鸭呼肠孤病毒p18重组蛋白表达、纯化及其单克隆抗体制备

研究旨在制备DRV p18蛋白单克隆抗体。试验通过原核表达并纯化DRV p18重组蛋白,经BCA蛋白浓度测定后免疫BALB/c小鼠;通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,获得的p18单克隆抗体通过ELISA、IFA和Western blot试验进行鉴定,并将杂交瘤细胞腹腔注射小鼠获得单抗腹水,通过Western blot试验验证其特异性。结果显示:纯化的重组p18蛋白浓度为1.37 mg/mL,经过三轮亚克隆获得4株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3、2C4、4A2和4D4,亚型鉴定1E3和4D4重链为IgG1型、2C4重链为IgM型、4A2为IgG2b型,轻链均为κ型;4株单克隆抗体均能使感染DRV的BHK-21细胞发出特异性荧光,并在18 ku处存在特异性条带;4D4腹水ELISA效价为1∶409600,Western blot效价达1∶102400,IFA效价为1∶51200;4D4与DRV反应,而不与其他禽源常见病毒反应。研究成功制备了抗DRV p18蛋白的单克隆抗体,为进一步研探究p18蛋白的功能奠定基础。

p18蛋白在骨巨细胞瘤中表达的研究

目的研究p18蛋白在骨巨细胞瘤和骨软骨瘤中的表达,探讨其与骨巨细胞瘤发生、发展及生物学行为的关系。方法采用S-P免疫组织化学方法对42例骨巨细胞瘤标本p18蛋白进行检测,并与20例骨软骨瘤标本作对照。结果p18蛋白在骨巨细胞瘤中的阳性率为61.9%,骨软骨瘤中阳性率为30%。两组相比差异显著(x2=5.52,P<0.05)。结论p18蛋白的表达可能与肿瘤的恶性度相关,在骨巨细胞瘤的发生、发展中起作用。

p18mRNA的表达与食管癌的关系

目的:研究食管癌患者p18 mRNA的表达,分析其表达与食管癌病理特征的关系,探讨p18基因在食管癌生长、转移中的作用。方法:选取34例经外科手术的食管癌患者(经术前及术后病理证实)食管癌组织作为实验组,同时选取34例食管癌患者的癌旁正常组织(癌旁正常组)和30例慢性胃炎患者内镜活检组织(慢性胃炎组)作为对照。采用原位杂交技术检测食管癌组织活检标本p18 mRNA的表达水平,研究其表达水平与癌灶大小、癌浸润深度和淋巴结转移的关系。结果:与癌旁正常组和慢性胃炎组比较,食管癌组p18 mRNA均呈现高表达(P<0.01),癌旁正常组与慢性胃炎组间比较p18 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。p18 mRNA在食管癌组织的表达与癌组织的浸润深度、分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与癌灶大小无关(P>0.05)。结论:p18基因对食管癌的生长没有抑制作用,但对其转移有抑制作用。p18基因在食管癌中呈高表达,可考虑作为食管癌诊断标志物。

增强P18^(INK4C)表达对胃腺癌细胞侵袭的影响(英文)

在应用基因芯片技术筛选胃腺癌转移相关基因的过程中 ,发现CDK抑制因子P18INK4C在人类胃腺癌转移细胞株RF 4 8中的表达较其原发灶细胞株RF 1明显下调 .这提示P18INK4C表达差异与胃腺癌细胞的侵袭转移可能有一定程度的相关性 .通过构建P18INK4C 表达质粒并将其转染入RF 4 8增强P18INK4C的表达 ,研究其对胃腺癌原发灶细胞体外运动、侵袭转移能力以及生长特性的影响 ,进一步明确P18INK4C与人类胃腺癌侵袭转移之间的关系 .结果发现 ,增强P18INK4C表达可以使胃腺癌原发灶细胞的体外侵袭能力明显下降 ,而对RF 4 8的细胞周期和生长增殖能并力未产生影响 .上述结果提示 ,P18INK4C参与人类胃腺癌转移过程 ,在此过程中其主要的作用可能并不是调节细胞周期 ,而是与胃腺癌原发灶细胞侵袭转移能力的调节密切相关 .

抗菌肽P18抑制喉癌细胞Hep-2增殖

抗菌肽能广谱杀伤包括耐药菌在内的细菌、某些真菌、寄生虫、部分病毒以及肿瘤细胞，具有微量高效、快速、广谱的特点。

源自天蚕素A和爪蟾素2的杂合肽P18体外抑制内皮细胞血管生成

目的探讨杂合肽P18体外对内皮细胞EA.hy926血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测P18对EA.hy926细胞增殖的影响;应用Matrigel实验检测P18对内皮细胞形成管状结构的影响;利用流式细胞术分析P18对内皮细胞的损伤作用。结果MTT结果显示P18可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且抑制率存在剂量依赖性;Matrigel实验表明P18具有抑制EA.hy926细胞体外分化成管状结构的作用;流式结果显示15μMP18作用内皮细胞6h后,所诱导的细胞坏死比例达到81.4%。结论体外实验结果表明,杂合肽P18具有体外抑制EA.hy926细胞血管生成的作用。

周期素依赖性激酶抑制剂p18^(INK4C)在急性肾损伤中的表达受血红素加氧酶1调控

目的初步探讨周期素依赖性激酶抑制剂p18INK4C(p18)在急性肾损伤(AKI)中的肾保护作用机制。方法利用血红素加氧酶(HO)-1的化学诱导剂(hemin)和抑制剂(锌原卟啉,ZnPP)观察在顺铂诱导的小鼠肾脏上皮细胞(TCMK-1)损伤中HO-1与p18之间的关系。利用p18基因敲除鼠,观察p18基因缺失对于顺铂诱导的HO-1表达的影响。结果在顺铂诱导的AKI小鼠肾组织及损伤的TCMK-1细胞中,p18、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显上调(P值均<0.05),HO-1的诱导表达峰值先于p18上调峰值。在无血清培养的TCMK-1细胞中,HO-1诱导剂hemin与细胞共同孵育后明显上调TCMK-1细胞中HO-1和p18蛋白的表达(P值均<0.05)。相反,HO-1抑制剂ZnPP与顺铂共同孵育TCMK-1后的第8和16小时,ZnPP不仅抑制了顺铂诱导的HO-1蛋白表达的上调,而且使p18的表达受到明显抑制。p18-/-与p18+/+小鼠肾组织中HO-1蛋白表达基线值的差异无统计学意义(P>0.05),顺铂注射后第3天,p18-/-与p18+/+小鼠肾组织中HO-1蛋白的诱导表达量的差异亦无统计学意义(P>0.05)。顺铂注射后第3天,p18+/+(WT)小鼠肾组织中p18蛋白表达上调,而p18-/-小鼠肾脏中p18蛋白表达缺失。结论在顺铂诱导的AKI中,HO-1调控p18的表达,p18部分介导了HO-1在AKI中的保护作用。

动物源杂合肽P18对白血病K562细胞的致死作用研究

通过其致死白血病K562细胞过程,对动物源杂合肽P18的分子结构与功能进行了研究。MTT实验表明P18显著致死K562细胞;Western blot实验和流式细胞分析提示P18导致K562细胞坏死,而非依赖于caspases的传统凋亡;荧光探针标记后,观察到P18显著增加K562细胞的膜通透性;圆二(CD)图谱分析,在模拟细胞膜环境的溶液中,P18分子出现α-螺旋。综上所述,P18肽分子可能在细胞膜微环境的介导下产生α-螺旋,产生或暴露了肽分子的破膜结构,导致膜通透性显著增加,最终导致K562细胞的坏死。

基于P18蛋白基因的新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)特有的非结构蛋白P18基因保守序列设计1对特异性引物,建立了NDRV荧光定量RT-PCR检测方法。用该方法和普通RT-PCR方法对239份临床样品进行检测,NDRV阳性检出率分别为23.85%(57/239)和17.57%(42/239),荧光定量RT-PCR检测方法的检出率明显高于普通RT-PCR检测方法。随机取5份荧光定量RT-PCR检测方法检测的阳性的样品用鸭胚进行病毒分离培养,经普通RT-PCR扩增和基因测序证明均为NDRV。用10^(3.0) ELD_(50)剂量的NDRV-SY株人工感染14日龄雏鸭,不同时间采集泄殖腔肛拭子样品,通过荧光定量RT-PCR检测方法进行排毒情况监测,结果显示,雏鸭人工感染NDRV 48 h时可以从泄殖腔检测到病毒排出,持续时间可达20 d,并发现在病毒感染后的第5 d和第10 d出现2次排毒高峰。试验结果表明,建立的NDRV荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性和较高的敏感性,可用于NDRV感染的排毒监测以及临床感染的早期诊断和流行病学调查。

天蚕素A-爪蟾素2杂合肽P18对MDA-MB-435s乳腺癌细胞的作用研究

目的研究天蚕素A-爪蟾素2杂合肽P18对体外培养的人类乳腺癌细胞株MDA-MB-435s的活性作用。方法采用MTT法检测P18对体外培养的MDA-MB-435s细胞增殖的影响;使用Live/Dead Viability/Cytotoxicity试剂盒对细胞进行染色,并在荧光显微镜下观察细胞的存活状态;通过DiBAC4(3)染色,以荧光分光光度计检测给肽时细胞膜的膜电位变化;在透射电子显微镜下观察P18作用24h后细胞超微结构的变化。结果MTT试验表明P18对MDA-MB-435s细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;荧光显微镜下可观察到P18可以使MDA-MB-435s细胞膜破损,细胞死亡;P18作用时,荧光分光光度计检测到MDA-MB-435s的细胞膜发生了去极化现象;透射电子显微镜下可见大量细胞崩解坏死。结论杂合肽P18能够引起MDA-MB-435s细胞膜的通透性改变而导致细胞坏死。

癌蛋白p18在细胞中的生物学作用

癌蛋白p18（Stathmin／oncoprotein 18）是一个相对分子质量为19kD的细胞质蛋白，与细胞微管的形成有关，是近来研究较多的微管不稳定蛋白。在细胞周期的不同阶段，癌蛋白p18通过自身的磷酸化和去磷酸化作用调节细胞微管系统的动态平衡。癌蛋白p18通过促进微管的解聚或阻止微管的聚合从而影响有丝分裂纺锤体的形成，影响细胞的增殖与凋亡。

原发性肾病综合征患儿肾组织中 p18的表达及意义(英文)

目的 肾脏固有细胞的异常增生是肾小球硬化发展的病理基础 ,细胞增生又受细胞周期调控物质的调节。本研究通过探讨肾病综合征患儿肾组织细胞周期调节蛋白p18的表达水平及其与肾脏固有细胞增生之间的关系 ,为抑制肾脏固有细胞的异常增生 ,延缓肾脏病的慢性进展开辟新的途径。方法 以 39例原发性肾病综合征患儿 [8例微小病变 (MCD) ,15例系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN) ,7例膜增生性肾小球肾炎 (MPGN) ,9例局灶节段性肾小球肾炎 (FSGS) ]肾活检石蜡包埋肾组织及 6例肾肿瘤肾切除病人的正常肾组织作为研究对象 ,用免疫组织化学方法检测了 p18在肾组织的表达水平 ,分析其与肾病综合征的病理类型及肾组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达的关系。结果 肾病综合征组肾小球内PCNA阳性细胞百分率 (2 8.6 %± 3.4 % )明显高于对照组(10 .8%± 3.4 % ) (P <0 .0 5 ) ,p18阳性细胞百分率 (35 .8%± 4 .0 % )明显高于对照组 (6 .1%± 1.9% ) (P <0 .0 5 ) ;肾病综合征组肾小管 间质内的PCNA阳性细胞百分率 (6 8.3%± 11.6 % )明显高于对照组 (12 .6 %±2 .6 % ) (P <0 .0 5 )。不同病理类型肾病综合征患儿的肾小球内PCNA阳性细胞百分率存在显著差异 ,分别为MCD 2 3.6 %± 4 .6 % ,MsPGN 4 0 .2 %± 5 .1% ,MPGN 2 7.

WZ003504新型铝材热处理系统——《IndustrialHeating》，2012，VLXXX，No．1，p18（英）

美国普雷米尔电炉制造公司最近为美国东部一个机械制造厂制造1套新型铝材热处理系统。该系统包括2台直径为1200mm、深度为2000mm的井式炉和淬火槽。每台炉子的装料量为2000kg铸铝件，加热温度范围为150～600℃，温度偏差在5℃之内。该炉子隔热系统采用陶瓷纤维和耐火砖组合，每台炉子额定功率为150kW，采用水冷式淬火系统，

BREOX FCC P18泡沫控制精制液与聚醚型和有机硅型消泡剂的对比

主要介绍了BREOX FCC P18泡沫控制精制液的作用原理,以及与我公司现用Z—01(聚醚型)和Z-02(有机硅消泡剂)

研究和技术简报P18高速钢鍜造工艺的研究

如何提高高速钢锻造质量是目前生产上急需解决的问题,为此,我院和夏茅钢厂协作,对提高 P18高速钢的锻造质量、加热规范和锻造工艺规程等问题进行了研究。经半年多的生产试验,得出下列结果:

食管上皮癌变过程中CDK4、p18、p19的表达及意义

目的探讨细胞周期调控蛋白CDK4、p18、p19在食管鳞状细胞癌（SCC）发生、发展中的作用。方法制作组织芯片，用免疫组织化学EnVision二步法对120例食管癌患者手术标本中CDK4、p18、p19的表达进行检测，并对其结果进行统计分析。结果CDK4蛋白在正常食管上皮的表达低[28．3％（34／120）]，瘤变上皮中有所增高[32．5％（39／120）]，食管SCC中表达高[84．2％（101／120）]，且随SCC分化程度的降低而逐渐增高，SCC与正常上皮及瘤变上皮中CDK4表达阳性率差异有统计学意义（X^2=76．004，P〈0．05；X^2=65．897，P〈0．05）。淋巴结转移组CDK4表达率[93．88％（46／49）]高于无淋巴结转移组[71．43％（55／71）]（x^2=5，860，P〈0．05）。p18、p19蛋白在正常食管上皮组织阳性表达率分别为34．2％（41／120）、29．2％（35／120），在食管瘤变上皮中表达率分别为19．2％（23／120）、15．0％（18／120），在SCC中表达率分别为63-3％（76／120）、61．7％（74／120），两指标在正常上皮及瘤变上皮间、瘤变上皮与SCC间、正常上皮与SCC问差异均有统计学意义（p18：X^2=6．903、48．296、20．429，均P〈0．05；p19：X^2=6．998、55．276、25．565，均P〈0．05）；在食管SCC中随分化程度的降低而逐渐增高。p18、p19分别与CDK4基因表达呈正相关（r=0．696、0．630，均P〈0．05）。p18与p19二者呈正相关（r=0．833，P〈0．05）。结论细胞周期调控基因CDK4、p18、p19参与食管SCC的发生、发展，其蛋白表达与食管上皮癌变密切相关。

p18^INK4C 调控小鼠T细胞的发育及功能

p18INK4C属于细胞周期蛋白激酶抑制剂,其突变或缺失与某些肿瘤的发生密切相关,如T细胞白血病,但目前关于p18调控T细胞发育及功能的研究还鲜有报道,其调控机制仍不明确.本研究利用p18基因敲除(p18KO)小鼠,系统地研究了胸腺中T细胞的早期发育及成熟T细胞的增殖和活化功能,并利用逆转录病毒的方法在Lin?造血干祖细胞上过表达p18,移植4个月后检测其对T细胞的影响.结果表明,p18的缺失对胸腺T细胞的早期发育影响不明显,但随着p18KO小鼠周龄的增加会促进CD4+CD8+双阳性T细胞的数量,此外,p18还通过影响CD3+成熟T细胞的细胞周期进程及IFN-?,GATA3,Tbx21和Foxp3等的表达增强脾脏T细胞的增殖和活化;进一步在造血干祖细胞上过表达p18后会影响T细胞的发育和成熟,进而纠正T细胞在数量上的异常.本研究阐释了p18在T细胞早期发育及后期活化中的调控机制,并证实可通过在干祖细胞水平改变p18的表达进而影响T细胞的分化,这对p18调控T细胞功能异常及参与T细胞白血病的发生提供了新的理论依据和重要的研究价值.