矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

胃癌组织中p53蛋白、p21^(WAF1/CIP1/SDI1)表达的意义

采用 S- P免疫组化技术 ,检测 40例原发胃癌组织中 p53与 p2 1 WAF1/ CIP1/ SDI1蛋白的表达 ,应用 PCR- SSCP技术对 40例胃癌组织中 p2 1 WAF1/ CIP1/ SDI1基因状态进行分析 ,对照1 0例正常胃组织标本 ,与胃癌临床生物学指标进行相关性分析。结果 :p53、p2 1蛋白异常表达仅在胃癌组织中出现 ;p53与 p2 1蛋白异常表达与胃癌患者肿瘤发生部位、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及组织分化程度等指标无统计学相关性 (P>0 .0 5) ;胃癌组织中 ,p53蛋白与 p2 1蛋白表达间关系密切 (P<0 .0 5) ;40例胃癌组织中 ,p2 1基因 PCR扩增片段进行单链构象多态性分析 (SSCP) ,未发现异常条带。提示 :p53与 p2 1蛋白异常表达与胃癌发生有关 ,但与胃癌临床生物学行为之间未发现相关性 ;胃癌中 ,p2 1蛋白表达以依赖 p53途径为主 ;40例胃癌标本 PCR- SSCP检测 ,未发现 p2 1基因突变 ;基因状态的完整 ,也为利用可激活 p2 1基因的药物治疗 p53蛋白失活的胃癌提供了重要的理论依据。

CyclinE、CyclinD1和P21^(WAFI/CIP1)在喉癌癌变过程中表达及其临床病理意义

目的 探讨喉癌癌变过程中CyclinE、CyclinD1和P2 1WAFI/CIP1表达的临床病理学意义。方法 用免疫组化检测 2 0例正常粘膜、40例不典型增生病变和 60例喉癌组织中CyclinE、CyclinD1和P2 1WAFI/CIP1的表达。结果 CyclinE、CyclinD1和P2 1WAFI/CIP1阳性表达定位于细胞核。在喉癌癌变过程中 ,喉正常粘膜、不典型增生病变和喉癌中CyclinE阳性表达率分别为 :5 .0 % ( 1/2 0 ) ,2 0 .0 % ( 8/40 ) ,45 .0 % ( 2 7/60 ) (P <0 .0 0 1) ;CyclinD1阳性表达率分别为 :5 .0 % ( 1/2 0 ) ,3 0 .0 %( 12 /40 ) ,5 3 .3 % ( 3 2 /60 ) (P <0 .0 0 1) ;P2 1WAFI/CIP1阳性表达率分别为 :95 .0 % ( 19/2 0 ) ,75 .0 % ( 3 0 /40 )和 63 .3 % ( 3 8/60 ) (P <0 .0 5 )。P2 1WAFI/CIP1在高、中和低分化的喉癌中阳性表达率分别为 :76.2 % ( 16/2 1) ,65 .5 % ( 19/2 9)和 3 0 .0 % ( 3 /10 ) (P <0 .0 5 ) ;CyclinE、CyclinD1阳性表达与肿瘤细胞的分化无关。CyclinD1和P2 1WAFI/CIP1阳性表达显著相关 ,CyclinE与CyclinD1,CyclinE与P2 1WAFI/CIP1表达无相关性。结论 喉癌癌变过程中CyclinE和CyclinD1阳性表达率呈逐渐升高的趋势 ,而P2 1WAFI/CIP1阳性表达率呈逐渐降低的趋势。CyclinE和CyclinD1异常表达是喉癌发生中早期分?

肿瘤抑制基因p53和p21 WAF1/Cip1/Sdi1的相关性

抑癌基因p53在细胞周期调控、基因组稳定性维持、细胞分化和凋亡中起重要作用。DNA损伤后的细胞反应包括凋亡或细胞周期阻滞 ,它们都需要野生型p53基因转录活化。对此 ,目前研究集中在p53下游靶基因p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1 ,该基因编码一种细胞周期蛋白激酶抑制剂 ,后者在介导p53依赖性的细胞周期阻滞中起重要作用。然而DNA损伤诱发的凋亡需要有转录活性的p53而不是p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1参与。

p21^(WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏组织的增龄性变化及意义

目的研究p21野生型p53活化片段1/细胞周期蛋白依赖性激酶影响蛋白1/衰老细胞衍生抑制剂1(p21WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏中随年龄增长的表达变化规律。方法取3月龄、12月龄及24月龄健康雄性Wistar大鼠肾组织进行衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性染色,TUNEL法检测细胞凋亡,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Westernblotassay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达变化,并用免疫组化法检测p21WAF1/CIP1/SDI1在肾脏组织中的表达与定位。结果大鼠肾脏组织SA-β-gal活性随年龄增长逐渐增强,凋亡细胞也随年龄增长逐渐增加(P<0.05);p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA表达随年龄增长逐渐增强,不同月龄比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western印迹亦显示p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P<0.05)。免疫组化结果显示,p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达于大鼠肾小球足细胞,其在肾小管与间质细胞中也有表达,且随年龄增长表达增加(P<0.05)。结论p21WAF1/CIP1/SDI1在大鼠肾脏组织中的表达随年龄增加而增强,可作为肾脏组织中重要的衰老指标。

DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1

利用组织芯片研究p21^(WAF1/CIP1)和Rb基因在肝细胞肝癌中的表达

目的:利用组织芯片研究肝细胞肝癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)中p21WAF1/CIP1简称p21、Rb蛋白的表达及两者的关系。方法:建立含40例HCC肿瘤组织及其相应癌旁、远癌正常组织共120个微组织的组织芯片,应用免疫组织化学技术(SP法)检测HCC肿瘤、癌旁、远癌正常组织中p21、Rb蛋白的表达情况。结果:p21蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为27.5%,显著高于癌旁及远癌正常肝组织(P<0.05),并与HCC的组织学分级相关(P<0.05);Rb蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为42.5%,显著高于癌旁和远癌正常肝组织P<0.05,但与HCC肿瘤的大小和组织学分级均无统计学相关性(P>0.05)。HCC肿瘤组织中p21与Rb的表达呈负相关P<0.05。结论:p21、Rb蛋白表达缺失可能与HCC的发生有密切联系,p21与Rb基因在HCC中可能通过负反馈机制相互调节。组织芯片是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台。

CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

腺病毒介导p21^(WAF1/CIP1)基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的 :探讨 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 ,进一步了解p2 1基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法 :通过腺病毒介导外源性p2 1基因转移到有 p5 3基因突变的人胃癌细胞系SGC 790 1,对 p2 1基因的表达、细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 :外源性 p2 1基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成 ,流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad p2 1对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。 结论 :p2 1基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导 ,使 p2 1基因在肿瘤的基因治疗 ,特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。

肝细胞肝癌组织中P21^(WAF1/CIP1)与PCNA的表达及意义

目的:检测p21WAF1/CIP1与PCNA在肝脏各种病变组织中的表达与分布情况,探讨P21WAF1/CIP1与PCNA在肝细胞癌发病机制中的作用,以及在肝良性与恶性病变鉴别诊断中的价值.方法:采用免疫组织化学方法(DakoEnVisionTMSystems)结合组织病理学观察,检测了36例慢性肝炎?28例不典型增生?52例肝细胞癌组织中的P21WAF1/CIP1与PCNA的表达与分布情况.结果:在慢性肝炎?不典型增生和肝细胞癌组织中,P21WAF1/CIP1阳性检出率明显下降,阳性检出率分别为72.2%(26/36),53.6%(15/28)和26.9%(14/52);三种病变组织中PCNA标记指数明显增加,分别为24.2±6.5%,55.6±7.2%和76.9±10.4%.P21WAF1/CIP1与PCNA的表达在三者之间均存在着显著的差别(P<0.05),明P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均与组织分化程度相关,即组织分化程度高,P21WAF1/CIP1表达多;组织分化程度低,P21WAF1/CIP1表达少或不表达;PCNA的表达则相反.结论:在肝细胞癌发病过程中,P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均有可能起着重要的作用;同时检测P21WAF1/CIP1与PCNA的表达?分布情况,在肝癌患者预后判断中具有辅助诊断价值.

白藜芦醇体外对肝癌HepG2细胞分化及P21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的探讨白藜芦醇在体外对肝癌细胞分化及相关周期蛋白依赖激酶抑制因子P21WAF1/CIP1的影响。方法体外培养肝癌HepG2细胞,用MTT法检测白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,用倒置显微镜观察肝癌细胞的形态改变,用放射免疫法检测其AFP分泌,以RT-PCR方法检测HepG2细胞中P21WAF1/CIP1mRNA的表达,用免疫细胞化学检测其P21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果白藜芦醇呈时间剂量性抑制HepG2细胞株的增殖,使其亚细胞结构趋于正常,AFP分泌量下降,并显著上调HepG2细胞中P21WAF1/CIP1 mRNA和蛋白的表达。结论白藜芦醇能诱导HepG2细胞在体外向正常肝细胞分化,并上调其P21WAF1/CIP1的表达。

P21 WAF_1/CIP_1在卵巢上皮性肿瘤中的表达与临床意义的研究

目的 :探讨P2 1WAF1/CIP1在恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达与临床意义。方法 :应用免疫组化S P检测P2 1WAF1/CIP1在 2 0例良性、10例交界性、5 5例恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达 ,并分析P2 1WAF1/CIP1与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理指标的关系。结果 :P2 1WAF1/CIP1在良性、交界性与恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达总阳性率及强阳性率均有显著性差异 (P =0 0 0 7,P强 =0 0 0 1) ,并随良性、交界性、恶性而降低表达 (P <0 0 1,P强 <0 0 0 1) ;与恶性卵巢上皮性肿瘤的临床分期、组织分化、淋巴转移、腹水及预后均有关 (P =0 0 11,0 0 0 0 ,0 0 14 ,0 0 11;P强 =0 0 37,0 0 0 3,0 0 16 ,0 0 0 2 ,P <0 0 5 )。结论 :P2 1WAF1/CIP1在恶性卵巢上皮性肿瘤的形成和发展中发挥重要作用 ,检测P2 1WAF1/CIP1蛋白表达情况对卵巢肿瘤的良恶性鉴别 ,判断预后 ,探索卵巢癌的发生过程 ,从而指导卵巢癌的基因治疗均有积极的意义。

外源性p21^(WAF1/CIP1)基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的 :探讨外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响 .方法 :采用脂质体介导法将p2 1 WAF1 /CIP1 基因质粒转导入人胶质瘤细胞系SHG44细胞 ,然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察 .结果 :酶切电泳和斑点杂交显示p2 1 WAF1 /CIP1 基因成功的转染至SHG44细胞 .转染p2 1 WAF1 /CIP1 基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生 ;生长速度明显慢于亲代细胞 ,其倍增时间约是对照细胞的二倍 ;细胞周期发生明显改变 ,G1 期明显增多 ,S期明显减少 .结论 :外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用 。

p21^(WAF1/CIP1)和PCNA在骨肉瘤中的表达及对预后的评价

目的：探讨p21(WAF1/CIP1)基因mRNA及p21WAF1蛋白、PCNA（增殖细胞核抗原）与骨肉瘤的发生、发展之间的关系及其对预后的评价。方法：采用原位杂交及免疫组化法（LSAB法）检测p21(WAF1/CIP1)基因mRNA及p21WAF1蛋白、PCNA在骨肉瘤中的表达。结果：原位杂交结果显示，p21(WAF1/CIP1)mRNA在45例骨肉瘤中有19例阳性表达，阳性率为42％；在10例骨纤维结构不良中有8例阳性表达，阳性率为80％。免疫组化结果显示，p21(WAF1)蛋白在45例骨肉瘤中有8例阳性表达，阳性率为17.7％；在10例骨纤维结构不良有5例阳性表达，阳性率为50％。PCNA在45例骨肉瘤中均有表达，阳性率为100％。p21(WAF1/CIP1)mRNA表达阳性者术后生存时间与p21(WAF1/CIP1)mRNA表达阴性者术后生存时间之间的差异有显著性（P<0.05）。结论：①随着骨肿瘤恶性度的升高，p21(WAF1/CIP1)mRNA及p21WAF1蛋白的表达下降；②p21(WAF1/CIP1)mRNA及p21WAF1蛋白表达的数量和水平的下降是导致人类骨组织发生恶性骨肿瘤的可能原因之一；③随访结果显示，p21(WAF1/CIP1)mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。