直肠癌组织中的表达与肿瘤增殖的指标有关,可能通过调节Rac1、Cyclin D1、p21促进肿瘤的生长。

miR-4695-5p在结直肠癌患者血清中的表达及其对结直肠癌细胞增殖和侵袭的作用机制研究

目的探讨微小RNA(microRNA)-4695-5p在结直肠癌患者血清中的表达及其对结直肠癌CACO-2细胞增殖与侵袭的影响。方法选取2018年3月—2021年11月郑州大学附属洛阳市中心医院胃肠外科收治的结直肠癌患者血清标本43例,以43例门诊体检健康者的血清为对照。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测结直肠癌患者血清和体检健康者血清中的相对表达量。将miR-4695-5p过表达质粒或阴性对照质粒转染CACO-2细胞,即miR-4695-5p组和对照组,qRT-PCR验证转染效率。CCK8法及Transwell实验分别检测过表达miR-4695-5p对CACO-2细胞增殖及侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4695-5p与Ras相关的C3肉毒素底物1(RAC1)的靶向结合关系。qRT-PCR和Western blotting分别检测过表达miR-4695-5p对RAC1基因及Wnt/β-Catenin信号通路蛋白表达的影响。采用SPSS 28.0软件进行统计分析。正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析。结果结直肠癌患者血清中miR-4695-5p表达水平明显低于体检健康者(P<0.01)。对照组和miR-4695-5p组中miR-4695-5p相对表达量分别为1.09±0.65和8.83±2.03,miR-4695-5p组CACO-2细胞中miR-4695-5p表达水平是对照组的8.10倍,过表达miR-4695-5p的CACO-2细胞构建成功(P<0.01)。与对照组比较,miR-4695-5p组CACO-2细胞的增殖能力明显下降(P<0.05),CACO-2细胞的侵袭能力明显降低(P<0.01)。生物信息学工具和双荧光素酶报告基因实验证实miR-4695-5p能够与RAC1靶向结合(P<0.01)。与对照组相比,miR-4695-5p组RAC1基因表达明显下降(P<0.01),Wnt/β-Catenin信号通路蛋白Wnt3a、β-catenin、c-MYC表达显著下降。结论miR-4695-5p在结直肠癌患者血清中呈低表达状态,miR-4695-5p通过靶向抑制RAC1基因表达下调Wnt/β-Catenin信号通路活性,从而抑制结直肠癌CACO-2细胞的增殖与侵袭。

M3型乙酰胆碱受体对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达及机制

目的探讨M3型乙酰胆碱受体（M3R）对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（IX-SMA）的表达影响及其机制。方法体外分离培养大鼠心脏成纤维细胞，Western blot法测定仅．SMA、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）和Ras相关c3肉毒素底物1（Racl）的表达；谷胱甘肽巯基转移酶沉淀实验（GSTPull．down）法检测Racl的活性。结果乙酰胆碱（1．0×10-7、1．0×10-1、1．0×10-5mol／L，2h）呈浓度依赖性促进α-SMA的表达上调（P〈0．05），M3R特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶（4-DAMP）抑制乙酰胆碱（Ach）介导的α--SMA表达上调（1．432±0．093比2．534±0．241，P〈0．05）；M3R促进p-p38表达上调（171％，P〈0．05），p38特异性抑制剂SB203580抑制M3R介导的α-SMA表达上调（1.614±0．128比2．873±0．193，P〈0．05）；M3R活化Racl（182％，P〈0．05），Racl特异性抑制剂NSC23766抑制M3R介导的p-p38表达上调（1．301±0．154比1．821±0．113，P〈0．05）。结论M3R通过激活Rael-p38信号通路促进心脏成纤维细胞α-SMA的表达。