PI3K p85α蛋白表达缺失对SW480细胞侵袭及转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α的表达对人大肠癌SW480细胞侵袭及转移的影响。方法:构建慢病毒PI3K p85α干扰载体并转染SW480细胞,通过划痕实验、Transwell实验及黏附实验,明确PI3K p85α表达变化对大肠癌细胞侵袭及转移的影响。结果:划痕实验结果显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞愈合能力下降;Transwell实验显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞迁移及侵袭能力下降;黏附实验显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞黏附能力降低。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可明显抑制大肠癌细胞株SW480侵袭及转移能力,PI3K p85α可能成为大肠癌基因治疗的新靶点。

PI3Ks新型抑制剂NVP-BEZ235对食管鳞癌的抑制作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)新型抑制剂NVP-BEZ235(Dactolisib)对食管鳞癌体内外模型的抑制作用,为食管鳞癌的靶向治疗提供参考。方法采用免疫印迹(Western blot)法检测食管鳞癌细胞系中磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(PI3K-p85α)蛋白的表达情况;对食管鳞癌的细胞系分别给予0,1,4,8,16,32,64,128 nmol/L浓度的NVP-BEZ235,采用MTT法检测生长情况,计算细胞生存率及半数抑制浓度(IC50);对PI3K-p85α高表达及低表达的食管鳞癌细胞系分别予10 nmol/L NVP-BEZ235,观察细胞集落形成情况;建立裸鼠皮下移植瘤模型,评估NVP-BEZ235的体内治疗效果。结果PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1对NVP-BEZ235更敏感,IC50分别为4.92,5.43,4.76,7.78 nmol/L;而PI3K-p85α低表达的细胞系KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450对NVP-BEZ235的敏感度较低,IC50分别为13.21,18.44,20.37,48.45 nmol/L。加入10 nmol/L NVP-BEZ235进行的集落形成实验结果相似,KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1的集落数目少于KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450的集落数目。在裸鼠皮下移植瘤模型中,较低浓度(10 mg/kg)的NVP-BEZ235即可抑制食管鳞癌皮下移植瘤的生长。结论NVP-BEZ235对食管鳞癌细胞系和裸鼠移植瘤都有明显的抑制作用,在PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系中抑制效果更明显,在食管鳞癌中具有一定靶向性,可为后期的临床试验提供参考。

白藜芦醇通过PI3K p85/Akt信号轴抗HepG2肝癌细胞增殖

目的研究白藜芦醇对肝细胞癌细胞增殖的影响,并进一步研究其影响机制。方法以不同浓度(0、12.5、25.0和50.0μmol/L)的白藜芦醇分别处理对数生长期的HepG2细胞,采用CCK8法和实时细胞分析仪(RTCA)系统检测细胞的增殖情况。4组细胞处理48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p85、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、总蛋白激酶B(t-Akt)和细胞周期素A2(CyclinA2)蛋白的表达。结果白藜芦醇对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和白藜芦醇浓度的增高,HepG2细胞的活力越来越低。白藜芦醇作用48 h后,各个浓度白藜芦醇对细胞的抑制效应逐渐增大,且50.0μmol/L浓度下细胞的抑制效应最大。进一步的RTCA系统研究也发现,白藜芦醇对HepG2细胞的NCI值降低作用具有时间浓度依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,12.5、25.0和50.0μmol/L白藜芦醇可以诱导HepG2肝癌细胞发生细胞凋亡。Western-blot结果表明,与0μmol/L比较,12.5、25.0和50.0μmol/L白藜芦醇可以降低HepG2细胞内PI3K p85、p-AKT和CyclinA2蛋白的表达水平(P<0.05),但4组细胞内的t-Akt的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇可能通过PI3K p85/Akt信号轴来达到抗肝癌细胞增殖的作用,这为HCC的药物治疗提供了新的思路。

匙羹藤提取物干预KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的实验研究

目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3κ-p85、Cb1衔接蛋白(CAP)、葡萄糖转运蛋白4(GluT-4)mRNA水平。结果:与DM比较,FPG、Fins降低,ISI升高,PPAR-γmRNA、PI3κ-p85mRNA、CAPmRNA、GluT-4 mRNA表达量升高。结论:GS可上调脂肪组织PPAR-γ、PI3κ-p85、CAP、GluT-4mRNA的表达量,改善IR。

肉桂醛对糖尿病大鼠腓肠肌IRS-1和P85α表达的影响

目的:研究肉桂醛(Cin)降糖调脂作用及其对胰岛素受体底物1(IRS-1)和磷脂酰肌醇3激酶调节亚基P85α的影响。方法:Wistar大鼠,雄性,随机分为3组:正常对照组、糖尿病组(T2DM,高脂饮食诱导8周后,腹腔注射35mg/kg链脲佐菌素建立的糖尿病大鼠模型)和Cin+糖尿病组[T2DM+Cin,肉桂醛40mg/(kg·d),灌胃]。药物干预4周后,观察一般情况,检测体重、血糖血脂、胰岛素,采用免疫组化检测大鼠腓肠肌IRS-1和P85α蛋白水平。结果:实验末,T2DM+Cin组体重、血糖、胰岛素、甘油三酯、低密度脂蛋白均显著低于T2DM组(P<0.01),高密度脂蛋白高于T2DM组(P<0.05);T2DM+Cin组腓肠肌的IRS-1高于T2DM组,P85α低于T2DM组,差别有统计学意义(P<0.05)。结果:肉桂醛的降糖调脂作用可能与升高糖尿病大鼠腓肠肌中IRS-1和降低P85α水平有关。

FoxO转录因子

FoxO家族是转录调节因子 ,也是INS IGF 1信号通路中的关键分子。FoxO基因在进化上高度保守 ,其氨基酸序列中含有 3个高度保守PKB磷酸化基序。FoxO受PI3K PKB磷酸化级联通路的调节 ,其活性与磷酸化状态直接相关。FoxO对细胞增殖、细胞凋亡等生理过程有重要调节作用 。

桂皮醛抗糖尿病作用及其分子机制

目的 观察桂皮醛抗糖尿病的效果并探讨其药理机制.方法 将清洁级雄性Wistar大鼠40只分为正常对照组(8只,普通饮食),其余32只大鼠予高脂高糖饮食、链脲佐菌素,造成2型糖尿病成模大鼠(24只),分为糖尿病对照组、二甲双胍治疗组(200 mg·kg-1·d-1)和桂皮醛治疗组(40 mg·kg-1·d-1),每组8只.经药物干预4周后测各组体质量、空腹血糖、血脂、空腹血胰岛素并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用Western blot对血清及组织的视黄醇结合蛋白4(RBP4)、葡萄糖转运载体4(GLUT4)蛋白水平进行分析,免疫组织化学染色分析组织p85α和胰岛素受体底物1(IRSI)蛋白表达水平.结果 与糖尿病对照组比较,桂皮醛降糖、降脂、提高胰岛素敏感性效果明显[空腹血糖:(22.7±4.0)比(7.5±1.5)mmol/L;甘油三酯:(1.53±0.13)比(0.77±0.15)mmol/L;HOMA-IR:8.0±3.0比61.2±12.1,P<0.01];糖尿病组血清RBP4升高了1.68倍,GLUT4蛋白水平与正常对照组比较下调了33%～44%,差异有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组比较,桂皮醛明显降低了(28.6%)血清RBP4水平(P<0.05),下调肌肉p85a蛋白表达(0.51±0.05比0.43±0.04,P<0.05),同时上调IRSl蛋白表达(0.52±0.05比0.03±0.06,P<0.05),肝脏、肌肉和脂肪组织的GLUT4蛋白表达升高.结论 桂皮醛具有良好的降糖调脂、提高胰岛素敏感性的效果,其药理机制与降低血清RBP4水平以及调节肌肉组织p85α和IRSI蛋白表达有关.