p21活化激酶6对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨p21活化激酶6(PAK6)对非小细胞肺癌侵袭及迁移能力的影响及机制研究。方法:实时荧光定量PCR检测人非小细胞肺癌A548细胞、人支气管上皮细胞、非小细胞肺癌组织及癌旁组织中PAK6mRNA的表达。A549细胞分别转染siRNA-PAK6(siPAK6组)和阴性对照(对照组),实时荧光定量PCR技术检测PAK6 mRNA,Western blotting检测PAK6表达量;并行体外迁移及侵袭实验,检测转染siRNA-PAK6对A549细胞侵袭及迁移能力的影响;共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变。结果:A549细胞中PAK6 mRNA的表达量明显高于人支气管上皮细胞中PAK6 mRNA的表达量(3.50±1.16 vs 1.12±0.42,P<0.05),非小细胞肺癌组织中PAK6 mRNA的表达量明显高于癌旁组织中PAK6 mRNA的表达量(5.13±1.33 vs 1.08±0.37,P<0.05)。A549细胞转染siPAK6后,PAK6蛋白表达量下降72%(P<0.05),PAK6 mRNA水平明显下降(3.72±0.75 vs 0.69±0.21,P<0.05)。A549细胞转染siPAK6组侵袭及迁移出的细胞数量明显少于对照组(P<0.05)。siPAK6组A549细胞骨架应力纤维减少明显,肌动蛋白皱缩。结论:PAK6通过细胞骨架的重构影响非小细胞肺癌的侵袭及迁移能力。

p21活化激酶6削弱非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的分子机制

目的:探讨调控p21活化激酶6(PAK6)的微小RNA(miRNA)与非小细胞肺癌侵袭及迁移的关系,并了解PAK6下游分子信号机制。方法:通过生物信息学数据库预测靶向PAK6的miRNA,转染miRNA模拟物及抑制剂,Western blotting及实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测A549细胞中PAK6的表达量,萤光素报告酶实验检测预测miRNA对PAK6的调控,并行体外迁移及侵袭实验,检测转染miRNA对PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。转染目标miRNA及siPAK6,Western blotting检测A549细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达量。结果:生物信息学预测miR-23a可能是调控PAK6的靶向miRNA。Western blotting检测转染miR-23a组PAK6表达量下降69%,而转染miR-23a抑制剂组PAK6表达量上升52%,差异均有统计学意义。萤光素报告酶实验结果显示,转染miR-23a后野生型PAK6组萤光素酶活性下降52%,而突变组差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测3组PAK6 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。体外迁移及侵袭实验示,转染miR-23a组迁移细胞数减少73%,侵袭的细胞数减少59%。Western blotting检测发现,转染siPAK6组MMP-9的表达下降85%(P<0.01),转染miR-23a组MMP-9的表达下降76%(P<0.01)。结论:miR-23a通过PAK6-MMP-9信号途径引起非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的下降。

前列腺癌与前列腺增生组织中P21活化激酶6的表达及意义

目的探讨P21活化激酶6(PAK6)在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学染色方法,检测70例前列腺癌及20例前列腺增生石蜡包埋组织中PAK6的表达;并采用半定量RT-PCR技术检测10例前列腺增生和10例前列腺癌新鲜组织中PAK6mRNA表达情况,探讨PAK6蛋白表达与前列腺增生和前列腺癌的关系。结果 RT-PCR与免疫组织化学检测结果一致,PAK6在前列腺增生组织和前列腺癌组织中均有阳性表达,前列腺癌组织中PAK6阳性表达明显高于前列腺增生组织,有显著性差异(P<0.05)。70例前列腺癌中PAK6表达阳性率与分化程度相关。结论 PAK6阳性表达程度与前列腺癌恶性程度相关,提示其在前列腺癌的发病中可能扮演重要角色。检测PAK6变化对判断前列腺癌的生物学行为有参考价值。

雄激素受体与P21活化激酶6在前列腺癌组织中的表达及意义

应用免疫组织化学SP法检测PCa组织及前列腺增生(BPH)组织中AR、PAK6的表达,探讨了雄激素受体(AR)、P21活化激酶6(PAK6)与前列腺癌(PCa)发生的关系。结果表明:AR、PAK6在BPH和PCa组织中均有阳性表达,BPH和PCa前列腺组织中AR阳性表达率无显著性差异(P>0.05),而BPH和PCa前列腺组织中PAK6阳性表达率有显著性差异(P<0.05)。70例高、中、低分化前列腺癌中AR、PAK6表达阳性率逐渐升高,PCa组织中AR与PAK6二者表达呈现明显的正相关性。这说明,PAK6和AR阳性表达程度与PCa分级有关,提示二者在PCa的发病中可能扮演重要角色,检测PAK6和AR的变化对判断PCa的生物学行为有参考价值。

体外激酶实验筛选p21活化激酶6对雄激素受体的磷酸化位点

目的构建雄激素受体(AR)的点突变原核表达质粒,以体外激酶实验分析筛选p21活化激酶6(PAK6)对雄激素受体的磷酸化位点,更好的研究PAK6对AR的磷酸化所发挥的生物学功能。方法利用体外激酶实验分析PAK6对AR的较小磷酸化区域,并利用重叠延伸PCR的方法构建可能的磷酸化定点突变体;然后,体外纯化带有GST标签的突变体蛋白,及体外激酶实验筛选PAK6对AR的磷酸化位点。结果证明质粒构建成功,构建雄激素受体定点突变体,确定PAK6磷酸化雄激素受体位点。结论成功筛选PAK6对AR的磷酸化位点是578位丝氨酸。

P21活化激酶6在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨P21活化激酶6(PAK6)在前列腺癌(PCa)中的表达和意义。方法:应用免疫组织化学的SP法,检测前列腺癌(PCa)组织及前列腺增生(BPH)组织中PAK6的表达,探讨PAK6蛋白表达与PCa的关系。结果:PAK6在BPH组织和PCa组织中均有阳性表达。二者中PAK6阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。后者PAK6表达阳性率随分化程度升高。结论:PAK6阳性表达程度与PCa分级有关,提示它在PCa的发病中可能扮演重要角色,检测PAK6变化对判断PCa生物学行为有参考价值。

肝细胞癌中p21活化蛋白激酶6的表达及意义

目的探讨p21活化蛋白激酶(p21-activated protein kinase,PAK)6在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其意义。方法采用Western blot技术检测8例HCC及对应癌旁正常组织中PAK6的表达,运用免疫组化SP法检测121例HCC组织及癌旁组织中PAK6的表达。结果 Western blot及免疫组化分析显示,PAK6在HCC组织中的表达明显高于对应癌旁组织。HCC中PAK6表达与HCC的Edmondson-steiner组织学分级和肿瘤结节数之间差异有统计学意义,PAK6表达与增殖指标Ki-67呈正相关(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,高表达PAK6的HCC患者总生存率和无病生存率均显著降低(P均<0.001)。单因素生存分析表明,PAK6的高表达与HCC患者预后不良有关(P<0.001)。COX危险比例模型多因素分析显示,PAK6和Ki-67、肿瘤Edmondson-steiner分级、转移、肿瘤大小、肿瘤数目可作为HCC患者预后的独立指标。结论PAK6在HCC组织中明显高表达,可作为HCC患者独立的预后指标,PAK6可能与肝癌的发生、发展密切相关。

肝细胞肝癌组织中p21活化蛋白激酶6的表达及意义

目的观察肝细胞肝癌(HCC)组织中p21活化蛋白激酶6(PAK6)的表达,并探讨其意义。方法采用Western blot技术检测8例新鲜HCC及相应癌旁组织中PAK6的表达情况;采用免疫组化SP方法检测121例HCC及癌旁组织石蜡切片中PAK6的表达情况,分析HCC组织中PAK6蛋白表达与临床病理参数的关系。结果 Western blot结果显示,HCC组织中PAK6表达均显著高于癌旁组织。免疫组化结果显示,PAK6在HCC组织中高表达,在相应癌旁组织中表达相对较低或缺失(P<0.01);HCC组织中PAK6蛋白高表达与肿瘤的Edmondson-steiner分级(P=0.006)、结节数目(P<0.01)有关,与患者的年龄、性别、肿瘤大小及有无转移、血清HBsAg是否阳性、是否伴有肝硬化、血清AFP水平不相关(P均>0.05)。结论 HCC组织中PAK6呈高表达,PAK6高表达可能与HCC的发生、发展有关。

PAK6、ZNF217、G蛋白偶联受体48基因在膀胱癌演进过程中的表达变化

目的探究P21活化激酶6(PAK6)、锌指蛋白217(ZNF217)、G蛋白偶联受体48(GPR48)基因在膀胱癌演进过程中的表达变化。方法选取收治的行手术治疗的膀胱癌患者138例,取癌组织、癌旁组织,检测组织中PAK6、ZNF217、GPR48表达情况,分析PAK6、ZNF217、GPR48在癌组织、癌旁组织中的表达及在膀胱癌演进过程中的表达变化,三者相关性采用Pearson相关分析。结果与癌旁组织相比,癌组织中PAK6表达量显著降低,ZNF217、GPR48表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PAK6、ZNF217、GPR48表达与膀胱癌患者性别、年龄、肿瘤直径无关,差异无统计学意义(P>0.05);PAK6、ZNF217、GPR48表达与膀胱癌患者的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、浸润深度、复发情况有关,与中高分化、T_(a)~T_(1)期、无淋巴结转移、非肌层浸润、未复发患者相比,低分化、T_(2)~T_(4)期、有淋巴结转移、肌层浸润、复发患者的PAK6表达量降低,ZNF217、GPR48表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,PAK6与ZNF217、GPR48均呈负相关,ZNF217、GPR48之间呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PAK6在膀胱癌组织中低表达,ZNF217、GPR48在膀胱癌组织中高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移、浸润深度、复发有关,参与膀胱癌的演进。

PAK6基因沉默对前列腺癌细胞放疗敏感性研究

为探讨p21活化激酶6基因沉默对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞放疗敏感性的影响。采用利用蛋白质免疫印迹技术检测筛选出的靶向PAK6的sh RNA对LNCa P细胞中PAK6蛋白表达抑制情况。并以靶向PAK6的sh RNA转染LNCa P细胞,分别给予0、1、3、5Gy单次剂量放射治疗,观察放疗对PAK6基因沉默的前列腺癌细胞的抑制作用。用CCK-8法检测前列腺癌细胞的增殖活性;流式细胞仪测定其凋亡变化。结果显示,放疗能抑制前列腺癌细胞的增殖,增加其凋亡率;接受等剂量照射的PAK6基因沉默组前列腺癌细胞增殖减缓更明显,凋亡的肿瘤细胞显著增多。由此可知,PAK6基因沉默的前列腺癌细胞对放射治疗更敏感。

PAK6、p53在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨P21活化激酶6(p21-activated kinase 6,PAK6)以及p53在膀胱癌中的表达及其临床意义。方法取膀胱癌患者85例作为膀胱癌组,并取其膀胱癌组织;取行膀胱部分切除或全部切除术患者35例为对照组,取其正常膀胱上皮组织。采用免疫组织化学法检测2组组织PAK6、p53蛋白阳性表达率。Biu-87组、T24组膀胱癌细胞和SV-HUC-1正常膀胱细胞分为Biu-87组、T24组和SV-HUC-1组,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞的PAK6、p53 mRNA表达水平。结果膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率低于对照组(P<0.05),膀胱癌组复发者PAK6蛋白阳性表达率低于原发者(P<0.05)。膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率在肿瘤数量、是否转移、病理分级以及临床分期上差异无统计学意义(P>0.05)。Biu-87组、T24组细胞PAK6 mRNA表达水平均低于SV-HUC-1组(P<0.05)。Biu-87组、T24组细胞p53 mRNA表达水平均高于SV-HUC-1组(P<0.05)。结论PAK6在膀胱癌细胞中以及膀胱癌组织中低表达,并且与膀胱癌的复发有着密切的联系,在膀胱癌发生发展中有抑制作用,PAK6可能会作为新的抑癌指标用以指导临床。p53在膀胱癌细胞与膀胱癌组织中高表达,与病理分级、临床分期等密切相关,具有评估膀胱癌预后的价值。

PAK6影响裸鼠乳腺癌早期放疗疗效的实验研究

目的探究分析p21活化激酶6(p21-activated kinases 6,PAK6)基因对裸鼠乳腺癌早期放疗疗效的影响及作用机制。方法采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)实验和Western blot实验检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及人乳腺癌细胞MDA-MB-468、MCF-7中PAK6 mRNA水平及蛋白表达。采用慢病毒载体介导RNA技术(RNAi),构建PAK6基因稳定沉默的人乳腺癌细胞系MDA-MB-468/shRNA-PAK6、MCF-7/shRNA-PAK6并检测转染效率,分别给予0、2、4 Gy单次剂量放射治疗,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)实验、克隆形成实验和流式细胞凋亡实验观察沉默PAK6表达对乳腺癌细胞放射敏感性的影响。构建裸鼠皮下乳腺癌移植瘤模型,分别给予0、2、4 Gy单次剂量放射治疗,观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率。采用RT-qPCR实验和Western blot实验检测移植瘤组织中PAK6蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A比较,人乳腺癌细胞MDA-MB-468和MCF-7中PAK6 mRNA及蛋白均呈明显高表达(P<0.05)。在乳腺癌细胞MDA-MB-468和MCF-7中,沉默PAK6表达可抑制细胞活力和细胞克隆形成率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示,与2 Gy shRNA-NC组比较,2 Gy shRNA-PAK6组大鼠移植瘤体积明显降低(P<0.05),肿瘤倍增时间和增敏系数明显增大(P<0.05),抑瘤率增加(P<0.05),移植瘤组织中PAK6、β-catenin、c-myc蛋白表达水平明显较低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达水平则明显较高(P<0.05);与4Gy shRNA-NC组比较,4Gy shRNA-PAK6组各项指标趋势同前。结论沉默乳腺癌细胞中PAK6基因表达可抑制肿瘤细胞的增殖和克隆,改善肿瘤细胞体内外放疗敏感性,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路作用有关。

PAK6在膀胱癌中表达及其临床意义

目的探讨p21活化激酶6(p21一activated kinase 6,PAK6)在膀胱癌中的表达情况及其临床意义。方法膀胱癌患者89例(膀胱癌组),取其膀胱癌组织;行膀胱部分切除或全部切除术患者30例为对照组,取其正常膀胱上皮组织。采用免疫组织化学法检测2组组织PAK6蛋白阳性表达率。Biu-87、T24膀胱癌细胞和SV-HUC-1正常膀胱细胞分为Biub一87组、T24组和SV-HUC-1组,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞PAK6mRNA表达水平,采用Westernblot法检测3组细胞PAK6蛋白表达水平。结果膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率(46.07%)明显低于对照组(96.67%)(P<O.05),膀胱癌组复发者PAK6蛋白阳性表达率(29.41%)低于原发者(56.36%)(P<O.05),膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率在肿瘤数量、病理分级、是否转移和临床分期上差异无统计学意义(P>O.05);Biu一87组和T24组细胞PAK6mRNA(0.0189±0.0037、0.053O±0.0129)和PAK6蛋白表达水平(O.0993±0.0121、0.1431±0.0081)明显低于SV-HUC-1组(1.0403±0.3755、0.3381±0.0511),Biu-87组低于T24组(P<O.05)。结论PAK6在膀胱癌组织及细胞中呈低表达,且与膀胱癌的复发密切相关,可能在膀胱癌的发生、发展中起抑制作用,可作为新的抑癌指标指导临床。

PAK6在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:比较P21活化激酶6(PAK6)在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达和探讨PAK6表达在前列腺癌临床分期的意义。方法:采用免疫组织化学染色方法,检测42例前列腺癌及46例前列腺增生石蜡包埋组织中PAK6的表达。结果:PAK6在前列腺增生组织和前列腺癌组织中均有阳性表达,前列腺癌组织中PAK6阳性表达及表达强度均明显高于前列腺增生组织,有显著性差异。42例前列腺癌中临床分期Ⅲ-Ⅳ期的患者共20例,Ⅰ-Ⅱ期的患者22例,两者的PAK6蛋白表达率无明显差异,但临床分期Ⅲ-Ⅳ期的PAK6表达强度明显高于临床Ⅰ-Ⅱ期患者,有显著性差异。结论:PAK6蛋白在前列腺癌中有明显的表达,与前列腺癌的局部侵袭和远处转移相关,对肿瘤的临床分期与预后有一定的预测作用。

微小RNA-23a调节前列腺癌细胞骨架蛋白的分子机制

目的探讨微小RNA-23a（miR-23a）影响前列腺癌细胞骨架迁移及侵袭行为的分子机制。方法PC-3前列腺癌细胞转染siPAK6、miR-23a模拟物，48h后以共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变；Westernblot法检测LIMK1、磷酸化LIMK1（p-LIMKl）、丝切蛋白（cofilin）和磷酸化丝切蛋白（p-cofilin）蛋白的表达。结果转染siPAK6组及miRNA一23a组PC-3细胞骨架的应力纤维均明显减少，肌动蛋白形态皱缩。Westernblot检测显示转染siPAK6组的p-LIMKl、p-cofilin的表达分别下降75％、80％（P〈0．01），而LIMKl、cofilin表达量无明显变化（P〉0．05）；转染miRNA-23a组的p-LIMKl、p-cofilin的表达分别下降60％、70％（P〈0．01），LIMKl、cofilin的表达量无明显变化（P〉0．05）。结论miR-23a可通过p21活化激酶6（PAK6）-LIMK1-cofilin信号通路，影响前列腺癌细胞骨架的重构，抑制癌细胞迁移及侵袭能力。