P162抑制Hedgehog信号转录因子Gli-1增强食管癌Eca109细胞的放射敏感性

目的:探讨新药多肽P162通过抑制Hedgehog(H h)信号转录因子G l i-1对人食管癌细胞株Eca109起放射增敏作用.方法:反复多次X线(剂量累计60 Gy)照射Eca109诱导食管癌细胞Eca109R,采用CCK8法测增殖抑制率,免疫细胞化学法、免疫荧光技术测Gli-1的表达,HE染色观察细胞形态学改变,Western blot测核内Gli-1表达及动态监测Eca109放疗后核内Gli-1变化,流式细胞仪测细胞凋亡率.实验分以下4组:未照射加药组、照射加药组、未照射不加药组和照射不加药组,每组中含Eca109、Eca109R两种细胞.结果:Eca109R增殖抑制率明显低于Eca109,具有一定放射抗拒性;Eca109R较Eca109高表达Gli-1(0.45±0.01,0.32±0.01,P<0.0001);Eca109放疗后Gli-1于2 d,14 d表达与对照相比(0.0882±0.011,0.3560±0.015 vs 0.2552±0.0103),差异有统计学意义(P<0.05);20μmol/L P162干预Eca109R、Eca109细胞中,与0μmol/L P162干预比较Gli-1表达下调,分别为:0.2553±0.011,0.2578±0.014(未照射),0.1324±0.012,0.0595±0.011(照射2 d),0.1741±0.013,0.2397±0.112(照射14 d),差异均有统计学意义(P<0.0001),P162联合放疗促细胞凋亡.结论:Hh信号转录因子Gli-1与食管癌放射抗拒相关.P162放射增敏作用可能与抑制转录因子Gli-1、促细胞凋亡相关.

P162通过抑制Chk1/2表达增加食管癌细胞株Eca109的放射敏感性

目的:研究P162是否通过抑制细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase,Chk)1/2的表达来增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性,并观察其对细胞周期的影响.方法:以食管癌细胞株Eca109为研究对象,小剂量反复照射形成有一定放射抗拒性的细胞株Eca109R;将实验分为不加P162不照射组、不加P162照射组、加P162不照射组及加P162照射组四大组,每组分别包含Eca109与Eca109R二种细胞株;MTT法选取实验合适的照射剂量;CCK-8法测定实验所需的最适P162浓度;Western blot检测4组细胞中Chk1与Chk2蛋白表达的动态变化;流式细胞仪检测4组细胞的细胞周期变化.结果:成功诱导具有放射抗拒性的食管癌细胞株Eca109R;6 Gy为实验照射剂量;以20 mg/L的P162为实验浓度;Western blot显示Eca109及Eca109R均存在少量的Chk1及Chk2蛋白,照射后Chk1与Chk2的表达增高,加用20 mg/L P162培养48 h后,Eca109中Chk1与Chk2值分别为0.244±0.013、0.148±0.011,6 Gy照射后24 h其值分别为0.154±0.013、0.124±0.011;Eca109R中Chk1与Chk2值分别为0.139±0.010、0.134±0.008,6 Gy照射后24 h其值分别为0.083±0.010、0.059±0.009,照射后二者表达均明显降低(P<0.05);细胞周期显示,加用P162不照射组的G2期较不加药组下降,加药照射组较不加药照射组G2期显著下降(P<0.05).结论:Eca109R更有放射抗拒性.P162通过抑制Chk1、Chk2的表达来解除细胞G2/M期阻滞,增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性.

P162对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75^(NTR)表达的影响

目的:研究靶向Ras-GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)的新药P162对人食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75神经营养因子受体(p75NTR)表达的影响。方法:CCK-8法检测P162对食管癌细胞株Eca109增殖抑制的影响;集落形成实验检测P162对Eca109细胞的放射增敏效应,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比;倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞术检测p75NTR的表达。结果:P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,2.5、5.0、10μmol/L P162对Eca109细胞的放射增敏比分别为1.54、2.35和2.33。随着照射剂量的增加,食管癌细胞中p75NTR的表达增加,经5μmol/L P162处理的实验组中p75NTR的表达明显低于未经处理的对照组。结论:P162对Eca109细胞有放射增敏作用,并且能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。

更正说明

2023年第43卷第12期P162页的公式(13)(14)出现排校失误,应为。

SHIV_(SF162p3)病毒感染急性期复制水平与慢性期CD4^+ T细胞亚群分布及频度相关性分析

目的研究B亚型强毒株SHIVSF162p3感染恒河猴后,在感染慢性期肠道组织、外周血及淋巴结中T淋巴细胞亚群的频率及其与急性期病毒复制强度的相关性。方法使用SHIVSF162p3通过静脉及黏膜途径感染12只中国恒河猴,real-time RT-PCR监测血浆病毒载量。感染慢性期取外周血、淋巴结以及通过内窥镜手术取十二指肠肠道黏膜组织,分离淋巴细胞,使用多色流式细胞术检测分析各组织中CD4+T细胞各亚群频率。结果与健康猴相比,SHIVSF162p3感染慢性期3种淋巴组织中CD4+T均有所下降且减少的主要部分是Tcm亚群,而CD4+Tcm下降在肠道组织中最为显著。与CD4+T细胞比较,慢性期CD4+Tcm的下降与急性期病毒载量峰值的相关性更高。从组织学来看,慢性期肠道组织CD4+Tcm与病毒载量峰值相关性最高,外周血次之;淋巴结的关联性不大。结论 B亚型强毒株SHIVSF162p3在急性感染期首先攻击肠道组织和外周血中CD4+Tcm细胞,造成靶细胞的严重损毁。病毒复制率越高损毁越严重,且持续至病毒感染慢性期,可能是这两种淋巴组织中CD4+T细胞下降的主要原因。而淋巴结中CD4+Tcm的下降则主要与外周血和淋巴结间的淋巴细胞循环相关。

SHIV_(SF162P3)中国恒河猴细胞适应株的制备和鉴定

目的体外制备SHIVSF162P3中国恒河猴细胞适应株,建立病毒库,为模型制备提供生物学特性稳定的感染用病毒。方法用SHIVSF162P3体外感染中国恒河猴外周血单个核细胞(PBMCs),定期测定培养液中的P24抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存。测定病毒RNA载量、P24抗原浓度和TCID50。利用病毒RNAenv区(M33262,6846bp～8481bp,共1636bp)序列分析的方法分析毒株在制备过程中的变异情况。静脉途径感染中国恒河猴G0801V,观察血浆病毒载量、外周血CD4+/CD8的变化情况。结果本研究共制备了275mLSHIVSF162P3病毒,病毒载量为4.389×107copies/mL,P24抗原水平为5.64×102pg/mL,TZM-bl细胞滴定TCID50为8.37×104/mL。gp120序列测定分析表明病毒未发生变异,CCR5的嗜性也未发生改变。感染猴G0801V高峰期病毒载量超过1×108copies/mL,急性期CD4+/CD8+倒置。结论此次制备的SHIVSF162P3细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库构建SHIVSF162P3/中国恒河猴模型。

SHIV_(SF162p3)中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定

目的确定SHIVSF162p3静脉途径感染中国恒河猴的有效病毒浓度,明确SHIVSF162p3感染实验猴体内病毒复制和免疫损伤情况。方法 10只正常中国恒河猴分别用10倍系列稀释的病毒液1mL静脉感染,测定血浆病毒载量,CD4+/CD8+,CD4+T细胞绝对数,分析感染后恒河猴体内病毒复制和免疫损伤情况。结果 5TCID50/ml以上的SHIVSF162p3能通过静脉途径成功感染中国恒河猴。结论本研究成功确定了SHIVSF162p3感染实验猴使用剂量,建立了SHIVSF162p3/中国恒河猴静脉感染模型各项指标,为今后使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。