s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用研究

目的探讨s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用。方法选取上海生命科学研究院细胞资源中心的HepG2肝癌细胞作为研究标本,随机分为阴性对照组、阳性对照组和观察组,并比较三组间HepG2肝癌细胞的增殖、凋亡情况以及HepG2肝癌细胞自噬相关标记物记LC3B和Bclin1表达水平。结果 s腺苷蛋氨基酸作用24 h、48 h和72 h时抑制HepG2细胞增殖的IC_(50)分别为24.34μmol/L、10.26μmol/L、6.24μmol/L,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率分别为(26.28±1.34)%、(22.34±1.82)%和(11.18±0.60)%,而阴性对照组其HepG2细胞48 h后的凋亡率为(6.28±0.02)%,即观察组凋亡率随着药物浓度的增高而降低,且与阴性对照组比较,观察组各浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48h后出现的凋亡率均明显较高,即s腺苷蛋氨基酸具有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.05);经流式细胞仪结果显示,不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后其LC3B和Bclin1水平均呈逐渐降低(P<0.05)。结论 s腺苷蛋氨基酸可通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控进一步增强HepG2肝癌细胞自噬作用。

乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质的影响

目的探讨乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质影响。方法选取健康SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只。采用改良Zea-Longa法复制大脑中动脉缺血大鼠模型(MCAO模型),MCAO模型复制成功后皮下注射利血平复制卒中后抑郁模型。对照组和模型组给予等剂量双蒸水灌胃;低剂量组于模型复制成功后第2天给予40 mg乌灵胶囊;高剂量组于模型复制成功后第2天给予80 mg乌灵胶囊,1次/d。各组大鼠灌胃21 d。采用Western blotting检测大鼠海马组织海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量;高效液相色谱法测定海马组织NE、DA和5-HT含量。结果模型组、低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分高于对照组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量低于对照组(P<0.05);而低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分低于模型组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量高于模型组(P<0.05)。结论乌灵胶囊可改善卒中后抑郁大鼠行为,且可调节海马P13K/Akt/mTOR通路,调节神经递质水平。

PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型胶质母细胞瘤及P13K/Akt/mTOR信号通路中的表达及其相关性

目的研究P13K/Akt/mTOR信号通路中PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型-突变型与野生型胶质母细胞瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测胶质母细胞瘤手术后组织标本共52例(其中IDH1突变型胶质母细胞瘤10例,IDH1野生型胶质母细胞瘤42例),检测PTEN和mTOR蛋白在这两种不同基因分型胶质母细胞瘤中的表达情况及相关性。结果PTEN蛋白在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的表达率分别为20.00%(2/10)和73.81%(31/42),mTOR蛋白的表达率分别为70.00%(7/10)及35.71%(15/42),PTEN和mTOR蛋白在IDH1两种基因分型的胶质母细胞瘤的表达差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。PTEN和mTOR的表达呈负相关关系(r=-0.724,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中两个位点调节因子PTEN及mTOR在IDH1突变型与野生型GBM中分别表达降低及增高,且两种蛋白表达呈负相关的关系,提示PTEN和mTOR在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的分子通路中扮演着重要的调控作用。

miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制

目的 探讨miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制。方法 收集2021年07月至2022年06月临床12例患者的痔核和正常肛周组织,通过qRT-PCR检测临床病理样本中miR-205-5p和ERBB3的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p与ERBB3的靶向关系。将miR-205-5p mimic、pcDNA-ERBB3、miR-205-5p inhibitor、sh-ERBB3、oe-ERBB3及阴性对照质粒分别或共同转染至痔疮模型大鼠和HUVEC细胞。HE、TUNEL染色观察组织病理和细胞凋亡情况,免疫组化检测ERBB3、VEGFR2蛋白定位及表达水平,Western blot检测ERBB3、VEGFR2、Cyclin D1、Cleaved-caspase 3、Bax、Bcl-2和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。MTT、划痕愈合、Transwell实验、流式细胞术、血管形成实验检测各组HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭能力、凋亡率和血管生成量。结果 痔疮临床样本中miR-205-5p呈低表达,ERBB3呈高表达(P <0.001),miR-205-5p与ERBB3(WT)的3'UTR靶向结合(P <0.001)。miR-205-5p mimic组痔疮大鼠和HUVEC细胞中ERBB3表达量显著降低(P <0.01,P <0.001),VEGFR2(P <0.001)、Cyclin D1(P <0.01)、Bcl-2(P <0.001)、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR(P <0.001)水平显著下调,Cleaved-caspase 3和Bax水平显著上调(P <0.01),大鼠肛周组织病理状况改善,HUVEC细胞增殖、迁移和侵袭力均降低(P <0.001),凋亡率升高(P <0.001),血管生成数量及分支减少(P <0.001),pcDNAERBB3逆转了这一效应(P <0.001)。结论 miR-205-5p能通过靶向抑制ERBB3表达,下调PI3K/AKT/mTOR通路活性,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,减少血管生成,从而缓解痔疮进展。

胡桃醌通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬的研究

目的:研究胡桃醌通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬,发挥其抗肺癌作用的机制。方法:MTT法检测胡桃醌对A549细胞存活率的影响。透射电镜和细胞自噬染色检测试剂盒(MDC)观察胡桃醌诱导A549细胞自噬。蛋白免疫印迹法检测自噬标志蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ和LC3I蛋白和自噬经典通路Akt/mTOR/p70S6K相关蛋白的表达水平。RT-PCR法检测A549细胞中Beclin-1和LC3ⅡmRNA表达水平。结果:MTT结果表明胡桃醌抑制A549细胞增殖,IC 50=10μmol/L;透射电镜和MDC实验发现胡桃醌可以诱导A549细胞产生自噬;与对照组相比,胡桃醌可以显著增加Beclin-1蛋白表达水平、LC3Ⅱ/LC3I比值和Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);胡桃醌干预后,与对照组相比,Akt、mTOR和p70S6K蛋白的表达水平基本不变,但Akt、mTOR和p70S6K磷酸化蛋白的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:胡桃醌可能通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬。

miR-30e-5p通过靶向PIK3CD介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨mi R-30e-5p通过靶向磷酸肌醇-3-激酶催化亚基δ肽(PIK3CD)介导磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制肝癌细胞的侵袭、迁移的机制。方法:将Hep G2通过转染相应质粒后分为对照组、miR-30e-5p mimics组、PIK3CD敲低组、阴性对照组、miR-30e-5p mimics+PIK3CD过表达组,实时荧光定量PCR和免疫印迹检测细胞miR-30e-5p、PIK3CD与PI3K/AKT/mTOR信号通路表达;CCK-8法检测各组细胞增殖率;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞迁移、侵袭情况;以免疫印迹实验检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9及E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。采用双荧光素酶报告实验检测miR-30e-5p对PIK3CD的靶向调节。结果:与对照组相比,mi R-30e-5p mimics组、PIK3CD敲低组增殖率、迁移率、侵袭数、PIK3CD蛋白与mRNA表达、N-cadherin、MMP2、MMP9、磷酸化PI3K、磷酸化AKT、磷酸化m TOR蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin表达升高(P<0.05)。过表达PIK3CD减弱了miR-30e-5p mimics对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,并升高PI3K/AKT/mTOR通过相关蛋白表达。miR-30e-5p可靶向下调PIK3CD表达。结论:上调miR-30e-5p可通过降低PIK3CD表达而阻止PI3K/AKT/mTOR信号激活,从而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

P13K／Akt／mTOR信号通路参与缺氧诱导因子-1α在急性胰腺炎大鼠的表达调节

目的探讨急性胰腺炎（AP）大鼠P13K／Akt/mTOR信号通路与HIF-1α表达的关系。方法56只雄性SD大鼠随机分为7组：空白对照组（n=8）、假手术组（n=8）、AP模型组（n=8）、wortmannin预处理组（n=8）、rapamycin预处理组（n=8）、wortmannin＋rapamycin预处理组（n=8）和溶剂对照组（n=8）。用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备大鼠AP模型，wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组分别于AP模型复制前30min腹腔注射wortmannin、rapamycin、wortmannin＋rapamycin DMSO／PBS溶液，溶剂对照组仅注射DMSO／PBS溶液。模型复制成功后6h处死大鼠取胰头部胰腺组织，应用Westernblot检测HIF-1α、Akt、P—Akt、p70^s6k、P—p70^s6k蛋白的表达。结果Akt、p70^s6k蛋白在胰腺组织中表达稳定，各组间差异无统计学意义（P〉0．05），HIF—1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白在空白对照组和假手术组中均有极少量阳性表达，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。AP模型组HIF-1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白含量与空白对照组相比明显升高（P〈0．01）；wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组中HIF-1α、P—p70^s6k蛋白表达明显高于空白对照组（P〈0．01），但较AP模型组明显降低（P〈0．01），其中HIF-1α蛋白表达在wortmannin＋rapamycin预处理组比wortmannin预处理组、rapamycin预处理组降低更明显（P〈0．05）。HIF-1α、P—Akt、P—p70“蛋白含量在溶剂对照组和AP模型组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论P13K／Akt／mTOR信号通路阻断剂wortmannin、rapamycin能够显著降低急性胰腺炎大鼠HIF-1α的表达，P13K／Akt／mTOR信号通路参与了HIF-1α的表达调控，P13K／Akt／mTOR信号通路可作为AP防治中的新靶点。

基于PI3K/AKT信号通路探讨PRDX4对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:分析过氧化物还原酶4(peroxiredoxin4,PRDX4)对食管鳞状细胞癌(esophagealcarcinoma,ESCC)细胞增殖和凋亡能力的调控作用及相关蛋白表达。方法:结合UALCAN、GEPIA和TCGA数据库预测PRDX4在ESCC中的表达及与病理特征及预后的关系。选取2010年8月至2023年8月潍坊医学院附属医院行食管癌(esophagealcarcinoma,EC)根治术治疗的60例ESCC患者的癌组织及癌旁组织为研究样本,分析组织样本中的PRDX4的表达水平。通过实时荧光定量PCR和免疫印迹法分析ESCC细胞中PRDX4的mRNA和相关信号分子蛋白的表达水平;此外,结合CCK-8实验、流式细胞术实验分析PRDX4对细胞的增殖和凋亡活动的影响。最终将体外实验结果通过裸鼠皮下瘤模型进行验证。结果:GEPIA和UALCAN数据库的数据表明,PRDX4在ESCC中表达异常增高,且与病理分期、分级和患者的生存率等有关。对ESCC细胞系PRDX4进行敲低和过表达后,PRDX4、p-PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Survivin蛋白表达分别表达降低和增高,细胞增殖和凋亡能力均受正相关调控;相较于sh-NC组、sh-PRDX4组裸鼠肿瘤的体积和质量降低。结论:PRDX4可基于P13K/AKT信号通路的激活对ESCC细胞的增殖和凋亡能力进行调控。

利多卡因通过调控miR-520a/AKT/mTOR/p70S6K通路对SH-SY5Y细胞自噬的影响

目的探讨利多卡因通过调控自噬对神经毒性的影响及相关分子机制。方法培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,MTT实验和乳酸脱氢酶(LDH)测定检测利多卡因对SH-SY5Y细胞活力和毒性的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-520a的相对表达;Western blot检测利多卡因对AKT/mTOR/p70S6K通路相关蛋白和自噬相关蛋白的影响;细胞免疫荧光染色评估LC3B的表达;生物信息学预测AKT1是miR-520a的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a和AKT1之间的相互作用。结果与对照组比较,SH-SY5Y细胞活力受到明显的抑制,且呈时间和剂量依赖性,LDH的释放量随利多卡因剂量增多而增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低,LC3B的荧光强度显著增强,miR-520a的表达显著增加,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-520ainhibitor组WT-AKT1的荧光素酶活性显著升高(P<0.05),而MUT-AKT1的荧光素酶活性没有变化(P>0.05)。与利多卡因组+NC inhibitor组比较,利多卡因+miR-520a inhibitor组SH-SY5Y细胞中miR-520a水平降低,LDH的释放量显著降低,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著降低,p62蛋白表达显著升高,LC3B的荧光强度显著降低(P<0.05)。结论利多卡因通过上调miR-520a的表达和抑制AKT/mTOR/p70S6K信号通路促进神经细胞自噬。

麻防犀角地黄汤通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR通路治疗银屑病的机制

目的 观察麻防犀角地黄汤对银屑病小鼠模型的影响,探讨麻防犀角地黄汤治疗银屑病的作用机制。方法 构建咪喹莫特银屑病小鼠模型,灌胃给药麻防犀角地黄汤,观察模型外观及组织病理学改变,Real time PCR检测皮损组织中microRNA-491-5p、PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达,Western blot检测皮损组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果 麻防犀角地黄汤能改善小鼠皮损、PASI评分、耳廓外缘厚度、组织病理、体质量等指标,上调microRNA-491-5p mRNA的表达,下调PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达量,抑制p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达,并表现出部分量效相关性。结论 麻防犀角地黄汤可能通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR信号通路在银屑病的治疗中发挥作用。

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h),经放疗处理(200 c Gy/min剂量照射5 min)后,用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,q PCR法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因PTEN的表达,WB法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:经放疗处理后,与对照组相比,敲减CK13后HNE1细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞中c-caspase-3和γH2AX的表达明显降低(均P<0.01)、p-AKT和p-S6K表达明显升高(P<0.01)、PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01)。敲减CK13+西罗莫司(PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂)处理可以回复敲减CK13导致的细胞增殖能力增强(P<0.05)和细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲减CK13通过下调PTEN蛋白水平进而增强PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,最终降低HNE1细胞的放疗敏感性。

基于P13K/Akt/mTOR信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗膝骨关节炎模型大鼠的作用机制

目的观察桂枝芍药知母汤对膝骨关节炎模型大鼠P13K/Akt/mTOR信号通路的作用,探讨桂枝芍药知母汤治疗膝骨关节炎的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、依托考昔组和桂枝芍药知母汤组,除空白组外,其他各组通过关节腔注射木瓜蛋白酶制定骨性关节炎模型。造模成功后,依托考昔组给予依托考昔片,桂枝芍药知母汤组给予桂枝芍药知母汤,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。观察大鼠膝关节关节软骨病理形态变化;ELISA检测血清中TNF-α、iNOS、iNOS的表达水平;Real time-PCR和Western bolt检测各组大鼠软骨中P13K、P13K0b、mTOR的基因和蛋白表达水平。结果模型组大鼠软骨组织表面粗糙,软骨细胞减少且排列不整齐,存在明显的软骨层脱落且脱落处有明显的炎性细胞浸润;依托考昔组和桂枝芍药知母汤组大鼠软骨层和软骨细胞脱落明显好转,脱落处炎性细胞浸润减少。与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、iNOS表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,依托考昔组和桂枝芍药知母汤组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、iNOS表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠软骨中P13K、Akt、mTOR的基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,依托考昔组和桂枝芍药知母汤组大鼠软骨中P13K、Akt、mTOR的基因和蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论桂枝芍药知母汤可通过上调P13K/Akt/mTOR信号通路改善膝骨关节炎模型大鼠的症状。

壮医药线点灸通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调节MMP对膝骨性关节炎大鼠的治疗作用

目的通过观察壮医药线点灸对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠的治疗效果,探讨磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路调节基质金属蛋白酶(MMP)影响KOA炎症反应作用机制。方法将60只大鼠随机为对照组、模型组、药线组,雌雄各一半,每组20只,模型组和药线组膝关节注射木瓜蛋白酶,建立大鼠KOA模型,对照组注射等量生理盐水,药线组进行壮医药线点灸治疗。体外培养大鼠膝骨关节软骨细胞,并分为正常组、实验组和实验+LY组,苏木素-伊红(HE)染色观察各组关节软骨组织形态变化,用免疫蛋白印迹法检测大鼠软骨组织及细胞中磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)、Akt、p-Akt、mTOR和MMP-13蛋白的相对表达量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量。结果对照组软骨细胞分布均匀,软骨层平整,滑膜结构完整;模型组软骨细胞减少且排列杂乱,软骨层不平整;药线组关节软骨边缘不平整,软骨细胞排列杂乱;药线组软骨细胞增生且分布不均,关节软骨表面不规则欠光滑。3组关节软骨关节液的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量差异均具有统计学意义(F=159.011,790.594,258.998;均P<0.05)。与模型组比较,对照组和药线组TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著降低(均P<0.05),且与对照组比较,药线组TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高(P<0.05)。建模成功后,3组关节软骨组织的PI3K、p-Akt、mTOR和MMP-13蛋白表达水平差异均具有统计学意义(F=200.099,462.172,28.451,583.269;均P<0.05);与模型组比较,对照组和药线组PI3K蛋白、p-Akt蛋白和mTOR蛋白的相对表达量均显著升高(均P<0.05),MMP-13蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),且与对照组比较,药线组PI3K蛋白、p-Akt蛋白和mTOR蛋白相对表达量均显著降低(均P<0.05),MMP-13蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。3组关节软骨细胞的PI3K、p-Akt、mTOR和MMP-13蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=223.826,137.457,30.455,273.428;均P<0.05),与正常组比较,实验组和实验+LY组PI3K、p-Akt和mTOR的蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05),MMP-13蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);且与实验组相比较,实验+LY组PI3K、p-Akt和mTOR的蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05),MMP-13蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论壮医药线点灸有效抑制炎症反应,其作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路调节MMP-13的表达有关。

黄芩苷通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症反应机制探究

目的:探究黄芩苷(baicalin)通过微RNA-23a-3p/磷酸酶与紧张素同源物/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR)抑制痛风性关节炎(GA)成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症反应的机制。方法:提取GA患者和正常人外周血辅助性T淋巴细胞(CD4^(+)T),购买正常人FLS,应用单钠尿酸盐结晶液刺激正常人FLS构建GA-FLS模型,细胞迁移(transwell)进行CD4^(+)T细胞与GA-FLS共培养,构建miR-23a-3p模拟物(miR-23a-3p mimics)转染至GA-FLS中;黄芩苷作用24 h、48 h和72 h后,细胞计数8(CCK8)检测细胞活力并选取最佳作用浓度和时间;实验分为正常组(GA-FLS)、对照组(CD4^(+)T+GA-FLS)、模型组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS)、黄芩苷组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+100μg/ml Baicalin)、miR-23a-3p-NC组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+miR-23a-3p-NC)、miR-23a-3p mimics组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+miR-23a-3p mimics)、黄芩苷miR-23a-3p mimics组(GA-CD4^(+)T+GAFLS+miR-23a-3p mimics+100μg/ml Baicalin);实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和免疫印迹(WB)检测miR-23a3p、PTEN、PI3K、AKT、mTOR的表达,酶联免疫吸附(ELISA)测定检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的表达。结果:CCK8检测结果显示黄芩苷最佳作用浓度和时间为100μg/ml、48 h。RT-qPCR和WB检测结果显示:模型组miR-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达较正常组、对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);而PTEN mRNA组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miRNA-23a-3p-NC组相比,miR-23a-3p mimics组miRNA-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达明显上升,PTEN mRNA的表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miR-23a3p mimics组相比,黄芩苷miR-23a-3p mimics组miRNA-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达明显下调,PTEN mRNA的表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。ELISA检测结果显示:模型组TNF-α、IL1β、IL-6的表达较正常组、对照组明显升高,而IL-10表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与miRNA-23a3p-NC组相比,miRNA-23a-3p mimics组TNF-α、IL-1β、IL-6的表达明显上升,IL-10表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miR-23a-3p mimics组相比,黄芩苷miR-23a-3p mimics组TNF-α、IL-1β、IL-6的表达明显下调,IL-10表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芩苷可通过下调miR-23a-3p,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,降低痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症反应。

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤,每年有超过100万人死于肺癌。PI3K/Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究,活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前景的领域。由于PI3K/Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶,因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是PI3K/Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性,mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路的分子基础做一综述,并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。

P13K／AKT／mTOR信号通路在乳腺癌Her-2治疗耐药中的作用研究进展

Her-2靶向治疗是Her-2过表达乳腺癌治疗的重要组成部分，但Her-2靶向治疗的耐药严重影响了乳腺癌的治疗。研究证实乳腺癌Her-2靶向治疗出现耐药的过程中有P13K／AKT／mTOR信号通路的激活，因此对P13K／AKT／mTOR信号通路及以P13K／AKT／mTOR信号通路为靶点的药物研究对乳腺癌治疗具有重要意义。

黄连素通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制高糖条件下的肾脏系膜细胞增殖

目的：探讨黄连素（berberine,BBR）对高糖条件下的大鼠肾脏系膜细胞 HBZY-1 cells （MCS）增殖的影响及其作用机制。方法将对数生长期细胞分成正常糖处理组（NG 组）,高糖组（HG组）和黄连素组（BBR组）。NG组细胞体系常规培养培养,HG 组细胞体系加入40 mmol/L 葡萄糖,BBR组细胞培养体系中加入40 mmol/L葡萄糖＋黄连素30μmol/L。各组细胞培养48 h 后,利用MTT检测各组HBZY-1细胞增殖；RT-PCR检测各组细胞p85,Akt和mTOR基因表达；West-ern blotting检测细胞中 p85、p-p85、Akt、p-Akt,mTOR 和 Collagen-Ⅳ蛋白的变化。结果 NG 组与HG组增值率分别为（25%±3%）和（75%±5%）,与 NG组增值率比较,HG组肾脏系膜细胞增殖率明显增高（P〈0.05）,p85与 Akt mRNA表达水平和蛋白水平均无明显变化（P＆gt;0.05）,但 p-p85、p-Akt,Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显增加（P〈0.05）；BBR 组增值率为（42%±5%）,与 HG 组比较,BBR 组肾脏系膜细胞增值率明显降低（P〈0.05）,但 p-p85、p-Akt、Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显下降（P〈0.05）,而 p85和Akt mRNA和蛋白表达水平均无统计学差异（P〈0.05）。结论黄连素能抑制高糖导致的系膜细胞增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活。

PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。

PI3K/AKT/mTOR信号通路介导黄芩苷抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（2．24×10^-2～2．24×10^2mmol／L）对体外培养的增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的抑制作用．发现浓度为2．24×10^0～2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理组明显抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖（P〈0．05）．转染后的荧光素酶报告基因活性检测、RT—PCR及Western印迹分析技术检测其mRNA水平及细胞的帽状依赖翻译的表达．2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理后，黄芩苷作用组的mRNA水平并无明显差异（P〉0．05）；增生性瘢痕成纤维细胞的帽状依赖结构的翻译明显被黄芩苷所抑制．采用Western印迹分析检测被黄芩苷干预的增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖相关的蛋白的表达；m^7GTP琼脂糖殊沉淀结合蛋白4E—BPl与elF4E的变化．发现增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、4EBPl、elF4E及其上游的AKT表达明显下调（P〈0．05），而PTEN表达明显上调．p-AKT（Ser473）、p-mTOR（Ser2448）、p．S6（Ser235／236）、p4EBPl（Thr37／46）、p-PTEN（T380／S382／383）磷酸化水平下降（P〈0．05）．在黄芩苷作用下的增生性成纤维细胞中的游离的4E。BPl明显减少（P〈0．05），而与eIF4E结合的4E．BPl明显增加（P〈0．05）黄芩苷诱导游离的4E—BP1与eIF4E结合，从而抑制帽状依赖蛋白翻译．以上结果说明，黄芩苷可通过抑制P13K／AKT／mTOR信号通路抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖．

盐酸小檗碱通过P13K/AKT信号通路抑制MMP2和MMP9的表达影响膀胱癌T24细胞侵袭性

目的:探讨盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride)对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响及机制.方法:采用利用CCK8法检测膀胱癌T24细胞的生存率;transwell侵袭试验检测盐酸小檗碱对T24细胞侵袭能力的影响;Western-blotting分析盐酸小檗碱对P13K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT),细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的改变.结果:CCK8显示盐酸小檗碱对T24细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性(P<0.05);与对照组比较,经盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞侵袭能力明显降低.P13K抑制剂LY294002可通过抑制P13K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达,相对应的盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞p-PI3K、pAKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降(P<0.05).结论:盐酸小檗碱可有效抑制膀胱癌T24细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT通路抑制MMP2和MMP9的表达.