2018-2019年我国部分地区猪肺炎支原体多位点序列分型

为了解我国猪肺炎支原体种群结构和进化关系,2018—2019年采集山东、广西、河南、江西、云南、天津、湖南等地猪组织样品1242份,进行猪肺炎支原体荧光定量PCR和巢式PCR检测,并对测序确认的87份阳性样品,采用adk、rpoB、tpiA 3个管家基因作为分型参考进行多位点序列分型(MLST),并对3个管家基因均扩增成功的阳性样品进行p146基因分型,分析我国猪肺炎支原体种群结构,并结合pubmlst数据库公布的151个序列类型(ST)进行eBURST分析。结果显示:有24份阳性样品的3个管家基因全部扩增且测序成功,共分为10个ST,均为国内外首次报道;10个ST分为3个克隆复合体(CC)和4个独特型,其中ST128占41.7%(10/24),样品来自江苏、河南和广西,为本次检测的主要流行型。结果表明,我国猪肺炎支原体分布较广,具有一定的基因型独特性。本研究为我国猪肺炎支原体的流行病学数据库研究提供了新资料,有助于掌握国内猪肺炎支原体基因型分布情况,进一步完善了猪肺炎支原体流行病学数据库。

贵州省地方猪肺炎支原体鉴定及其主要黏附因子基因序列分析

为了了解贵州地方猪肺炎支原体菌株遗传变异情况,试验对3份贵州省贵阳市某地方猪养殖场疑似感染猪肺炎支原体的病料进行离体培养及PCR鉴定;同时对分离菌株及6株疫苗菌株的主要黏附因子P46基因、P97基因R1区和P146基因高变区进行PCR扩增及测序,并与参考菌株比对分析,挖掘分离菌株与疫苗菌株、参考菌株之间的差异性。结果表明:从疑似病料中培养并鉴定获得1株猪肺炎支原体,命名为GZ株。GZ株P46基因核苷酸序列与疫苗菌株、参考菌株的同源性最高,均在98.3%以上。P146蛋白高变区氨基酸差异主要发生在PQ和PS重复区,GZ株PQ重复区中只缺失2个氨基酸,而PS重复区中缺失7个氨基酸,与疫苗菌株168L株、RM48株和Z株缺失情况一致。GZ株P97基因R1区核苷酸序列与疫苗菌株、参考菌株之间的同源性低,为94.5%~97.4%;各菌株间P97蛋白R1区氨基酸序列中,AAKPV/E重复基元存在不同程度缺失,GZ株在该区域仅存在5个重复基元,且第1个重复序列中的谷氨酸(E)突变为谷氨酰胺(Q)。说明P97蛋白R1区和P146蛋白高变区氨基酸序列的改变导致抗原表位和黏附能力发生变化,对P97基因R1区和P146基因高变区遗传变异情况的调查将有助于筛选出最佳商品化疫苗和研制地方性适用疫苗,有效阻止肺炎支原体在猪群中的传播。