骨髓增生异常综合征P15^(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用

目的检测骨髓增生异常综合征(M DS)患者P 15INK 4B基因甲基化状况;探讨5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(dec itab ine)和三氧化二砷(A s2O3)对M DS患者细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例M DS患者P 15INK 4B基因甲基化,选择1例由M DS转化为急性白血病患者的外周血单个核细胞,分组分别加入dec itab ine和A s2O3进行处理,分析甲基化程度变化情况。结果低危组M DS患者(RCM D)均未发现P 15INK 4B基因甲基化,4例高危组M DS患者(RAEB)和4例M DS-AL患者发现P 15INK 4B基因甲基化。经dec itab ine和A s2O3处理后,M DS患者细胞的甲基化程度均降低50%左右。结论M DS的发生与P 15INK 4B基因甲基化密切相关,dec itab ine和A s2O3均对M DS患者细胞高度甲基化的P 15INK 4B基因具明显去甲基化作用。

骨髓增生异常综合征患者p15^(INK4B)基因甲基化与疾病进展的Meta分析

目的分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B基因甲基化与疾病进展的关系。方法搜索Cochrane Library、Medline、PubMed、Embase、OVID、Springlink、CBMdisc、VIP、万方和CNKI数据库(1979 to 2012),查找报道MDS患者及sAML(MDS转化的白血病)患者p15INK4B基因甲基化发生率的文献,使用RevMan 5.0对数据进行统计分析。结果共有20篇文献检测了MDS患者p15INK4B基因甲基化状态,并报道了患者骨髓原始细胞数;其中9篇文献包括sAML患者(共690名患者)。p15INK4B基因甲基化状态在骨髓原始细胞5%～19%组中高于原始细胞<5%组(RR=0.41,95%CI:0.33～0.50),sAML组高于MDS原始细胞5%～19%组(RR=0.51,95%CI:0.41～0.64)。4篇文献报道了MDS患者疾病的进展(包括179名患者)。p15INK4B基因甲基化阳性组疾病进展率高于甲基化阴性组(RR=3.09,95%CI:2.04～4.68)。结论 p15INK4B基因甲基化与MDS患者疾病进展及白血病转化密切相关。

p15^(INK4B)基因甲基化在急性粒细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究

为探索 p15 INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用 ,应用敏感的甲基化特异的MSP PCR的测定方法 ,测定了 p15 INK4B基因在急性粒细胞白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)中甲基化的表达变化。研究结果表明 ,p15 INK4B基因操纵区在AML和CML中的甲基化发生率分别为 83.9% (2 6/ 31)和 0 % (0 / 2 8)。结论提示 :甲基化是p15 INK4B基因在AML中主要的失活方式之一 ,并可在病程进展中出现甲基化 ,使病情加重 ;在CML中无甲基化的发生 ,说明p15

去铁胺(DFO)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1的P15^(INK4B)基因去甲基化

目的探讨铁螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化作用。方法以枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)和DFO处理SKM-1细胞,按不同铁负荷分成3组:对照组、FAC组和FAC+DFO组,分别检测不同铁负荷组细胞内可变铁池(labile ironpool,LIP)、细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、P15INK4B基因甲基化状态、P15INK4B基因mRNA表达情况、细胞增殖(CFSE的平均荧光强度MFI)、细胞早期凋亡率以及细胞周期。结果与对照组相比,FAC组的LIP(64.04%±2.12%vs.1.45%±0.65%)、ROS(45.57%±1.18%vs.33.38%±12.96%)、细胞增殖MFI(23.01%±5.20%vs.51.67%±1.61%)明显升高,P15INK4B基因mRNA表达水平(0.72±0.08 vs.1)和细胞早期凋亡率(13.97%±2.25%vs.22.53%±1.76%)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与FAC组相比,FAC+DFO组的LIP(8.34%±4.21%vs.64.04%±2.12%)、ROS(34.39%±2.12%vs.45.57%±1.18%)、细胞增殖MFI(37.34%±6.61%vs.23.01%±5.20%)明显减少,P15INK4B基因mRNA表达水平(1.50±0.15 vs.0.72±0.08)和细胞早期凋亡率(55.07%±1.30%vs.13.97%±2.25%)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3组细胞周期的差异无统计学意义。结论 DFO可使LIP和ROS降低,诱导铁过载的SKM-1细胞P15INK4B基因去甲基化,使其mRNA重新表达,并可抑制铁过载的SKM-1细胞增殖,促进其凋亡。

骨髓增生异常综合征患者P15^(INK4B) FHIT基因甲基化的研究

目的探讨P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化异常与骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制的关系。方法采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)技术和变性高效液相色谱(DHPLC)检测分析50例MDS患者,其中包括低危组3例、中危-1组10例、中危-2组27例和高危组10例骨髓细胞P15^(INK4B)基因与FHIT基因的甲基化情况。结果随着疾病的进展,即由低危组MDS向高危组MDS进展,P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率逐渐增高,且P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化在3组间的差异有统计学意义(P=0.022,P=0.026),其中低危组/中危-1组P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率低于高危组,且2组间的差异有统计学意义(P<0.05),而低危组/中危-1组与中危-2组、中危-2组与高危组间差异无统计学意义;2个基因的甲基化没有关联性。结论 P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化可能参与MDS的发病机制,并与疾病的恶化程度有关。

多发性骨髓瘤中p15^(INK4B)和p16^(INK4A)基因高甲基化的检测

为探索p15 INK4B和p16INK4A基因在多发性骨髓瘤中的甲基化的表达 ,采用敏感的甲基化特异的MSP PCR测定方法 ,检测了 2 4例多发性骨髓瘤 (MM ) p15 INK4B和p16INK4A基因甲基化的情况。结果显示 ,MM中 p15 INK4B和 p16INK4A基因甲基化发生率分别为 70 .8% (17/ 2 4 )和 5 8.3% (14/2 4 ) ,产物分别为 148bp和 15 0bp的片段 ,其中 2例Ⅱ期和 2例Ⅲ期的有浆细胞瘤的MM患者发生 2个基因同时甲基化 ,有 5例 2个基因都没有发生甲基化。这 5例的瘤细胞均为分化较成熟的小浆细胞。结论提示 ,p15 INK4B和 p16INK4A基因甲基化在MM细胞中有一定的发生率 。

DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对SKM-1细胞P15^(INK4B)基因甲基化状态的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(DAC)对骨髓增生异常综合征(MDS)转白血病细胞株SKM-1 P15INK4B基因甲基化状态的影响。方法对数生长期的SKM-1细胞设4组,每组1×106个细胞,其中3组为DAC处理组,分别以1.5、3.0和6.0μmol/L DAC处理SKM-1细胞48 h,另1组未加DAC的SKM-1细胞培养48 h作为对照组。甲基化特异性PCR(MSP)检测各组细胞P15INK4B基因甲基化情况,实时荧光RT-PCR相对定量法检测P15INK4B基因mRNA表达情况,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)法检测细胞增殖抑制情况,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡情况。结果 1)对照组SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化,3个DAC处理组的甲基化条带逐渐变浅,非甲基化条带出现并逐步加深;2)P15INK4B基因mRNA表达水平:对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为1.00±0.12与0.91±0.13、0.51±0.06、0.43±0.04(P<0.05),3个DAC处理组之间差异甚微(P>0.05);3)CFSE平均荧光强度(MFI):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为51.67±1.61与55.33±2.28、56.33±2.50、55.71±2.87,仅3.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而各DAC处理组之间变化差异很小(P>0.05);4)G1期细胞比例(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为55.78±3.61与48.12±2.93、51.69±1.60、46.71±1.54,S期细胞比例(%):4个组分别为44.22±3.61与51.88±2.93、48.31±1.60、53.29±1.54,其中1.5、6.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而DAC各处理组中,6.0与3.0μmol/L组之间具明显差异(P<0.05);5)早期凋亡率(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为2.91±0.26与7.77±0.22、12.45±0.28、13.86±0.27(P<0.05),DAC各处理组没有明显变化(P<0.05)。结论 DAC能逆转SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化状态,在一定程度上抑制SKM-1细胞的增殖,使细胞分化阻滞在S期,同时促进细胞凋亡,并随DAC浓度的增加而增强;尚未发现DAC逆转P15INK4B基因甲基化状态的同时使沉默的P15INK4B基因mRNA重新表达。

骨髓增生异常综合征与白血病细胞p15INK4B基因甲基化及机制研究

目的探讨p15INK4B基因甲基化异常和血液系统肿瘤发病的关系及甲基化异常的机制。方法采用RT-PCR、甲基化特异PCR、Westernblot法检测20例骨髓增生异常综合征(MDS)、20例急性白血病患者(AL)、14例慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓单个核细胞p15INK4B基因mRNA和p15INK4B蛋白的表达、p15INK4B基因甲基化及甲基转移酶(DNMTs)的表达。结果高危组MDS患者p15INK4B蛋白表达阳性率低于低危组MDS患者(10%vs80%,P<001),p15INK4B基因甲基化阳性率较高(60%vs10%,P<001)。20例AL有9例(45%)存在p15INK4B基因甲基化。10例CML慢性期(CML-CP)患者仅1例存在p15INK4B基因甲基化。4例CML急变期(CML-BP)患者均检测到p15INK4B基因部分甲基化。DNMT3A、DNMT3B表达在AL、高危组MDS和CML-BP患者均明显高于低危组MDS(P<005)。结论p15INK4B基因甲基化在AL、高危组MDS和CML-BP患者发生率高于低危组MDS,伴有甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B表达较高。p15INK4B基因甲基化可能参与MDS和AL的发病机制并与MDS及CML的预后有关。

地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株P15^(INK4B)及甲基化转移酶表达的影响

目的探讨地西他滨(DAC)和三氧化二砷(As_2O_3)对肝癌SMMC-7721细胞株P15^(INK4B)抑癌基因及甲基化转移酶表达的影响。方法 MTT方法检测地西他滨和三氧化二砷对SMMC-7721细胞株的抑制率。RT-PCR方法检测P15^(INK4B)、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达。结果 2.0mmol/LDAC和2.0μmol/L As_2O_3联用,肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖抑制率均较4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组增强[(72h:(69.9±1.2)%比(33.8±0.7)%、(47.9±2.5)%,P<0.05)]。地西他滨和As_2O_3作用细胞72h后P15^(INK4B)抑癌基因表达增强,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[(0.74±0.14)比(0.57±0.15)、(0.56±0.11),P<0.05];甲基化转移酶表达水平下调,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[DNMT3A:(0.28±0.11)比(0.36±0.13)、(0.41±0.13),P<0.05;DNMT3B:(0.32±0.13)比(0.39±0.12)、(0.45±0.16),P<0.05;DNMT1:(0.31±0.15)比(0.44±0.19)、(0.44±0.12),P<0.05]。结论地西他滨和三氧化二砷可能通过抑制肝癌SMMC-7721细胞株甲基化转移酶,增加P15^(INK4B)基因表达来抑制肝癌细胞增殖。

P15^(INK4B)和P16^(INK4A)基因在鼻咽癌组织中异常甲基化

目的通过检测P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生发展及临床病理特征关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用。方法运用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组织中P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化阳性率分别为22%(12/54)和46%(25/54),二者总检出率为48%(26/54),26例甲基化的癌组织同时出现二者甲基化为11例;而在正常鼻咽上皮组织中未检测到P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化。结论P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化与患者临床病理特征无明显相关关系,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点。二者在鼻咽癌发生发展中可能存在协同作用。

鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因异常甲基化的研究

目的 通过检测P14肝和P15INK4B基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生、发展及临床病理特征的关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用.方法 运用甲基化特异性聚合酶链式扩增对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化状态进行检测,比较两者的差异,并分析鼻咽癌组织中两种基因甲基化与患者临床病理特征的关系,以及两种基因甲基化的相关性.结果 鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和22.2%(12/54),两者总检出率为27.8%(15/54);而正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化;两组间P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.01).15例甲基化的癌组织同时两种基因同时甲基化为8例,非甲基化39例.P14ARF和P15INK4B基因甲基化与鼻咽癌的临床病理特征均无明显相关性(均P>0.05).结论 P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化在鼻咽癌的发生、发展中可能存在协同作用,作为鼻咽癌发生的早期事件,有望成为分子生物学早期诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.

P15^(INK4B)基因甲基化与骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征(MDS)是一种造血干细胞的克隆性疾病,容易进展为急性白血病。P15^(INK4B)基因为人类肿瘤抑制基因,在负向调节造血细胞增生和阻止其恶性转换中起着重要的作用。近来研究显示P15^(INK4B)基因高度甲基化与MDS的发生、发展具重要关系,越是疾病进展期,P15^(INK4B)基因甲基化出现越频繁。5-氮杂胞苷(5-azacytidine)和5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(decitabine)用于治疗MDS患者已取得一定效果,三氧化二砷的体外试验显示其具有抑制MDS细胞株生长和去甲基化作用。去甲基化治疗有望成为今后治疗MDS的有效方案之一。

鼻咽癌组织中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因甲基化及其相关性研究

目的探讨鼻咽癌组织中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化状态在鼻咽癌临床早期诊断和治疗中的作用。方法应用甲基化特异性PCR方法对65例鼻咽癌组织(鼻咽癌组)和30例正常鼻咽上皮组织(对照组)中的p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化阳性率分别为26.2%(17/65)和61.5%(40/65),两者总检出率为72.3%(47/65);而对照组中均未检测到p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化;两组间p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化阳性率的差异具有统计学意义(均P<0.01)。鼻咽癌组中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化与其临床分期及病理特征均无明显相关性(均P>0.05)。同时,p15^(INK4b)基因甲基化和p27^(KIP1),基因甲基化间无明显相关性(r=-0.03,P>0.05)。结论p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化可能参与鼻咽癌的发生、发展;p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化具有一定的肿瘤特异性,有助于鼻咽癌的早期辅助诊断和治疗。

骨髓增生异常综合征患者p15^(INK4B)基因甲基化状态的研究

目的:检测骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者抑癌基因p15INK4B启动子区异常甲基化情况及其mRNA表达水平,探讨p15INK4B基因异常甲基化在MDS发生、发展中的作用。方法:应用甲基化特异性PCR检测32例MDS患者骨髓p15INK4B基因启动子区甲基化状态,逆转录PCR(RT-PCR)检测p15mRNA表达情况。结果:32例MDS患者骨髓有14例检测到p15INK4B基因启动子甲基化(甲基化阳性率为43.8%),且多为高危型患者。MDS患者骨髓p15mRNA表达水平明显降低。MDS患者p15INK4B基因启动子甲基化与p15mRNA表达缺失具有明显的相关性。结论:MDS中p15INK4B基因启动子高甲基化与基因表达失活密切相关,并在MDS的发生、发展中有重要作用。

胃癌中p16^(INK4a)和RB基因甲基化状况及其表达

目的 :研究胃癌组织中 p16 INK4a和视网膜母细胞瘤易感基因 (RB)启动子区域的甲基化状况 ,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR方法对 81例胃癌和 10例正常胃黏膜中 p16 INK4a和RB启动子区域甲基化状况进行检测 ,并采用免疫组织化学方法对 p16 INK4a和视网膜母细胞瘤蛋白 (pRb)表达情况进行相应检测。 结果 :胃癌中 p16 INK4a和RB基因的甲基化率分别为 37% (30 / 81)和 4 2 % (34/81) ;胃癌p16 INK4a蛋白和pRb表达阳性率分别为 5 4 % (4 4 / 81)和 90 % (73/ 81)。 10例正常胃黏膜中均未检测到p16 INK4a和RB异常甲基化 ,而且其相应蛋白表达均为阳性。 p16 INK4a甲基化状况与其蛋白表达有相关性 ,但p16 INK4a甲基化状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移、性别及年龄均不相关。RB甲基化状态与pRb表达、肿瘤分化程度、性别及年龄无相关性 ,但与淋巴结转移相关。结论 :p16 INK4a和RB异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件 ,可能参与了胃癌的发生发展过程。RB异常甲基化与胃癌淋巴结转移相关 ,提示RB甲基化检测对于分析胃癌淋巴结转移情况可能有一定参考价值。p16 INK4a基因启动子区域高甲基化是其蛋白表达抑制的重要机制。

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失，从而导致细胞增生调节失控［１－３］，目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实，肿瘤...

AsO3对Molt—4细胞系P15^IMK4b基因的去甲基化作用

目的：探讨砷剂与甲基化及基出表达的关系。方法：以As2O3处理因高甲基化致P15^IMK4b基因失活的T淋巴母细胞白血病细胞系Molt-4细胞，采用甲基敏感酶限制件酶切PCR、RT-PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测加药前后门5基出洲A甲基化、dmA和蛋自表达的变化及对细胞周期的影响。结果：As2O3处理48h后，P15基因甲基化减低至消失，P15mRNA恢复表达，P15蛋自表达增加26．12％(P<0．05)，细胞阻滞于Gn、G4期。结论：As2O3可通过去除P15抑癌基因甲基化、恢复其表达治疗白血病。

食管鳞癌中hMLH1、E-cadherin、p16^INK4a基因启动子甲基化及其意义

背景与目的:目前认为抑癌基因启动子甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一,hMLH1、E-cadherin及p16INK4a基因在多种恶性肿瘤中都已被证实存在较高频率的甲基化。本研究通过检测食管鳞癌组织及癌旁组织中hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化的发生情况,探讨hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化在食管鳞癌发生发展中的作用。方法:采用酚-氯仿法提取105例食管鳞癌组织及癌旁组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因甲基化检测。采用EnVison免疫组织化学二步法对癌组织中上述3种基因蛋白表达进行检测。结果:癌组织中E-cadherin、hMLH1、p16INK4a基因启动子甲基化的阳性率分别为57.1%(60/105)、20.9%(22/105)和50.5%(53/105),而癌旁食管组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.5%(11/105)、1.9%(2/105)和7.6%(8/105),均显著低于癌组织。E-cadherin(P=0.021)及p16INK4a(P=0.026)基因甲基化与蛋白表达缺失密切相关,而hMLH1基因甲基化与蛋白表达无显著相关性。E-cadherin基因启动子甲基化与淋巴结转移有关(P=0.016),p16INK4a基因启动子甲基化与低分化癌有关性(P=0.024)。hMLH1基因甲基化与各项临床病理特征均无关。结论:食管鳞癌中p16INK4a基因启动子甲基化与相应蛋白表达缺失密切相关,且在低分化癌中更多见;E-cadherin基因启动子甲基化与相应蛋白质表达缺失有相关性,并且有淋巴结转移多见的显著特征,这2个基因的甲基化位点与食管鳞癌密切相关。hMLH1基因甲基化可能并不直接参与食管鳞癌的发生、发展。

PHI调控Molt-4细胞组蛋白甲基化诱导p15基因去甲基化后再表达

本研究探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞组蛋白H3K4、H3K9甲基化,及p15基因的去甲基化的调控作用及诱导沉默基因重新表达的机制。用Western blot方法检测PHI作用后Molt-4细胞的组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态及P15蛋白的表达的变化;应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后p15基因的mRNA的表达变化。结果表明,PHI作用于Molt-4细胞可增强组蛋白H3K4甲基化表达,抑制组蛋白H3K9甲基化表达,并呈浓度及时间依赖性;PHI作用于Molt-4细胞5天后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达;p15 mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性。结论:PHI可能通过特异性调节组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平,引起染色体空间结构发生变化,使p15基因的CPG岛去甲基化,从而诱导p15基因重新表达。

结直肠癌患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态观察

目的观察结直肠癌(CRC)患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态。方法 CRC患者50例(肿瘤组)、结直肠良性病变者50例(良性组)、健康体检者50例(正常组),采用甲基化特异度PCR的方法检测各组粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率,并分析其与CRC临床病理参数的关系。根据肠镜病理诊断结果进行验证,比较粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A单独及联合检测诊断CRC的敏感度和特异度。结果肿瘤组、良性组、正常组粪便p16INK4a基因甲基化检出率分别为74%、28%、14%,MGMT基因甲基化检出率分别为56%、24%、12%,RASSF1A基因甲基化检出率分别为72%、20%、10%,肿瘤组分别与正常组、良性组比较,P均<0.05。p16INK4a基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,MGMT基因甲基化状态与CRC淋巴结转移相关,RASSF1A基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,P均<0.05。三者联合检测诊断CRC的敏感度为95.8%,特异度为83.4%,ROC曲线下面积为0.816(95%CI 0.739%~0.894%)。结论 CRC患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率明显高于结直肠良性病变者及健康体检者,联合检测上述指标有助于CRC患者的早期诊断及其生物学行为的判断。