大肠癌hTERT和p16表达与端粒酶活性的关系

目的:探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)和p16基因表达与端粒酶活性的关系及其在大肠癌发生过程中的作用。 方法:采用原位逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化SP法分别检测46例大肠癌及其相应正常组织中hTERTmRNA与P16蛋白表达。用端粒重复序列扩增法(TRAP)测定上述组织标本中的端粒酶活性。 结果:hTERTmRNA与端粒酶活性在大肠癌组织中阳性率分别为87.0％和80.4％,而在相应正常组织中均为阴性。大肠癌中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(r=0.70,P<0.01)。P16蛋白在大肠癌与正常组织中阳性表达率为41.3％和93.5％,二者比较差异有非常显著性(p<0.01)。大肠癌组织P16蛋白表达与端粒酶活性呈显著负相关(r=0.59,P<0.01)。 结论:hTERTmRNA表达和p16基因失活在大肠癌发生过程中起重要作用,大肠癌中端粒酶激活可能与hTERTmRNA表达及p16基因失活有关。

胃癌组织端粒酶hTRT与抑癌基因p53和p16表达的关系

目的:探讨胃癌中端粒酶基因hTRT及抑癌基因p53和p16mR-NA表达与临床参数的关系,评价hTRT表达检测在胃癌诊断中的价值,探讨hTRT基因与p53和p16基因表达的关系。 方法:用核酸探针和原位杂交的方法分别检测端粒酶基因hTRT及抑癌基因p53和p16mRNA在57例胃癌、57例癌旁组织和69例胃良性病变中的表达和分布情况。 结果:57例胃癌中hTRT基因表达阳性率为94.7％(54/57);57例癌旁组织中hTRT基因表达阳性率为0％(0/57);69例胃良性病变中hTRT基因表达阳性率为2.9％(2/69)。胃癌组织中hTRT基因的表达与癌旁组织、胃良性病变比较差异有显著性(P均<0.001)。胃癌组织中hTRT的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P均<0.05),与肿瘤分期无相关性(P>0.05)。p53仅在胃癌组织中表达,胃黏膜良性病变中未见表达。胃癌组与后者比较有显著差异(X^2=35.889,P<0.01)。p16仅在胃癌组织中表达,胃黏膜良性病变中未见表达。胃癌组与后者比较有显著差异(X^2=34.059,P<0.01)。统计学分析,胃癌中hTRT基因表达和p53基因表达无相关性(X^2=0.100,P>0.05)。胃癌中hTRT基因表达和p16基因表达无相关性(X^2=0.065,P>0.05)。 结论:端粒酶基因hTRT表达检测在胃癌诊断中可能有一定的价值。研究结果还不能证明hTRT基因表达和抑癌基因p53、p16的表达有?

幽门螺杆菌感染与c-myc、p16表达在胃粘膜癌变中的相关性研究

目的 观察胃粘膜癌变过程中幽门螺杆菌 (Hp)和c myc、p16的表达状况 ,探讨Hp感染与c myc、p16表达在胃粘膜癌变中的相关性。 方法 通过内镜活检和外科手术获取 171例胃组织标本 ,Hp培养确定有无Hp感染 ;免疫组织化学法检测组织标本中c myc、p16表达。 结果 胃癌 (GC)组织中c myc表达率最高 ,慢性浅表性胃炎 (CSG)和慢性萎缩性胃炎 (CAG)伴轻度肠化 (IM )组p16表达率显著高于其它各组 (P <0 0 5 )。在CAG伴中、重度IM、异型增生 (Dys)组中 ,Hp阳性亚组的c myc表达率显著高于Hp阴性亚组 (P <0 0 1) ,p16阳性表达率显著低于Hp阴性亚组 (P <0 0 1)。 结论 Hp感染可能通过激活c myc、抑制p16 ,刺激胃粘膜过度增殖 ,使其具有较高恶变倾向。

喉癌PCNA、p16表达临床病理学观察

目的 探讨喉鳞型细胞癌中PCNA、p16与喉癌生物学行为的关系。方法 用免疫组化的方法检测 5 0例喉鳞型细胞癌中PCNA、p16蛋白的表达 ,分析其与喉癌病理分化程度、临床分期与转移情况的关系。结果 p16蛋白表达阳性率 4 6 % ,与喉癌分化程度及转移有关 ,但与临床分期无关 ;PCNA表达与喉癌分化程度、临床分期及转移均有关。结论 PCNA、p16蛋白表达可作为临床判断喉癌的恶性程度及预测预后的指标。

p16表达和DNA倍体在软骨肉瘤中的临床意义

目的探讨p16表达对软骨肉瘤诊断,分级和预后的临床意义。方法应用免疫组化(S-P法)检测p16在软骨肉瘤石蜡切片中的表达,再用流式细胞仪检测软骨肉瘤DNA倍体。分析p16蛋白表达与良、恶性软骨肿瘤和软骨肉瘤病理分级间以及与软骨肉瘤不同临床病理因素间的关系。结果 (1)p16表达与软骨肉瘤组织学分级显著相关(P<0.05)。(3)p16表达在软骨肉瘤体积、复发差异有显著性(P<0.05)。结论p16蛋白表达对软骨肉瘤组织学分级,恶性进展和预后判断有指导意义。

P16表达与女性隐匿性甲状腺癌微转移的相关性研究

隐匿性甲状腺癌（OTC）是指瘤灶最大直径≤1.0cm的甲状腺癌。其病灶微小,不易发现,临床表现特点呈多样化不典型,多因颈部淋巴结转移时发现,女性高发。常规病理学及影像学等方法难以发现和检测这些隐匿性的癌细胞P16基因是肿瘤中最常见抑癌基因.

pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达

目的 :构建 pEgr-P16重组质粒并检测其在人食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导表达。 方法 :人P16cDNA基因连接到Egr-1启动子的下游构建成 pEgr-P16重组质粒 ,利用脂质体介导转染人EC9706细胞 ,用Westernblot方法检测不同剂量γ射线照射后被转染细胞中P16的表达。结果 :酶切鉴定证实 pEgr-P16重组质粒构建正确。被 pEgr-P16重组质粒转染的人食管癌EC9706细胞经不同剂量γ射线照射后 ,P16基因表达均高于未照射组。 结论

放射诱导p16基因胰腺癌靶向性表达的研究

目的 构建 pcDNA3.1 Egr.1p-p16重组质粒并检测其在人胰腺癌 JF305细胞中的辐射诱导表达。方法 将人p16 cDNA基因连接到有辐射诱导特性的早期反应因子 Egr.1p的下游,构建成 pcDNA3.1 -Egr.1p- p16 重组质粒,利用脂质体介导转染人胰腺癌细胞系 JF305 细胞;采用 RT- PCR方法和 Western blot方法检测不同剂量 X射线照射后,被转染细胞中 p16 的转录和表达水平。结果 酶切鉴定证实 pcDNA3. 1 Egr. 1p -p16 重组质粒构建正确。被pcDNA3.1 Egr.1p -p16重组质粒转染的人胰腺癌 JF305细胞经不同剂量 X射线照射后,p16 基因表达均高于未照射组。结论 X射线可诱导 pcDNA3.1 -Egr.1p -p16重组质粒在人胰腺癌 JF305细胞中表达增强。

子宫平滑肌肿瘤p16抑癌基因表达的定量研究与临床病理关系

目的 为了探明抑癌基因 p16在子宫平滑肌瘤发生发展中的作用及其在诊断中的临床意义。方法 应用细胞免疫荧光技术及流式细胞术 ,对 5 5例子宫平滑肌肿瘤石蜡组织块的 p16表达定量分析。结果 正常子宫平滑肌组织 p16表达均为阴性。14例平滑肌瘤仅 2例出现过度表达 (14 % ) ;交界性平滑肌肿瘤 12例 ,多数为过度表达 (75 % ) ;子宫平滑肌肉瘤 2 9例中 ,则有 2 7例 (93% )出现过度表达。从平滑肌瘤、交界性平滑肌瘤到平滑肌肉瘤 ,p16表达量显著递增。p16表达量随肿瘤细胞分裂相、异型性、密度的增高也有明显增高。p16低表达者5 a生存率为 85 % ,而过度表达者为 4 8%。结论 子宫平滑肌肿瘤一旦出现 p16过度表达应考虑为恶性 ;p16表达可能和平滑肌瘤向平滑肌肉瘤的转化密切相关 ,p16表达可作为判断病人预后的一项客观指标。

E-cadherin和P16基因蛋白在胆囊癌中的表达及临床意义

目的 探讨E 钙粘蛋白 (ED)和P16基因蛋白在胆囊癌中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学技术检测 5 8例胆囊腺癌、2 0例胆囊腺瘤和 2 0例慢性胆囊炎组织中ED和P16基因蛋白表达。结果 在胆囊癌中ED和P16表达阳性率分别为 4 4 .8%和 37.9% ,均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎 (P <0 .0 5 )。ED和P16表达与胆囊癌的分化程度、浆膜浸润和转移相关 (P <0 .0 5 )。

鼻咽癌p16和nm23-H_1基因表达的意义

目的观察p16、nm23-H1基因在鼻咽癌(NPC)组织中的表达状态,探讨其与NPC转移及与外周血T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(AgNORs)水平的关系。方法采用S-P免疫组织化学方法检测65例NPC初诊患者癌组织中p16、nm23-H1,并检测治疗前患者外周血T-AgNORs含量。结果p16阳性表达率为24.6%(16/65),nm23-H1为61.5%(40/65)。其中,p16表达与T分期及有无颈淋巴结转移及放疗后远处转移无相关,(P>0.05);而nm23-H1蛋白在有颈淋巴结转移的患者中表达率为51.2%(21/41),低于无颈淋巴结转移者79.2%(19/24),P<0.05,随访中15例发生远处转移,其nm23-H1表达率为33.3%(5/15),显著低于无转移者的70.0%(35/50),P<0.01,但其表达水平与T分期无相关。p16、nm23-H1表达阳性患者外周血T-AgNORs含量显著高于阴性者,(P<0.01)。结论p16、nm23-H1基因的表达不仅可能涉及鼻咽癌的发生发展过程,而且可能与机体的免疫调节机能有关。

Wilms瘤p16基因的表达

目的 探讨p16基因表达产物 p16在Wilms瘤中的表达及其与病理分型和临床分期间的关系。方法 应用免疫组织化学S -P方法常规进行染色。结果 5 2例Wilms瘤中 ,p16表达阳性在预后好的病理分型和预后差的病理分型分别为 37.2 %、0 % ,两组差异显著 (P <0 .0 5 )。p16阳性表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为 91%、6 0 %、40 %、6 .6 7%。 4期间比较 ,差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 p16蛋白表达与病理分型及临床分期有关 。

宫颈癌p16基因甲基化及表达的研究

为了探讨p16基因甲基化及异常表达在宫颈癌中的意义,分别采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测不同病理类型和临床分期的60例宫颈癌组织中p16基因启动子区域5′CpG岛甲基化状态;采用PCR方法检测p16基因外显子1(E1)和外显子2(E2)纯合缺失情况;采用免疫组化的方法分析p16蛋白的表达缺失和减弱情况。结果显示正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化,且无E1和E2缺失和p16蛋白表达异常。60例宫颈癌标本的甲基化率为21.67%(13/60);p16基因缺失率为15.00%(9/60);p16蛋白表达下降或无表达为51.67%(31/60)。可见p16基因蛋白的阳性表达率随着临床分期升高呈明显下降趋势。结果提示p16基因失活在宫颈癌中多见且与病理分级密切相关。p16基因甲基化在宫颈癌发生中起着一定作用。

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别?年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度?淋巴结转移?PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。

p16^(INK4α)重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的 p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型 p16基凶对食管癌细胞系 EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将 pcDNA3-p16中的野生型 p16基因用 Kpn I/Bam H (?)进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV 中,将重组质粒 pad-CMV-p16与腺病毒质粒 JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系 EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测 p16基因在细胞中的表达.用MTT 法及流式细胞仪观察 p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型 p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与 JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株 EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle 分析软件分析对细胞周期影响表明,处于 G_0～G_1期的细胞为41%～63%.感染后的细胞经 Dot blot 和 Westernblot 杂交证实,有外源的 p16mRNA 及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型 p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型 p16基因在 p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一.

疏肝益肾方对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠肝、肾p16基因表达的影响

目的:研究疏肝益肾方对衰老小鼠肾脏、肝脏p16基因表达的影响,探讨疏肝益肾方抗衰老机制。方法:用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以疏肝益肾方治疗,实时荧光定量PCR法观察小鼠肝脏、肾脏p16基因的mRNA表达。结果:疏肝益肾方组p16基因mRNA表达降低。结论:疏肝益肾方能降低p16基因的表达,从而起到抗衰老作用。

不同类型胃息肉及胃癌中环氧化酶-2和P16蛋白的表达及相关性

目的:研究不同类型胃息肉及胃癌中COX-2(环氧化酶-2)和P16蛋白的表达,探讨COX-2、P16蛋白在胃癌发生、发展中的作用及其相互关系.方法:采用S-P免疫组织化学方法检测10例正常胃黏膜,30例非肿瘤性胃息肉(炎性及增生性胃息肉),20例肿瘤性胃息肉(腺瘤性胃息肉)和40例胃癌组织中,COX-2和P16蛋白的表达情况.结果:COX-2表达,在正常胃黏膜、非肿瘤性胃息肉、肿瘤性胃息肉及胃癌中分别为10%,13.33%,45%,75%,胃癌组阳性率与其他三组差异有显著性(P<0.05);P16蛋白表达,在正常胃黏膜、非肿瘤性胃息肉、肿瘤性胃息肉及胃癌中分别为90%,86.67%,60%,32.5%,胃癌组阳性率与其他三组差异有显著性(P<0.05).COX-2、P16蛋白表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、呈一定相关性.COX-2与P16蛋白的表达呈负性相关(P<0.05).结论:COX-2、P16蛋白在胃癌发生、发展中起一定作用,可作为判定胃癌生物学行为的有用指标.

当归多糖对衰老模型小鼠抗氧化作用及p16蛋白表达水平的影响

目的:观察当归多糖对衰老模型小鼠脑组织p16蛋白表达及不同组织中单胺氧化酶(MAO)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响,探讨当归多糖治疗衰老的作用机制。方法:将昆明种小鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、脑复康组和当归多糖高、中、低剂量组,每组10只;腹腔联合注射D-半乳糖和亚硝酸钠(NaNO2)建立衰老小鼠模型;脑复康组灌胃脑复康(200μg/g),当归多糖低、中、高剂量组灌胃当归多糖(依次为100,200,400μg/g),空白对照组和模型对照组灌胃等体积的生理盐水,连续8周;眼球采血处死小鼠,采用ELISA法检测脑组织p16蛋白的含量,比色分析法测定脑、肝、肾组织MAO活性及肝、肾组织CAT活性。结果:与空白对照组对比,模型对照组小鼠p16蛋白的表达升高,MAO活性升高,CAT活性降低,差别有统计学意义(P<0.01);当归多糖各剂量组小鼠脑组织p16蛋白表达减少、MAO活性降低,肝组织CAT活性升高,肾组织MAO活性降低、CAT活性升高,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01或P<0.05);而与脑复康组对比,当归多糖各剂量组的上述指标均无统计学意义(P>0.05)。结论:当归多糖可以降低衰老小鼠脑组织p16蛋白的表达,降低脑及肾组织MAO的活性,增强肝组织和肾组织CAT的活性,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而起到延缓衰老的作用。

儿童急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达及DNA含量的临床研究

目的:探讨儿童急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达及DNA含量的临床意义。方法:急性淋巴细胞白血病患儿58例作为观察组,健康儿童58例作为对照组,采用SP免疫组化法检测骨髓液中p16蛋白的表达水平;流式细胞术检测骨髓中白血病细胞DNA的含量,比较两组研究对象的差异。结果:观察组患儿p16阳性表达率为37.93%,明显低于对照组的100.00%(P<0.05);观察组患儿p16阳性表达率与年龄、性别无明显关系(P>0.05),但肝肿大<4 cm患儿的p16阳性表达率明显高于≥4 cm的患儿(P<0.05),高白细胞计数与高危急性淋巴细胞白血病(HR-ALL)患儿的p16阳性表达率明显高于低白细胞计数与标危急性淋巴细胞白血病(SR-ALL)患儿(P<0.05)。在观察组p16蛋白阴性表达患儿中DNA异倍体发生率(66.67%)明显高于阳性表达患儿中DNA异倍体发生率(40.90%,P<0.05)。结论:p16蛋白在急性淋巴细胞白血病患儿的发病过程中起到重要作用,p16蛋白缺失可能与急性淋巴细胞白血病复发相关,临床高危因素与p16阴性表达者DNA异倍体发生率升高具有相关性。

原发性子宫内膜癌与p16基因突变及蛋白表达关系的研究

目的 研究p16蛋白表达与原发性子宫内膜癌发生发展的关系和p16基因缺失突变及点突变在原发性子宫内膜癌发生发展中的地位.方法 利用免疫组织化学方法、聚合酶链反应和聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,分别检测正常子宫内膜组织、子宫内膜癌前病变组织及原发性子宫内膜癌组织,观察p16蛋白和p16基因缺失突变及点突变.结果 1）p16蛋白阳性表达率在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌前病变组织中表达率分别为92.78%和90.00%,两者相比无差异性;在原发性子宫内膜癌组织中为66.67%,明显低于正常子宫组织及癌前病变组织;2）在42例原发性性子宫内膜癌组织中有14例发生p16基因缺失突变,4例发生了p16基因点突变,突变率为分别为33.33%和9.6%,正常子宫颈组织和子宫内膜癌前病变组织未发现p16基因缺失突变和点突变.结论 1）在原发性子宫内膜癌发生发展过程中,p16蛋白的表达在高分化癌明显低于低分化癌,表明p16蛋白缺乏与子宫颈细胞增殖失控及分化不良紧密相关.2）原发性子宫内膜癌存在p16基因点突变,以低分化癌多见,但不是较频繁的事件;原发性子宫内膜癌存在p16基因缺失突变,以低分化癌多见,是较频繁的事件.3）p16蛋白表达与p16基因突变的相关性未被发现.