CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。

p21Cip1基因对V_(79-8)细胞周期的影响

为了探讨缺乏可测出Ｇ１、Ｇ２期Ｖ７９－８细胞株的细胞周期失调的分子机理，构建了人的周期负调控基因ｐ２１Ｃｉｐ１的可表达重组质粒ｐＸＪＳＣ，转染该细胞系，建立了高表达ｐ２１的Ｖ７９－８－ＳＣ细胞。以３ＨＴｄＲ放射自显影法，流式细胞光度术，细胞增殖曲线测定及免疫印迹技术，检测及比较了与细胞周期变化和增殖有关基因的表达，发现该细胞较对照细胞Ｖ７９－８－ｎｅｏＧ１期明显延长，Ｇ２期也稍有增加。与此同时，Ｇ１期调控的ｃｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４、Ｉｄ基因表达明显下降，Ｇ２期调控基因ｃｙｃｌｉｎＢ１的表达也有所下降。结果表明：此细胞系的细胞周期缺陷可能由于ｐ２１Ｃｉｐ１。

周期蛋白依赖激酶抑制因子p21Cip1的研究进展

ｐ２１Ｃｉｐ１是广泛的ＣＤＫｃｙｃｌｉｎ抑制因子。它的表达受ｐ５３的正调控，也可不依赖于ｐ５３。它与ＰＣＮＡ结合抑制ＤＮＡ的复制，同时又允许ＤＮＡ损伤的切除修复。近两年的研究还表明它与细胞分化密切相关。

大鼠海马发育过程中神经元和星形胶质细胞p21Cip1的表达

目的研究大鼠海马发育过程中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21Cip1在神经元和星形胶质细胞中的表达。方法应用免疫双标技术和流式细胞术检测p21Cip1在生后1d(P1),生后11d(P11),成年和老年大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中的表达。结果 (1)p21Cip1在各个年龄组大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中均有表达;(2)大鼠海马神经元和星形胶质细胞中p21Cip1在不同年龄组的表达趋势类似,均在P1表达水平最高;而从P11到老年组p21Cip1的表达则逐渐增高,且各组间p21Cip1的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 p21Cip1在大鼠海马神经元和胶质细胞中的表达随着大鼠的发育而变化,这提示p21Cip1可能在大鼠海马的发育过程中起重要作用。

应用纳米技术研究p21cip1基因对人RPE增殖的抑制作用

目的:通过新兴的纳米粒子基因载体观察p21cip1基因对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的抑制情况。方法:制备p21cip1基因纳米粒子,将其转染到培养的人RPE细胞,通过免疫组织化学检测p21cip1蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期的相关细胞量的变化。结果:p21cip1纳米粒子的DNA含量为3%,包封效率为78%,p21cip1基因在体内由于PLGA-PVA载体的保护作用,可以维持比质粒更长时间的有效期,减少质粒易被生物体内核酸酶降解的问题。流式细胞仪检测显示转染了目的基因的RPE细胞发生G1期阻滞,细胞增殖明显受到抑制。免疫组织化学检测结果显示转染了目的基因的RPE细胞p21cip1蛋白表达明显增强。结论:p21cip1基因有可能作为一个目的基因,借助新兴的基因载体纳米粒子用于抑制细胞增殖的基因治疗。

P21CIP1/WAF1与子宫内膜样腺癌相关性研究

P21CIP1/WAF1是细胞周期重要的调控因子,在协调DNA的复制及修复,细胞的生长、分化和衰老过程中起重要作用。

抑癌基因 P21CIP1/WAF1研究进展

近年来,细胞周期调控对肿瘤发展的影响越来越受到人们的关注。细胞周期调控有关的分子有:细胞周期蛋白(eyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyelin dependent kinese,CDK),磷酸化酶和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitor,CDI)。其中,cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进程起着决定性作用,而CDI通过在细胞周期适当的时间点上负调节CDK的活性,从而在细胞周期的进程中起着关键性作用,CDI可划分为二大类:一类为CIP/KIP。

p21CIP1/WAF1蛋白和增殖细胞核抗原在子宫内膜癌中的表达

目的：研究细胞周期调控与子宫内膜癌的关系。方法：应用免疫组化技术对45份子宫内膜癌组织中P21CIP1／WAF1蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）进行检测。结果：45份子宫内膜癌组织中30份（66．7％）P21CIP1／WAF1蛋白阳性，对照组均为阳性（P＜0．01）、PCNA（＋）18份，（＋＋）21份。P21CIP1／WAF1阳性率与PCNA指数呈负相关（P＜0．05）。结论：子宫内膜癌的发生与细胞周期调控有关。

FoxF1和FoxF2转录因子通过抑制 p21Cip1 CDK调控早期胃癌能量代谢的机制

目的探讨FoxF1和FoxF2转录因子通过抑制p21Cip1 CDK调控早期胃癌能量代谢的机制。方法将对数生长期的HGC27细胞分为FoxF1组、FoxF2组和对照组,分别转染200 ng/mL pcDNA3.0-FoxF1、200 ng/mL pcDNA3.0-FoxF2和等体积的磷酸盐缓冲液,采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移,蛋白质印迹检测蛋白表达,比色法检测葡萄糖、乳酸水平。结果转染24、36 h后,FoxF1组和FoxF2组的细胞增殖指数、迁移指数、p21Cip1、CDK1蛋白相对表达水平、葡萄糖、乳酸水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡指数、FoxF1和FoxF2蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而FoxF1组和FoxF2组相比以上指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论FoxF1和FoxF2转录因子的高表达能抑制p21Cip1/CDK信号通路的激活,导致糖酵解水平降低,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

大肠癌胃泌素、生长抑素的表达及比势与p16INK4a、p21CIP1、CDK2、CDK4的相关性研究

我们采用免疫组织化学SP法检测70例大肠癌组织中胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、p16INK4a、p21CIP1、CDK2及CDK4蛋白的表达隋况，探讨GAS、SS与细胞周期调控因子p16INK4a、p21CIP1、CDK2、及CDK4的相关性，了解GAS、SS对大肠癌细胞增殖周期的具体调控位点。

前列腺癌p21^(CIP1/WAF1)和PCNA的表达及相关性研究

目的 研究 p2 1CIP1 /WAF1 及 PCNA在人前列腺癌标本中的表达及相关性 ,阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系 .方法 以 36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象 ,采用免疫组化 SABC法对其 p2 1CIP1 /WAF 1及PCNA进行检测 ,并应用图像分析仪判定 ,统计学处理 ,对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究 .结果 p2 1CIP1 /WAF 1 及 PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和 /或棕褐色 ,定位于细胞质或细胞核 .所得数据均经统计学处理 .在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性 ,同时还发现 PCNA与 p2 1CIP1 /WAF 1存在显著负相关性 .结论 p2 1CIP1 /WAF1表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性 ,在发病机制中可能涉及到 p2 1CIP1 /WAF1 和 PCNA调节通路的异常 .同时 ,作为一种检测方法 。

表皮生长因子对食管鳞癌细胞Eca109细胞周期及其调控因子的影响

目的:探讨表皮生长因子(EGF)对食管鳞癌细胞Eca109细胞周期及相关调控因子的影响。方法:20 ng/ml重组人EGF(rh EGF)作用于血清饥饿的Eca109细胞24 h,采用流式细胞术检测EGF对Eca109细胞周期的影响,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21CIP1/WAF1(p21)、p27KIP1(p27)mRNA的表达情况,Western blot检测p21、p27蛋白的表达情况。结果:EGF组和对照组G1期细胞所占比例分别为(54.90±0.82)%和(65.94±0.74)%(P<0.01);qRTPCR结果显示p21 mRNA表达水平EGF组明显高于对照组,p27 mRNA表达水平EGF组明显低于对照组(P<0.01);Western blot结果显示,p21蛋白表达水平EGF组明显高于对照组,p27蛋白表达水平EGF组明显低于对照组(P<0.01)。结论:EGF有利于Eca109细胞从G1期过渡到S期,促进细胞增殖,可能与调节p21、p27的mRNA和蛋白的表达相关。

矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

RUNX3、p21^(CIP1/WAF1)、cyclinD1在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白在肝细胞性肝癌(HCC)和癌旁组织中的表达,以及三者在HCC组织中表达的相关性,三者的表达与临床病理因素之间的关系。方法采用回顾性分析方法,收集43例HCC新鲜标本及其癌旁组织,用免疫印迹(Western Blot)技术检测癌及癌旁组织中RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白的表达。结果RUNX3、p21CIP1/WAF1蛋白在HCC组织中的相对表达值低于癌旁组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);cyclinD1蛋白在肝癌组织中的相对表达值高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001);RUNX3、p21CIP1/WAF1c、yclinD1蛋白相对表达值均与TNM分期及组织分化程度有关(均P<0.05);HCC组织中RUNX3蛋白与p21CIP1/WAF1蛋白表达呈正相关(r=0.696,P<0.05),RUNX3蛋白与cyclinD1蛋白表达呈负相关性(r=-0.435,P<0.05)。结论RUNX3蛋白可能通过影响p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达影响肝细胞性肝癌的发生发展;联合检测RUNX3、p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达可能对HCC的诊断及预后判断有一定参考价值。

转化生长因子-β2体外抑制人角膜内皮细胞增殖的作用

目的:研究转化生长因子TGF-β2对体外培养人角膜内皮细胞(HCEC)增殖的影响机制。方法:体外培养经血清饥饿法获得同步化的HCEC,用不同浓度TGF-β2对HCEC进行不同时间的处理,采用细胞计数、MTT染色以及流式细胞仪(FCM)和RealtimePCR检测TGF-β2对HCEC的增殖、细胞周期及细胞中p27kip1和p21cip1表达的影响。结果:TGF-β21～15μg/L对HCEC有显著的增殖抑制作用,具有浓度和时间依赖性,9μg/L是TGF-β2抑制HCEC细胞增殖的峰浓度。9μg/LTGF-β2处理后,处于G1/G0期HCEC数量显著增加,并具有时间依赖性。9μg/LTGF-β2处理24h后,p27kip1表达量显著增加,48h后p27kip1和p21cip1的表达量均显著增加,也具有时间依赖性。结论:TGF-β2对HCEC具有显著的浓度和时间依赖性增殖抑制作用,可能通过先后诱导p27kip1和p21cip1表达量的增加将细胞拘留在G1/G0期来实现的。

染色质免疫沉淀技术分析肺腺癌A549细胞中p53蛋白与p21^(CIP1)和Bim基因转录启动子的结合

为了检测肺腺癌A549细胞内抑癌蛋白p53与CDK抑制蛋白p21CIP1和Bim基因转录调控区的结合情况,采用染色质免疫沉淀技术,用p53特异性抗体沉淀DNA,PCR检测p21CIP1和Bim基因5′端特异性序列。结果表明,在抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出p21CIP1和Bim基因5′端的特异性序列。因此证实在A549细胞内,p53蛋白可与p21CIP1和Bim基因转录启动子的特异区域结合,进而参与两基因的表达调控。

P21CIP_1/WAF_1、CD_(44)V_6在恶性卵巢上皮性肿瘤的表达及与淋巴结转移相关研究

目的 :探讨细胞周期调控蛋白 P2 1CIP1 / WAF1 和细胞粘附分子 CD44 V6 在恶性卵巢上皮性肿瘤中的增殖、浸润、转移过程中的作用及相互关系。方法 :采用免疫组化方法 (im munohistochemical assay IHCA)检测 5 5例恶性卵巢上皮性肿瘤组织中 P2 1CIP1 / WAF1 蛋白和 CD44 V6 的表达。结果 :(1)恶性卵巢上皮性肿瘤中 P2 1CIP1 / WAF1总体阳性率为 5 5 .5 4% ,其中 期的阳性率为 2 1.43%低于 至 期的阳性率 6 5 .85 % (P<0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移的原发灶中的阳性率 31.5 7%明显低于无淋巴结转移的原发灶中的阳性率 6 6 .6 7% (P<0 .0 5 )。 (2 ) CD44 V6 在 到 期癌组织中表达阳性率差别无显著性 (P>0 .0 5 ) ,而在 、 期中强阳性 ( 、 )率 5 3.13%明显高于 、 期 13.0 4%(P<0 .0 5 ) ,在有淋巴结转移的原发灶中的强阳性率 (6 8.42 % )高于无淋巴结转移组 19.44 % (P<0 .0 1)。 (3) P2 1CIP1/ WAF1与 CD44 V6 在有淋巴结转移的原发灶中的表达呈负相关 (P<0 .0 5 )。结论 :P2 1CIP1 / WAF1 抑制恶性卵巢上皮性肿瘤增殖、浸润、转移 ,而 CD44 V6

反义p21Cipl抑制RA诱导人白血病细胞HL-60的分化

全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,at RA)可诱导缺乏内源p53基因的人白血病细胞HL-60的粒细胞分化,在此过程早期,人p21周期蛋白依赖激酶抑制因子(Cyclin-dependent Kinase interacting protein,Cipl)的表达即有所增加,并且不依赖p53。将反应p21Cipl重组质粒转染进HL-60细胞,建立锌调表达反义p21Cipl的细胞系HLAC,再用RA诱导,发现反义p21Cipl可部分抑制HL-60细胞的分化,而此时CDK4和cyclin D3的表达在HLAC中明显增加,证明p21Cipl参与了这一分化过程的起始,CDK4和cyclin D3可能与这一过程密切相关。

曲古霉素A对人肾细胞癌Caki-1细胞体外生长的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)体外对人肾细胞癌Caki-1细胞生长情况、乙酰化组蛋白H3的水平以及基因P21cip1/waf1mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测TSA对Caki-1细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测TSA处理后Caki-1细胞乙酰化组蛋白H3水平的变化;实时荧光定量PCR检测TSA处理后Caki-1细胞P21cip1/waf1mRNA表达水平的变化。结果:TSA对Caki-1细胞生长有显著的抑制作用,呈明显的剂量、时间依赖性。TSA能明显提高Caki-1细胞乙酰化组蛋白H3的水平,促进P21cip1/waf1mRNA表达。结论:TSA对人肾细胞癌Caki-1细胞生长有抑制作用,机制可能与其提高Caki-1细胞乙酰化组蛋白H3的水平,促进P21cip1/waf1的表达有关。