高危人乳头瘤病毒联合P16基因异常甲基化检测在早期宫颈癌及宫颈病变诊断中的临床价值

目的探讨和分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)联合P16基因异常甲基化检测在早期宫颈癌及宫颈病变的诊断中的临床价值。方法选取2017年2月至2019年2月在河南科技大学第一附属医院因宫颈病变进行宫颈脱落细胞检查或组织活检、子宫切除术的96例患者作为研究对象,根据宫颈脱落细胞学检查、活检标本及切除肿瘤病理学检查结果分为宫颈癌亚组(26例)、高度病变亚组(CINⅡ21例,CINⅢ17例)和低度病变亚组(CINⅠ32例),并按照随机数表法选取同期在本院门诊就诊的42例宫颈正常患者作为对照组。对各组进行高危HPV和P16基因异常甲基化检测,比较各组高危HPV及P16基因异常甲基化阳性率,比较和分析各组高危HPV病毒载量、P16蛋白表达量与宫颈病变程度的关系,并采用接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)判定高危HPV、P16基因异常甲基化、高危HPV+P16基因异常甲基化对宫颈癌的临床诊断价值。结果宫颈癌亚组、高度病变亚组和低度病变组高危HPV和P16基因异常甲基化、高危HPV病毒载量、P16蛋白表达量的阳性率均明显高于对照组(P<0.01),且宫颈癌亚组上述指标明显高于高度病变亚组和低度病变组(P<0.05);高危HPV+P16基因异常甲基化检测的ROC曲线面积和约登指数明显高于单独高危HPV和P16基因异常甲基化检测指标。结论高危HPV联合P16基因异常甲基化检测能提高早期宫颈癌的诊断率。

非小细胞肺癌p16基因异常与临床病理相关性研究

目的 探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌中的失活方式、mRNA和p16蛋白表达与临床病理因素的相关性。方法 应用对比性多重聚合酶链式反应检测 6 4例非小细胞肺癌中p16基因启动子的甲基化状况 ,同时应用原位杂交和免疫组织化学方法 [链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法 ]检测p16基因的mRNA和蛋白表达水平 ,并将上述结果与非小细胞肺癌之临床病理因素进行了相关性研究。结果 5 6 3% (36 / 6 4 )的肺癌标本被检出有p16基因启动子甲基化 ,且甲基化与p16蛋白表达呈负相关 (P <0 0 5 ) ;免疫组织化学检测结果显示 ,5 7 8% (37/ 6 4 )的标本呈现p16蛋白表达缺失 ;原位杂交检测有 2 0 3% (13/ 6 4 )的标本被检出p16mRNA表达 ,且这 13例阳性者的p16蛋白也表达。同时具有p16基因启动子甲基化和蛋白表达缺失的非小细胞肺癌患者淋巴结转移率明显增高 ,术后生存期明显降低 (P <0 0 5 )。结论 启动子甲基化是导致非小细胞肺癌p16基因失活的主要方式 。

结直肠癌患者血清中CDKN2／p16基因异常的观察

近年来研究表明，肿瘤DNA存在于患者周围血液中，虽含量极微却反映人体负荷肿瘤，CDKN2／p16基因是肿瘤抑制基因家族中的重要一员，它的功能异常多见于恶性肿瘤。它的结构异常表现为缺失和点突变，以及其基因内含子5＇端、CPG岛的高度甲基化，抑制启动子区域使其失活。为了探讨在同一患者中这几种异常是否单独或相互起作用而设计此项研究。

胃癌手术前后血浆中p16基因的异常甲基化检测

目的:研究胃癌患者手术前后外周血浆、对应原发肿瘤以及癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的检出状况,探讨其在胃癌疗效评估中的应用.方法:采用甲基化特异性PGR方法,扩增84例胃癌患者的原发肿瘤、癌旁组织、手术前血浆中pl6基因启动子区,以及上述患者中30例行胃癌根治性手术患者术后14～21天血浆中p16基因启动子区,以15例健康人血浆作为正常对照.采用凝胶电泳-溴乙锭显色以及高效液相色谱两种方法检测产物.结果:84例患者样品中,原发肿瘤中存在pl6基因异常甲基化26例(31.0%),癌旁组织中阳性2例(0.02%),术前血浆中阳性12例(14.3%),15例健康人血浆检测均为阴性.患者血浆阳性者同时也存在对应肿瘤组织阳性.30例同时有手术前后血浆标本的胃癌根治手术患者中,原发肿瘤组织中p16异常甲基化14例,其中6例术前血浆阳性,术后5例转阴.在检测样本中,高效液相色谱的检测结果与凝胶电泳-溴乙锭显色结果一致.结论:胃癌患者外周血浆中可以检测到与原发肿瘤一致的p16异常甲基化,手术后血浆中p16甲基化状态的变化与手术治疗有关,高效液相色谱作为一种便捷的技术可以应用于PCR产物的检测.

肺癌组织微卫星不稳定性及p16基因甲基化与肺癌发生、发展关系的研究

目的 :探讨微卫星标志物D3S12 5 5 ,C13 1169,IFNA ,D9S171改变及p16的异常甲基化与肺癌发生发展的关系 ,以及其在肺癌早期诊断和转移判断方面的价值。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)结合微卫星银染分析方法检测肺癌组织微卫星标志物的改变。结果 :5 6例肺癌组织标本中 3p上微卫星改变 2 6例 (4 6% ) ,9p上有微卫星改变的2 3例 (4 1% ) ,17p上有微卫星改变 15例 (2 6 8% )。 3p、9p和 17p上微卫星改变的总检出率 69.6% (3 9/ 5 6)。 44 .6%(2 5 / 5 6)的肺癌组织标本检出p16基因异常甲基化。 5 6例肺癌标本中 ,43 (76.8% )例至少检出一个以上的微卫星改变或p16基因异常甲基化。 2 3例肺部良性疾病的组织标本中 3p、9p和 17p上均没有发现微卫星标志物的改变及p16基因异常甲基化。结论 :3p ,9p和 17p上微卫星改变和p16基因异常甲基化是肺癌发生、发展过程中较早出现的遗传性改变之一 ,且与肺癌转移密切相关 ,有望应用于肺癌的早期诊断和转移判断。

复发性星形细胞瘤p16基因的研究

目的 :结合病理学分级 ,研究复发星形细胞瘤的p16基因异常 ,探讨p16基因在星形细胞瘤复发中的作用。方法 :采用复合PCR、PCR SSCP等方法 ,对 2 2例星形细胞瘤患者的原、复发标本进行基因缺失及点突变的检测。结果 :在全部 4 4个标本中发现纯合性缺失 14例 ,缺失率为 31.8% (14 /44 )。将Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级分别合并后相比差异有显著性。发生p16基因缺失的病例 ,依其发生的时间先后分为三组。PCR SSCP检测 ,点突变发生率为 6 8% (3/44 )。结论 :星形细胞瘤在其恶性增殖中发生p16基因缺失 ,而基因缺失可能在维持其恶性表型中起重要作用。检测p16基因的缺失对判断星形细胞瘤的恶性转化有一定价值。点突变在星形细胞瘤进展中发生频率较低 。