六味小青龙汤抑制p38MAPK/p22phox通路减轻哮喘大鼠慢性炎症作用机制研究

目的探讨六味小青龙汤抑制p38MAPK/p22phox哮减轻喘大鼠慢性炎症的作用机制。方法120只SD大鼠分为空白组,模型组,六味小青龙汤低、中、高剂量组,地塞米松组6组,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠干预后血清,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组肺组织病理改变,比较肺组织炎症细胞浸润;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组肺组织p38MAPKmRNA、p22phoxmRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DUOX1、DUOX2、p38MAPK及HO-1蛋白表达。结果模型组BALF IL-4、IL-5、TNF-α水平均高于空白组(P<0.05),地塞米松及六味小青龙汤能降低哮喘大鼠BALF中IL-4、IL-5含量(P<0.05)。p22phoxmRNA、p38MAPKmRNA在模型组中表达升高(P<0.05),中剂量六味小青龙汤能降低p22phoxmRNA表达(P<0.05),低、中、高剂量六味小青龙汤组均能使p38MAPKmRNA表达降低(P<0.05),地塞米松对p22phoxmRNA、p38MAPKmRNA表达的影响不明显(P>0.05)。DUOX1在初期模型组中表达较空白组升高,六味小青龙汤高剂量能降低DUOX1的表达(P<0.05)。DUOX2在模型组中较空白组表达升高,六味小青龙汤中、高剂量能降低DUOX2的表达(P<0.05)。HO-1在模型组中较空白组表达升高,高剂量六味小青龙汤以及地塞米松能降低HO-1的表达(P<0.05)。p38MAPK蛋白在模型组中较空白组表达升高,六味小青龙汤中、高剂量以及地塞米松均能降低p38MAPK蛋白表达(P<0.05)。六味小青龙汤及地塞米松组肺组织炎症细胞浸润均较模型组改善。结论六味小青龙汤可抑制p38MAPK/p22phox通路减轻哮喘大鼠肺组织病变和慢性炎症,下调p38MAPKmRNA、22phoxmRNA与DUOX1、DUOX2、HO-1、p38MAPK蛋白表达,降低IL-4、IL-5、TNF-α水平。

熊果酸抑制去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞生长的作用机制研究

目的:研究熊果酸(UA)对去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞生长的抑制作用并探讨其药理机制。方法:MTT法检测不同浓度UA分别作用22Rv1细胞12、24、48、72 h后对细胞的增殖抑制作用;倒置相差显微镜观察UA对22Rv1细胞形态的影响;克隆形成实验检测UA对22Rv1细胞平板克隆形成的影响;流式细胞术检测UA对22Rv1细胞凋亡的影响;Western印迹法检测UA对22Rv1细胞p38 MAPK蛋白和磷酸化、STAT3蛋白和磷酸化,以及NF-κB/p65蛋白表达的影响。结果:UA能显著抑制22Rv1细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P<0.05);以5、10、20μmol/L作为UA低、中、高浓度干预24 h,显微镜观察发现随着UA浓度增大,22Rv1细胞数目显著减少,细胞皱缩、质膜起泡;克隆形成实验结果显示,UA能显著减少22Rv1细胞克隆群落形成(P<0.05);流式细胞术结果显示,UA能显著诱导22Rv1细胞凋亡细胞比例增多(P<0.05);Western印迹结果显示,UA能增强p38 MAPK的磷酸化,并且抑制STAT3的磷酸化和NF-κB/p65蛋白的表达。结论:UA可抑制去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞的生长,促进22Rv1细胞凋亡,p38 MAPK/STAT3/NF-κB信号通路参与调控UA对22Rv1细胞的生长抑制作用。

核心蛋白聚糖在胰腺癌beta细胞功能中的作用及对线粒体分离融合的影响

目的探究核心蛋白聚糖(DCN)在胰腺癌组织中的表达及对胰岛beta细胞线粒体分离融合的影响。方法征集21例胰腺导管腺癌(PDAC组)、25例胰腺神经内分泌肿瘤(PNET组)和4例健康者(健康组)胰腺组织;免疫组织化学检测胰腺组织中DCN表达;免疫荧光法检测胰腺组织中线粒体融合蛋白2(MFN2)和动力相关蛋白1(DRP1)表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测胰腺组织中DCN、线粒体分裂因子(MFF)、MFN1、MFN2、视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、DRP1和线粒体分裂蛋白1(FIS1)表达;CCK-8法检测正常糖培养条件下DCN(0、1、10、100和200 nmol/L)处理对人胰岛β细胞(0、12、24和48 h)增殖的影响;胰岛β细胞分为2组:正常糖和高糖(HG)培养,均分别采用0 nmol/L和100 nmol/L DCN处理细胞24 h,CCK-8法再次检测各组细胞增殖,Annexin V/PI染色检测各组细胞凋亡,酶联免疫吸附实验检测各组细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Western blot法检测MFF、MFN1、MFN2、OPA1、DRP1、FIS1、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(P22^(phox))、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38亚基(p-p38)、p38、胰岛素样生长因子Ⅰ受体蛋白(IGFIR)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和AKT的表达。结果与健康组比较,PDAC和PNET组癌组织中DCN、DRP1、FIS1和MFF表达水平明显降低,MFN1、MFN2和OPA表达水平明显升高(P<0.05);在正常糖条件下,100 nmol/L和200 nmol/L DCN处理24 h和48 h的细胞增殖倍数均明显高于对应时间点的0 nmol/L DCN组,且具有时间和剂量依赖性(P<0.05);在正常糖和HG条件下,100 nmol/L DCN组的细胞增殖倍数均明显高于0 nmol/L DCN组(P<0.05);在正常糖和HG条件下,100 nmol/L DCN组的AnnexinV^(+)PI^(-)细胞比例较0 nmol/L DCN组无明显变化(P>0.05);无论正常糖或是HG条件下,0 nmol/L DCN组IGFIR表达水平与100 nmol/L DCN组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);在正常糖条件下,100 nmol/L DCN组的培养上清液中胰岛素分泌量,细胞中DRP1、FIS1、MFF、P22^(phox)、p-p38和p-AKT表达水平明显高于0 nmol/L DCN组(P<0.05),MFN1、MFN2和OPA表达水平低于0 nmol/L DCN组(P<0.05);在HG条件下,100 nmol/L DCN组培养上清液中胰岛素分泌量,细胞中P22^(phox)和p-p38表达明显高于0 nmol/L DCN组(P<0.05),DRP1、MFN2和OPA表达明显低于0 nmol/L DCN组(P<0.05)。结论DCN可通过激活P22^(phox)/MAPK通路调控胰岛β细胞的增殖、胰岛素分泌和线粒体融合分裂。