矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1

肝细胞肝癌组织中P21^(WAF1/CIP1)与PCNA的表达及意义

目的:检测p21WAF1/CIP1与PCNA在肝脏各种病变组织中的表达与分布情况,探讨P21WAF1/CIP1与PCNA在肝细胞癌发病机制中的作用,以及在肝良性与恶性病变鉴别诊断中的价值.方法:采用免疫组织化学方法(DakoEnVisionTMSystems)结合组织病理学观察,检测了36例慢性肝炎?28例不典型增生?52例肝细胞癌组织中的P21WAF1/CIP1与PCNA的表达与分布情况.结果:在慢性肝炎?不典型增生和肝细胞癌组织中,P21WAF1/CIP1阳性检出率明显下降,阳性检出率分别为72.2%(26/36),53.6%(15/28)和26.9%(14/52);三种病变组织中PCNA标记指数明显增加,分别为24.2±6.5%,55.6±7.2%和76.9±10.4%.P21WAF1/CIP1与PCNA的表达在三者之间均存在着显著的差别(P<0.05),明P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均与组织分化程度相关,即组织分化程度高,P21WAF1/CIP1表达多;组织分化程度低,P21WAF1/CIP1表达少或不表达;PCNA的表达则相反.结论:在肝细胞癌发病过程中,P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均有可能起着重要的作用;同时检测P21WAF1/CIP1与PCNA的表达?分布情况,在肝癌患者预后判断中具有辅助诊断价值.

口腔鳞状细胞癌cyclin E及p21^waf1蛋白定量检测及意义

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oralsquamous cell cancer,OSCC)cyclin E、p21waf1蛋白表达与抑癌基因p53突变的关系及其临床病理学意义。方法:采用流式细胞术(FCM)对8例正常口腔粘膜及30例OSCC石蜡包埋组织中cyclin E和p21waf1蛋白表达进行定量检测,分析其与突变型p53蛋白表达及临床病理学参数间的关系。结果:OSCC组织cyclinE蛋白平均表达量高于正常口腔粘膜(t=-6.582,P<0.01),过表达率为63.33%(19/30);而p21waf1蛋白平均表达量低于正常口腔粘膜(t=8.126,P<0.01),低表达率为53.33%(16/30);OSCC组织cyclinE/p21waf1比值高于正常口腔粘膜(t=-9.434,P<0.01),异常率为100%(30/30);p53阳性组p21waf1表达量低于p53阴性组(t=3.905,P<0.01),两者间呈负相关(r=-0.491,P<0.05)。p21waf1表达量在OSCC有淋巴结转移组低于无淋巴结转移组(t=3.391,P<0.01),但与OSCC分化无关(P>0.05);而cyclinE表达量与OSCC肿瘤分化及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论:cyclinE蛋白表达上调及p21waf1蛋白表达下调是OSCC常见异常现象,p21waf1蛋白表达下调可能与p53突变有关,并与OSCC淋巴结转移密切相关,G1/S期正负调控因子cyclinE/p21waf1比例失衡在OSCC发生中可能起着重要作用。

Senescence—like changes induced by expression of p21^Waf1／Cip1 in NIH3T3 cell line

P21Waf1/Cip1 is a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. As a downstream mediator of p53, p21Waf1/Cip1 involves in cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. Previous studies in human cells provided evidence for a link between p21Waf1/Cip1 and cellular senescence. While in murine cells, the role of p21Waf1/Cip1 is indefinite. We explored this issue using NIH3T3 cells with inducible p21Waf1/Cip1 expression. Induction of p21Waf1/Cip1 triggered G1 growth arrest, and NIH3T3-p21 cells exhibited morphologic features, such as enlarged and flattened cellular shape, specific to the senescence phenotype. We also showed that p21Waf1/Cip1-transduced NIH3T3 cells expressed β-galactosidase activity at pH 6.0, which is known to be a marker of senescence. Our results suggest that p21Waf1/Cip1 can also induce senescence-like changes in murine cells.

p21^(WAF1/CIP1)和PCNA在骨肉瘤中的表达及对预后的评价

目的：探讨p21(WAF1/CIP1)基因mRNA及p21WAF1蛋白、PCNA（增殖细胞核抗原）与骨肉瘤的发生、发展之间的关系及其对预后的评价。方法：采用原位杂交及免疫组化法（LSAB法）检测p21(WAF1/CIP1)基因mRNA及p21WAF1蛋白、PCNA在骨肉瘤中的表达。结果：原位杂交结果显示，p21(WAF1/CIP1)mRNA在45例骨肉瘤中有19例阳性表达，阳性率为42％；在10例骨纤维结构不良中有8例阳性表达，阳性率为80％。免疫组化结果显示，p21(WAF1)蛋白在45例骨肉瘤中有8例阳性表达，阳性率为17.7％；在10例骨纤维结构不良有5例阳性表达，阳性率为50％。PCNA在45例骨肉瘤中均有表达，阳性率为100％。p21(WAF1/CIP1)mRNA表达阳性者术后生存时间与p21(WAF1/CIP1)mRNA表达阴性者术后生存时间之间的差异有显著性（P<0.05）。结论：①随着骨肿瘤恶性度的升高，p21(WAF1/CIP1)mRNA及p21WAF1蛋白的表达下降；②p21(WAF1/CIP1)mRNA及p21WAF1蛋白表达的数量和水平的下降是导致人类骨组织发生恶性骨肿瘤的可能原因之一；③随访结果显示，p21(WAF1/CIP1)mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。

紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

Survivin、P21^(WAF1/CIP1)及Cyclin D1蛋白表达及与早期宫颈癌复发的关系

目的 :探讨凋亡抑制蛋白Survivin、细胞周期蛋白CyclinD1及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P2 1WAF1/CIP1在宫颈癌中的表达及与早期宫颈癌复发的关系。方法 :应用免疫组化S P法 ,检测Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在 5 5例宫颈癌 (鳞癌 4 5例 ,腺癌 10例 )及 10例正常宫颈组织中的表达。结果 :①Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在正常宫颈组织的阳性表达率分别为 0、10 0 %、2 0 0 % ;在宫颈鳞癌中阳性表达率分别为 6 8 9%、5 1 1%、5 7 8% ;在宫颈腺癌中阳性表达率分别为 6 0 0 %、90 0 %、80 0 % ;与正常宫颈组织比较 ,三者在宫颈癌中的阳性表达率明显增高 (P <0 0 5 )。②Survivin或CyclinD1蛋白的表达与鳞癌临床分期及病理分级成正相关 (P <0 0 5 ) ,而P2 1WAF1/CIP1蛋白的表达与其无关 (P >0 0 5 )。③P2 1WAF1/CIP1与Survivin或CyclinD1的共表达仅与病理分级有关 (P <0 0 5 )。而三种蛋白的共表达时与临床分期及病理分级均有关 (P <0 0 5 )。④Survivin、cyclinD1蛋白单独表达与早期宫颈癌的复发有关 (P <0 0 5 ) ,二者的共表达与早期宫颈癌的盆腔淋巴结转移有关(P <0 0 5 )。结论 :Survivin及cyclinD1蛋白在宫颈癌中的表达与临床晚期、分化不良及复?

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。

子宫内膜样腺癌中Id-1、Smad4和p21^(WAF1/CIP1)蛋白及mRNA的表达

目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)、DPC4/Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学和原位分子杂交方法,检测30例正常子宫内膜组织、30例单纯性增生过长、30例复杂性增生伴不典型增生、72例EA组织中Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的表达。结果Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及三者mRNA在EA中的表达率分别为86.1%(62/72)、44.4%(32/72)、63.9%(46/72)、73.6%(53/72)、41.7%(30/72)和61.1%(44/72),Id-1和p21WAF1/CIP1阳性率明显高于正常和各型增生内膜;而Smad4则相反;Id-1蛋白及mRNA过表达与组织学分级、临床分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P值均<0.05);Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA阳性表达与组织学分级、临床分期和浸润程度有关(P值均<0.05);Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白与相对应的mRNA呈正相关;Id-1与Smad4表达呈负相关。结论Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA表达异常与EA的发生发展有关,有可能成为判断子宫内膜组织癌变和转移的重要指标。

KLF6、p21^(WAF1/CIP1)、CyclinD1在结直肠癌中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌中的表达及意义。方法应用免疫组化Envision法对58例结直肠癌组织、20例结直肠黏膜慢性炎症组织中的KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达进行检测。结果结直肠癌组织KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达率均与结直肠黏膜慢性炎症组织比较有统计学差异(P<0.05);KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白在结直肠癌组织中的表达与其浸润深度及预后有关(P<0.05)。结论 KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌的发生发展中可能起重要作用。

前列腺癌p21^(CIP1/WAF1)和PCNA的表达及相关性研究

目的 研究 p2 1CIP1 /WAF1 及 PCNA在人前列腺癌标本中的表达及相关性 ,阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系 .方法 以 36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象 ,采用免疫组化 SABC法对其 p2 1CIP1 /WAF 1及PCNA进行检测 ,并应用图像分析仪判定 ,统计学处理 ,对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究 .结果 p2 1CIP1 /WAF 1 及 PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和 /或棕褐色 ,定位于细胞质或细胞核 .所得数据均经统计学处理 .在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性 ,同时还发现 PCNA与 p2 1CIP1 /WAF 1存在显著负相关性 .结论 p2 1CIP1 /WAF1表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性 ,在发病机制中可能涉及到 p2 1CIP1 /WAF1 和 PCNA调节通路的异常 .同时 ,作为一种检测方法 。

胃癌组织cyclinE和p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的意义

目的 :探讨cyclinE和p2 1WAF1/CIP1蛋白在胃癌发生发展中的作用及其表达的意义。方法 :采用免疫组化S P法检测正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、萎缩性胃炎伴不典型增生各 2 0例和 78例胃腺癌组织中cyclinE和 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达。结果 :cyclinE蛋白阳性表达在胃癌组高于正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组 ,而 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达则相反 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;cyclinE、p2 1WAF1/CIP1蛋白表达与胃癌细胞分化程度相关 (P <0 0 5 ) ;有肝转移的胃癌组cyclinE阳性表达率高于无肝转移组 (P <0 0 5 ) ;有淋巴结转移组 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达率低于无淋巴结转移组 (P <0 0 5 )。结论 :cyclinE蛋白高表达与 p2 1WAF1/CIP1蛋白失表达可能参与胃癌的发生发展过程 ,检测cyclinE和p2

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P^(21Waf1/Cip1)表达的影响

目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。

p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状瘤p21^WAF1/CIP1蛋白定量表达关系的研究

目的:从结构分子生物学深度探讨p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状癌(PTC)及甲状腺滤泡性腺瘤(TFA)中p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的关系。方法:采用PCR-SSCP、DNA序列分析、计算机重构p53蛋白三维空间结构和有关分析软件、免疫组织化学和图像分析等技术进行研究。根据p53基因Exon5-8突变与否把PTC划分为Ⅰ组(p53基因突变组)和Ⅱ组(无p53基因突变组),再根据突变型p53蛋白三维构象改变的空间位点不同,把Ⅰ组分为ⅠA和ⅠB组。结果:Ⅱ组和ⅠA组的阳性细胞的平均积分光密度值(MOD)差异无统计学意义,两者均数差1.26,P>0.05。Ⅲ组(TFA组)和Ⅱ组、Ⅲ组和ⅠB组、Ⅲ组和ⅠA组之间,尤其是ⅠB组和ⅠA组之间的MOD的差异有统计学意义,均数差分别为12.57、25.80、13.84和-1.96,P<0.01。结论:p53蛋白空间构象的改变与p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的变化之间存在着质变与量变的关系。

利用组织芯片技术分析肝细胞癌组织P21^(WAF1/CIP1)、PCNA和Ki-67的表达及意义

利用组织芯片技术检测P2 1WAF1/CIP1、PCNA与Ki - 6 7在肝细胞癌组织中的表达与分布 ,初步探讨P2 11WAF1/CIP1、PCNA与Ki- 6 7在肝细胞癌发生机制以及预后评估方面的作用。采用免疫组化技术结合临床病理资料检测了 6 1例肝癌和 5 0例癌旁组织的P2 1WAF1/CIP1、PCNA、Ki- 6 7的表达情况。PCNA和Ki- 6 7表达与肝癌的分化程度相关 ,PCNA与肝癌的侵袭转移潜力有关 (P <0 0 5 ) ,P2 1WAF1/CIP1在实验中未见有明显差异 ,但在表达程度与肝癌组织的分化程度之间亦存在着一定的相关关系。应用组织芯片高效检测临床组织样本具有快速、方便、经济、准确的优点。P2 1WAF1/CIP1、PCNA与Ki- 6

P21^(WAF1/CIP1)和survivin在人脑星形细胞瘤中的表达及其相关性

目的检测P21WAF1/CIP1和survivin在脑星形细胞瘤中的表达情况,探讨其与肿瘤恶性程度的关系及相关性。方法采用ElivisionTMplus免疫组化技术,检测10例正常脑组织、60例脑星形细胞瘤中P21蛋白和sur-vivin蛋白的表达,计算阳性细胞百分率,分析P21蛋白和survivin的表达与肿瘤病理分级的关系。结果(1)P21蛋白在正常脑组织和星形细胞瘤Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级中的阳性表达率分别为:0.0,81.25%,62.50%;42.86%,27.27%,其表达与病理分级呈显著负相关(rs=-0.548,P<0.001);(2)survivin在正常脑组织和星形细胞瘤Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级中的阳性表达率分别为:0.0,56.25%,68.75%,92.86%,100%,其表达与病理分级呈显著正相关(rs=0.539,P<0.001);(3)P21蛋白表达阳性的32例中survivin阳性表达20例,阳性率62.50%,P21蛋白表达阴性的28例中survivin阳性表达27例,阳性率96.43%,两者呈显著负相关(rs=-0.514 8,P<0.001)。结论P21WAF1/CIP1,survivin的阳性表达可在一定程度上反映脑星形细胞瘤的恶性程度,联合检测两者可间接反映其生物学行为。