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长角血蜱保护性抗原基因P_(27/30)的克隆和原核表达
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作者 杨彩明 杨光友 +2 位作者 张晓谦 贾小勇 余增莹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1406-1410,共5页
采用RT-PCR技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到P27/30基因,扩增序列全长670 bp,包含完整的开放阅读框,编码201个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为23.38 ku。同源性分析表明孤雌生殖长角血蜱中国株与日本株P27/30基因同源性高达99.85... 采用RT-PCR技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到P27/30基因,扩增序列全长670 bp,包含完整的开放阅读框,编码201个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为23.38 ku。同源性分析表明孤雌生殖长角血蜱中国株与日本株P27/30基因同源性高达99.85%。经RT-PCR检测分析,该基因在孤雌生殖长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱、饥饿成蜱和饱血成蜱这几个阶段均有表达。将该基因亚克隆后连接到pET32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导可成功进行表达。表达的目的蛋白大小为24 ku左右,与预期大小一致;Western-blot显示兔抗长角血蜱全虫抗体能够识别该重组表达蛋白。 展开更多
关键词 孤雌生殖 长角血蜱 p27/30基因 克隆 原核表达
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长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 田占成 刘光远 +3 位作者 李知新 谢俊仁 王路 张林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期413-416,共4页
参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导... 参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。 展开更多
关键词 长角血蜱 肌钙蛋白基因p27/30 克隆 序列分析
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