p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓毒症早期大鼠心肌中炎性因子和细胞凋亡蛋白表达的影响

目的探讨脓毒症时心肌损害的原因及p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用。方法将84只雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组和治疗组(n=28)。实验组和治疗组采用腹腔注射内毒素(10 mg/kg)制作脓毒症模型,治疗组同时加p38MAPK抑制剂SB203580予以干预,对照组腹腔注射生理盐水。在不同时间点观察大鼠血清脑钠素(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的浓度及心肌组织中TNF-α、IL-6、凋亡蛋白caspase-9的表达情况。结果实验组大鼠血清TNF-α、IL-6进行性升高。对照组心肌组织中仅有微量TNF-α、IL-6及caspase-9表达,而实验组心肌组织中则大量表达。血清TNF-α、IL-6浓度及心肌中caspase-9的表达与心肌损害程度呈显著正相关。应用SB203580后,治疗组血清TNF-α、IL-6浓度显著降低,心肌中caspase-9的表达也减少。但各组血清BNP浓度之间差异无统计学意义,均在正常范围之内。结论 TNF-α、IL-6的大量释放及其在心肌中的表达是脓毒症心肌损害的原因之一,p38MAPK抑制剂SB203580可对脓毒症大鼠心肌损害起保护作用。

肝细胞癌中p21活化蛋白激酶6的表达及意义

目的探讨p21活化蛋白激酶(p21-activated protein kinase,PAK)6在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其意义。方法采用Western blot技术检测8例HCC及对应癌旁正常组织中PAK6的表达,运用免疫组化SP法检测121例HCC组织及癌旁组织中PAK6的表达。结果 Western blot及免疫组化分析显示,PAK6在HCC组织中的表达明显高于对应癌旁组织。HCC中PAK6表达与HCC的Edmondson-steiner组织学分级和肿瘤结节数之间差异有统计学意义,PAK6表达与增殖指标Ki-67呈正相关(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,高表达PAK6的HCC患者总生存率和无病生存率均显著降低(P均<0.001)。单因素生存分析表明,PAK6的高表达与HCC患者预后不良有关(P<0.001)。COX危险比例模型多因素分析显示,PAK6和Ki-67、肿瘤Edmondson-steiner分级、转移、肿瘤大小、肿瘤数目可作为HCC患者预后的独立指标。结论PAK6在HCC组织中明显高表达,可作为HCC患者独立的预后指标,PAK6可能与肝癌的发生、发展密切相关。

肝细胞肝癌组织中p21活化蛋白激酶6的表达及意义

目的观察肝细胞肝癌(HCC)组织中p21活化蛋白激酶6(PAK6)的表达,并探讨其意义。方法采用Western blot技术检测8例新鲜HCC及相应癌旁组织中PAK6的表达情况;采用免疫组化SP方法检测121例HCC及癌旁组织石蜡切片中PAK6的表达情况,分析HCC组织中PAK6蛋白表达与临床病理参数的关系。结果 Western blot结果显示,HCC组织中PAK6表达均显著高于癌旁组织。免疫组化结果显示,PAK6在HCC组织中高表达,在相应癌旁组织中表达相对较低或缺失(P<0.01);HCC组织中PAK6蛋白高表达与肿瘤的Edmondson-steiner分级(P=0.006)、结节数目(P<0.01)有关,与患者的年龄、性别、肿瘤大小及有无转移、血清HBsAg是否阳性、是否伴有肝硬化、血清AFP水平不相关(P均>0.05)。结论 HCC组织中PAK6呈高表达,PAK6高表达可能与HCC的发生、发展有关。

p21活化激酶6对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨p21活化激酶6(PAK6)对非小细胞肺癌侵袭及迁移能力的影响及机制研究。方法:实时荧光定量PCR检测人非小细胞肺癌A548细胞、人支气管上皮细胞、非小细胞肺癌组织及癌旁组织中PAK6mRNA的表达。A549细胞分别转染siRNA-PAK6(siPAK6组)和阴性对照(对照组),实时荧光定量PCR技术检测PAK6 mRNA,Western blotting检测PAK6表达量;并行体外迁移及侵袭实验,检测转染siRNA-PAK6对A549细胞侵袭及迁移能力的影响;共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变。结果:A549细胞中PAK6 mRNA的表达量明显高于人支气管上皮细胞中PAK6 mRNA的表达量(3.50±1.16 vs 1.12±0.42,P<0.05),非小细胞肺癌组织中PAK6 mRNA的表达量明显高于癌旁组织中PAK6 mRNA的表达量(5.13±1.33 vs 1.08±0.37,P<0.05)。A549细胞转染siPAK6后,PAK6蛋白表达量下降72%(P<0.05),PAK6 mRNA水平明显下降(3.72±0.75 vs 0.69±0.21,P<0.05)。A549细胞转染siPAK6组侵袭及迁移出的细胞数量明显少于对照组(P<0.05)。siPAK6组A549细胞骨架应力纤维减少明显,肌动蛋白皱缩。结论:PAK6通过细胞骨架的重构影响非小细胞肺癌的侵袭及迁移能力。

p21活化激酶6削弱非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的分子机制

目的:探讨调控p21活化激酶6(PAK6)的微小RNA(miRNA)与非小细胞肺癌侵袭及迁移的关系,并了解PAK6下游分子信号机制。方法:通过生物信息学数据库预测靶向PAK6的miRNA,转染miRNA模拟物及抑制剂,Western blotting及实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测A549细胞中PAK6的表达量,萤光素报告酶实验检测预测miRNA对PAK6的调控,并行体外迁移及侵袭实验,检测转染miRNA对PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。转染目标miRNA及siPAK6,Western blotting检测A549细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达量。结果:生物信息学预测miR-23a可能是调控PAK6的靶向miRNA。Western blotting检测转染miR-23a组PAK6表达量下降69%,而转染miR-23a抑制剂组PAK6表达量上升52%,差异均有统计学意义。萤光素报告酶实验结果显示,转染miR-23a后野生型PAK6组萤光素酶活性下降52%,而突变组差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测3组PAK6 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。体外迁移及侵袭实验示,转染miR-23a组迁移细胞数减少73%,侵袭的细胞数减少59%。Western blotting检测发现,转染siPAK6组MMP-9的表达下降85%(P<0.01),转染miR-23a组MMP-9的表达下降76%(P<0.01)。结论:miR-23a通过PAK6-MMP-9信号途径引起非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的下降。

前列腺癌与前列腺增生组织中P21活化激酶6的表达及意义

目的探讨P21活化激酶6(PAK6)在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学染色方法,检测70例前列腺癌及20例前列腺增生石蜡包埋组织中PAK6的表达;并采用半定量RT-PCR技术检测10例前列腺增生和10例前列腺癌新鲜组织中PAK6mRNA表达情况,探讨PAK6蛋白表达与前列腺增生和前列腺癌的关系。结果 RT-PCR与免疫组织化学检测结果一致,PAK6在前列腺增生组织和前列腺癌组织中均有阳性表达,前列腺癌组织中PAK6阳性表达明显高于前列腺增生组织,有显著性差异(P<0.05)。70例前列腺癌中PAK6表达阳性率与分化程度相关。结论 PAK6阳性表达程度与前列腺癌恶性程度相关,提示其在前列腺癌的发病中可能扮演重要角色。检测PAK6变化对判断前列腺癌的生物学行为有参考价值。

雄激素受体与P21活化激酶6在前列腺癌组织中的表达及意义

应用免疫组织化学SP法检测PCa组织及前列腺增生(BPH)组织中AR、PAK6的表达,探讨了雄激素受体(AR)、P21活化激酶6(PAK6)与前列腺癌(PCa)发生的关系。结果表明:AR、PAK6在BPH和PCa组织中均有阳性表达,BPH和PCa前列腺组织中AR阳性表达率无显著性差异(P>0.05),而BPH和PCa前列腺组织中PAK6阳性表达率有显著性差异(P<0.05)。70例高、中、低分化前列腺癌中AR、PAK6表达阳性率逐渐升高,PCa组织中AR与PAK6二者表达呈现明显的正相关性。这说明,PAK6和AR阳性表达程度与PCa分级有关,提示二者在PCa的发病中可能扮演重要角色,检测PAK6和AR的变化对判断PCa的生物学行为有参考价值。

体外激酶实验筛选p21活化激酶6对雄激素受体的磷酸化位点

目的构建雄激素受体(AR)的点突变原核表达质粒,以体外激酶实验分析筛选p21活化激酶6(PAK6)对雄激素受体的磷酸化位点,更好的研究PAK6对AR的磷酸化所发挥的生物学功能。方法利用体外激酶实验分析PAK6对AR的较小磷酸化区域,并利用重叠延伸PCR的方法构建可能的磷酸化定点突变体;然后,体外纯化带有GST标签的突变体蛋白,及体外激酶实验筛选PAK6对AR的磷酸化位点。结果证明质粒构建成功,构建雄激素受体定点突变体,确定PAK6磷酸化雄激素受体位点。结论成功筛选PAK6对AR的磷酸化位点是578位丝氨酸。

P21活化激酶6在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨P21活化激酶6(PAK6)在前列腺癌(PCa)中的表达和意义。方法:应用免疫组织化学的SP法,检测前列腺癌(PCa)组织及前列腺增生(BPH)组织中PAK6的表达,探讨PAK6蛋白表达与PCa的关系。结果:PAK6在BPH组织和PCa组织中均有阳性表达。二者中PAK6阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。后者PAK6表达阳性率随分化程度升高。结论:PAK6阳性表达程度与PCa分级有关,提示它在PCa的发病中可能扮演重要角色,检测PAK6变化对判断PCa生物学行为有参考价值。

PAK6、ZNF217、G蛋白偶联受体48基因在膀胱癌演进过程中的表达变化

目的探究P21活化激酶6(PAK6)、锌指蛋白217(ZNF217)、G蛋白偶联受体48(GPR48)基因在膀胱癌演进过程中的表达变化。方法选取收治的行手术治疗的膀胱癌患者138例,取癌组织、癌旁组织,检测组织中PAK6、ZNF217、GPR48表达情况,分析PAK6、ZNF217、GPR48在癌组织、癌旁组织中的表达及在膀胱癌演进过程中的表达变化,三者相关性采用Pearson相关分析。结果与癌旁组织相比,癌组织中PAK6表达量显著降低,ZNF217、GPR48表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PAK6、ZNF217、GPR48表达与膀胱癌患者性别、年龄、肿瘤直径无关,差异无统计学意义(P>0.05);PAK6、ZNF217、GPR48表达与膀胱癌患者的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、浸润深度、复发情况有关,与中高分化、T_(a)~T_(1)期、无淋巴结转移、非肌层浸润、未复发患者相比,低分化、T_(2)~T_(4)期、有淋巴结转移、肌层浸润、复发患者的PAK6表达量降低,ZNF217、GPR48表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,PAK6与ZNF217、GPR48均呈负相关,ZNF217、GPR48之间呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PAK6在膀胱癌组织中低表达,ZNF217、GPR48在膀胱癌组织中高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移、浸润深度、复发有关,参与膀胱癌的演进。

微小RNA-133a-5p在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制

目的观察微小RNA-133a-5p(miR-133a-5p)在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的作用,并探讨其可能作用机制。方法①丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、有丝分裂原激活蛋白激酶6(mitogen-activated protein kinase 6,MAPK6)mRNA表达的影响观察:取18只大鼠分为丙泊酚组、模型组及对照组,每组6只。丙泊酚组及模型组对肝脏组织进行缺血再灌注操作,丙泊酚组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6 mRNA。②miR-133a-5p抑制剂联合丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA表达的影响观察:另取24只大鼠分为甲、乙、丙、丁组,每组6只。四组均对肝脏组织进行缺血再灌注操作,甲组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)及miR-133a-5p抑制剂,乙组、丙组在缺血再灌注操作的同时分别注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)、丙泊酚+等量生理盐水,丁组不做任何处理。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST,采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测四组大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA。结果与对照组相比,模型组大鼠血清AST、ALT活性升高,肝脏组织miR-133a-5p相对表达量降低、MAPK6mRNA相对表达量升高(P均<0.01);与模型组相比,丙泊酚组大鼠血清AST、ALT水平降低,肝组织miR-133a-5p相对表达量升高、MAPK6mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与乙组相比,甲组大鼠血清ALT和AST水平高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01);与乙和丙组相比,丁组大鼠血清ALT和AST水平升高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01)。结论注射丙泊酚后肝脏I/R大鼠的肝损伤程度减轻,肝脏组织miR-133a-5p表达升高、MAPK6 mRNA表达降低。抑制miR-133a-5p表达可逆转丙泊酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防治作用。丙泊酚可能通过促进肝脏组织miR-133a-5p表达,抑制肝组织MAPK6 mRNA表达,减轻大鼠的肝脏I/R损伤。

PAK6基因对人乳腺癌放疗敏感性及细胞凋亡影响及机制

目的探讨P21激活的蛋白激酶(PAK)6基因对乳腺癌细胞放疗敏感性及细胞凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-468为研究对象,细胞转染PAK6小干扰RNA(PAK6 siRNA组)和阴性对照序列(siRNA对照组),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放疗敏感性,Western印迹检测细胞中β-连环蛋白(catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3表达水平。结果 siRNA对照组PAK6mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率及细胞中β-catenin、c-myc、酶切Caspase-3蛋白水平与未转染组相比差异无统计学意义(P>0.05)。PAK6 siRNA组PAK6 mRNA和蛋白水平均明显低于未转染组,细胞凋亡率及细胞中酶切Caspase-3蛋白水平明显高于未转染组,细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平明显低于未转染组(P<0.01)。PAK6 siRNA组放疗敏感性较未转染组显著增加,增敏比为:1.896。结论干扰PAK6表达能够促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路及酶切Caspase-3水平有关。

PAK6基因沉默对前列腺癌细胞放疗敏感性研究

为探讨p21活化激酶6基因沉默对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞放疗敏感性的影响。采用利用蛋白质免疫印迹技术检测筛选出的靶向PAK6的sh RNA对LNCa P细胞中PAK6蛋白表达抑制情况。并以靶向PAK6的sh RNA转染LNCa P细胞,分别给予0、1、3、5Gy单次剂量放射治疗,观察放疗对PAK6基因沉默的前列腺癌细胞的抑制作用。用CCK-8法检测前列腺癌细胞的增殖活性;流式细胞仪测定其凋亡变化。结果显示,放疗能抑制前列腺癌细胞的增殖,增加其凋亡率;接受等剂量照射的PAK6基因沉默组前列腺癌细胞增殖减缓更明显,凋亡的肿瘤细胞显著增多。由此可知,PAK6基因沉默的前列腺癌细胞对放射治疗更敏感。

视网膜色素上皮细胞中蛋白酶体活性的下降促进IL-6表达的研究

目的探讨当视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的蛋白酶体活性下降时促进白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的机制。方法将人RPE细胞系分成两组培养,第一组只加DMEM,第二组加入DMEM(内含成分同上)和10μmol·L^(-1)的蛋白酶体抑制剂MG132,首先收集1 h、4 h、8 h等时间点的RPE细胞,测IL-6 mRNA含量。再分别在2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h等时间点,收集上清液,测IL-6和单核细胞趋化蛋白-1(mono-cyte chemo-attractant protein-1,MCP-1)的含量。然后测定MG132是否可以激活调控IL-6分泌的两条主要细胞信号通路——P38-丝裂原激活的蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)途径和c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)途径。再在细胞培养液中加入这些细胞信号通路的抑制剂,测上清中IL-6的含量,观察哪个信号通路的抑制剂可以抵消MG132促进IL-6分泌的作用。结果 MG132增加了RPE细胞IL-6的mRNA水平和蛋白质水平的表达,却降低了MCP-1的分泌。MG132可以激活调控IL-6分泌的两条主要细胞信号通路——P38 MAPK和JNK。P38 MAPK的抑制剂SB203580加入RPE培养液后不仅可以降低RPE细胞产生IL-6的基础分泌,而且可以抵消MG132促进IL-6分泌的作用;而当加入JNK的抑制剂SP600125后,虽然也可以降低IL-6的基础分泌,但却不能抵消MG132促进IL-6分泌的作用。结论在RPE中,蛋白酶体活性的下降可以激活P38 MAPK细胞信号通路,从而促进IL-6的产生。

PAK6、p53在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨P21活化激酶6(p21-activated kinase 6,PAK6)以及p53在膀胱癌中的表达及其临床意义。方法取膀胱癌患者85例作为膀胱癌组,并取其膀胱癌组织;取行膀胱部分切除或全部切除术患者35例为对照组,取其正常膀胱上皮组织。采用免疫组织化学法检测2组组织PAK6、p53蛋白阳性表达率。Biu-87组、T24组膀胱癌细胞和SV-HUC-1正常膀胱细胞分为Biu-87组、T24组和SV-HUC-1组,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞的PAK6、p53 mRNA表达水平。结果膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率低于对照组(P<0.05),膀胱癌组复发者PAK6蛋白阳性表达率低于原发者(P<0.05)。膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率在肿瘤数量、是否转移、病理分级以及临床分期上差异无统计学意义(P>0.05)。Biu-87组、T24组细胞PAK6 mRNA表达水平均低于SV-HUC-1组(P<0.05)。Biu-87组、T24组细胞p53 mRNA表达水平均高于SV-HUC-1组(P<0.05)。结论PAK6在膀胱癌细胞中以及膀胱癌组织中低表达,并且与膀胱癌的复发有着密切的联系,在膀胱癌发生发展中有抑制作用,PAK6可能会作为新的抑癌指标用以指导临床。p53在膀胱癌细胞与膀胱癌组织中高表达,与病理分级、临床分期等密切相关,具有评估膀胱癌预后的价值。

LncRNA RP1通过调控细胞周期蛋白质促进结肠癌细胞增殖

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs, lncRNAs)是一类无蛋白质编码功能,长度大于200 nt的RNAs。qRT-PCR实验证实,lncRNA RP1-506.5(命名为RP1)在人结肠癌细胞株中的表达量明显高于人正常结肠上皮细胞。RP1在结肠癌组织中的表达量为癌旁组织表达量的8.5倍。在HCT116细胞中,上调RP1的表达,同时在HCT8细胞中沉默RP1的表达,探讨RP1对结肠癌细胞生物学特性的影响。MTS检验、活细胞工作站增殖实验,结合平板克隆检测发现,过表达RP1能明显促进结肠癌细胞HCT116的增殖能力。而在HCT8细胞中沉默RP1表达后,该细胞的增殖能力明显减弱。流式细胞周期分析的结果表明,RP1能促进细胞周期快速通过G_1/S检测点,并能加速S期进程。荧光定量PCR、Western印迹检测发现,在HCT116细胞中上调RP1的表达,P21的表达水平下调,细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、依赖细胞周期蛋白激酶6(CDK6)表达水平上调;当沉默LncRNA RP1的表达时,能上调P21的表达水平,下调cyclinD1、CDK6的表达水平。上述结果表明,LncRNA RP1可通过调控周期相关蛋白质的表达促进结肠癌细胞增殖。

PAK6低表达对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响及机制

目的观察p21激活激酶6(PAK6)低表达对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法常规培养人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)及乳腺癌细胞系(MDA-MB-435S、MCF-7、MDA-MB-361),用qRT-PCR法检测各细胞中PAK6 mRNA表达,乳腺癌细胞中PAK6 mRNA相对表达量均高于MCF-10A,其中MCF-7中最高,将MCF-7作为实验细胞。将MCF-7随机分为si-NC组、si-PAK6组,分别用脂质体2000转染NC siRNA(对照小干扰RNA)和抑制PAK6表达的小干扰RNA(PAK6 siRNA)。转染24 h收集细胞,用qRT-PCR法检测细胞内PAK6 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞转移能力,Western blotting法检测细胞内磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)蛋白表达。结果si-NC组、si-PAK6组PAK6 mRNA相对表达量分别为1.06±0.12、0.45±0.08。与si-NC组比较,si-PAK6组PAK6 mRNA相对表达量低(P<0.05)。si-NC组、si-PAK6组细胞增殖率分别为(100.00±0.00)%、(47.37±7.41)%。与si-NC组比较,si-PAK6组细胞增殖率低(P<0.05)。si-NC组、si-PAK6组穿膜细胞数分别为(89.63±8.37)、(28.58±5.21)个。与si-NC组比较,si-PAK6组穿膜细胞数少(P<0.05)。pPI3K蛋白在si-NC组、si-PAK6组的相对表达量分别为1.42±0.20、0.75±0.11,pAKT蛋白相对表达量分别为1.59±0.18、0.81±0.14。与si-NC组比较,si-PAK6组pPI3K、pAKT蛋白相对表达量均低(P均<0.05)。结论抑制PAK6表达可阻止乳腺癌细胞增殖、迁移,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

O^6-环己基甲基鸟嘌呤对垂体瘤细胞系MMQ细胞增殖、凋亡、周期的影响及其机制

目的 观察不同浓度O6-环己基甲基鸟嘌呤对垂体瘤细胞系MMQ细胞增殖、凋亡、周期的影响,并探讨其可能机制.方法 取对数生长期MMQ细胞2 mL,接种于6孔板中.加入0.4、4μmol的O6-环己基甲基鸟嘌呤和二甲基亚砜(分别计为A、B、C组).细胞增殖实验检测细胞OD490值,流式细胞技术测算细胞Annexin V阳性百分数、PI阳性百分数及S期、G1期细胞比例,蛋白印迹实验检测细胞Cdk2、p21、p27蛋白.结果 与C组比较,A、B组培养24、48、72 h的OD490值降低(P均<0.05).与C组比较,A组Annexin V阳性百分数、PI阳性百分数升高(P均<0.05);与B组比较,A组Annexin V阳性百分数降低(P均<0.05).与C组比较,A、B组S期细胞比例降低,G1期细胞比例升高(P均<0.05).与C组比较,A、B组Cdk2蛋白表达降低,A组p27蛋白表达升高(P均<0.05);与B组比较,A组Cdk2蛋白表达升高,p21蛋白、p27蛋白表达降低(P均<0.05).结论 O6-环己基甲基鸟嘌呤可抑制MMQ细胞增殖,诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞在G1期,4μmol较0.4μmol效果更为明显,机制可能与其可抑制CDK2蛋白表达有关.

P21及CDK6与宫颈鳞状细胞癌的关系

目的观察P21、CDK6在宫颈鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其与宫颈鳞状细胞癌的关系。方法采用免疫组织化学ABC法检测100例宫颈鳞状细胞癌、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常宫颈组织中P21及CDK6的表达情况,分析他们与癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期的关系。结果宫颈鳞状细胞癌组织的P21及CDK6表达率均明显高于CIN组及正常组;P21的低表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期(P<0.05)有关,与肿瘤分化程度(P>0.05)无关;CDK6的高表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期(P<0.05)均有关。结论 P21及CDK6表达异常可能在宫颈鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用;且二者对判断宫颈鳞状细胞癌的预后有一定意义。

基于PAK6和Wnt/β-catenin信号通路的苦参碱对肺癌放疗敏感性的影响研究

目的探究苦参碱对肺癌放疗敏感性的影响和作用机制。方法人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组、2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、苦参碱组、苦参碱联合2 Gy组、苦参碱联合4 Gy组、甘氨双唑钠联合2 Gy组、甘氨双唑钠联合4 Gy组,通过克隆形成、细胞增殖、细胞凋亡评价苦参碱对A549细胞放疗敏感性的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、5 Gy放疗组、苦参碱组、苦参碱联合5 Gy组、甘氨双唑钠联合5 Gy组,记录小鼠瘤体积;Western blotting法检测A549细胞和小鼠瘤组织中β-连环蛋白(β-catenin)、p21激活蛋白激酶6(p21-activated protein kinase,PAK6)、c-myc、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果与单独放疗组相比,苦参碱联合放疗组A549细胞克隆形成、细胞增殖显著降低(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),裸鼠肿瘤体积显著降低(P<0.001),细胞和裸鼠肿瘤组织中PAK6、c-myc、磷酸化β-catenin蛋白表达显著下调(P<0.05、0.01、0.001),Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.001)。结论苦参碱通过干扰PAK6表达,抑制Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路,从而提高肺癌的放疗敏感性。