p21^waf1-p27^kip1基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的探讨外源性p21^waf1-p27^kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。方法应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21^waf1、pIRES-p27^kip1、pIRES-p21^waf1-p27^kip1真核表达载体，转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7，未转染组、转染空质粒组细胞做对照，Western免疫印迹法验证转染前后p21^waf1、p27^kip1基因蛋白表达情况；噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化；免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况。结果Western免疫印迹法证实p21^waf1、p27^kip1、p21^waf1-p27^kip1基因转染24h后，其蛋白表达量明显增多（P〈0.01），与对照组比较，各转染实验组细胞生长明显受抑制（P〈0.01），细胞周期大部分停滞于G1期，各实验组G1期和S期细胞比例依次为：（69.52±3.21）％、（18.38±2.51）％，（60.83±3.02）％、（24.52±1.89）％，（78.37±2.83）％、（15.27±1.74）％，对照组则为（47.28±2.25）％、（33.52±1.97）％，中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前（13.47±0.33）％明显减少：（5.07±0.38）％，（6.28±0.35）％，（3.47±0.23）％，两两比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论外源性p21^waf1和p27^kip1基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制，二者联合转染时效果显著。提示，乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程，p21^waf1和p27^kip1在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用，对于p21^waf1、p27^kip1基因失活、低表达或不表达的乳腺癌，联合转染外源性p21^waf1、p27^kip1基因不失为一种有效的治疗手段。

p21^(cip1)和p27^(kip1)基因遗传多态与食管癌及贲门癌发病风险的关联

背景与目的:有研究表明p21cip1和p27kip1的基因多态性与乳腺癌、肺癌、前列腺癌等肿瘤易感性有关。本研究分析中国北方高发区人群食管鳞状细胞癌(ESCC)和贲门腺癌(GCA)与p21cip1和p27kip1基因多态性之间的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测299例ESCC患者、256例GCA患者及437名健康对照人群p21cip13′非翻译区和p27kip1第109位密码子基因多态性分布情况。结果:ESCC患者组p21cip1T等位基因型频率(42.8%)显著高于健康对照组(36.7%)(P=0.02),ESCC和GCA患者组p27kip1V等位基因型频率(分别为96.8%和96.1%)均显著高于健康对照组(92.9%)(P值分别为0.00和0.02)。ESCC患者组p21cip1基因型频率分布与健康对照组相比有显著性差异(P=0.04),与C/C和C/T基因型相比,T/T基因型可显著增加ESCC的发病风险(校正OR=1.93,95%CI=1.12～3.94)。ESCC和GCA患者组p27kip1基因型频率分布与健康对照组相比均有显著性差异(P分别为0.00和0.01),与V/G和G/G基因型相比,V/V基因型可显著增加ESCC和GCA的发病风险(校正OR分别为2.44和2.01,95%CI分别为1.21～4.02和1.12～3.68)。当按吸烟和上消化道肿瘤家族史状况进行分层分析时发现,与V/G和G/G基因型相比,V/V基因型可显著增加吸烟人群患ESCC和GCA(校正OR分别为2.24和2.61,95%CI分别为1.14～4.03和1.25～3.82)以及有家族史人群患ESCC的发病风险(校正OR=2.04,95%CI=1.04～3.43)。两基因联合分析显示,携带p21cip1T/T和p27kip1V/V基因型可显著增加患食管癌和贲门癌的发病风险(校正OR分别为3.78和2.56,95%CI分别为1.46～5.89和1.06～4.78)。结论:在中国北方人群中,p21cip1基因多态性可能与食管癌的易感性有关,p27kip1基因多态性可能与食管癌和贲门癌的易感性有关,而且这两个基因的多态性可能在食管癌和贲门癌发病中起联合作用。

p57^(Kip2)和p27^(Kip1)基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法采用RTPCR技术,分别检测p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在108例胃癌组织及60例癌旁组织中的表达。结果p57Kip2基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为28.70%,显著低于癌旁组织中的阳性表达率56.67%(P<0.05),p57Kip2基因mRNA相对含量检测胃癌组织为0.59±0.17,显著低于癌旁组织1.63±0.21(P<0.05);p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为23.15%,低于癌旁组织中的阳性表达率31.67%(P>0.05),p27Kip1基因mRNA相对含量检测胃癌组织为1.53±0.23,稍高于癌旁组织1.46±0.35(P>0.05)。结论胃癌组织中p57Kip2和p27Kip1基因蛋白表达的降低与转录机制有关,并在胃癌的发生中存在不同的抑癌途径或不同的调控机制。

p27^(kip1)基因与肿瘤关系的研究进展

该文对p27kip1基因与肿瘤关系的研究进展进行阐述,为研究肿瘤发生、发展、诊断及治疗提供了一定的科学依据。

p27^(Kip1)基因及蛋白在骨肉瘤中的表达及其意义

目的探讨p27Kip1基因在骨肉瘤MG-63、U2细胞株及骨肉瘤组织中的表达情况及其与骨肉瘤生物学行为的关系。方法培养人骨肉瘤细胞MG-63、U2和人成骨细胞OB;以半定量RT-PCR技术检测3种细胞中p27Kip1基因的mRNA表达情况。以免疫细胞化学染色技术检测MG-63、U2及OB中p27Kip1蛋白的表达情况。以免疫组织化学方法检测骨肉瘤、骨软骨瘤、正常骨3种组织中p27Kip1蛋白的表达情况,并探讨其与临床病理学特征之间的关系。结果p27Kip1基因mRNA的表达在人骨肉瘤细胞MG-63、U2和人成骨细胞OB中没有差别。p27Kip1蛋白的表达在OB中高于MG-63和U2,MG-63和U2间p27Kip1蛋白的表达没有差别。骨肉瘤组织的p27Kip1蛋白表达低于骨软骨瘤组织和正常骨组织,p27Kip1蛋白表达与Enneking外科分期及是否发生转移相关。结论骨肉瘤细胞、组织p27Kip1蛋白表达明显降低;p27Kip1蛋白的表达可作为骨肉瘤预后判断的一个有价值的指标。

p27^(KIP1)-绿色荧光蛋白融合基因在HCC-9204细胞中的瞬时表达

目的 :观察 p2 7KIP1 绿色荧光蛋白 (GFP)融合蛋白在肝癌细胞系HCC 92 0 4中的表达及定位。方法 :根据p2 7KIP1基因的编码顺序 ,应用PCR技术将 p2 7KIP1基因 3′末端终止密码TAA突变为TGT ,并通过基因重组技术将其与GFP基因融合。再采用脂质体转染法 ,将 p2 7KIP1 GFP融合基因转入HCC 92 0 4细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达情况。结果 :DNA序列测定的结果显示 ,p2 7KIP1基因与基因库中已收录的 p2 7KIP1的序列相比较 ,仅有 1个核苷酸的差异。荧光显微镜显示 ,在转染GFP基因的HCC 92 0 4 /GFP细胞中 ,荧光均匀地分布于整个细胞 ;而在转染融合基因 p2 7KIP1 GFP的HCC 92 0 4 /GFP p2 7细胞中 ,绿色荧光主要见于核内。结论 :转染的HCC 92 0 4细胞能高效表达融合基因p2 7KIP1 GFP ,且定位于细胞核内 ,与 p2 7KIP1基因的表达方式相同。

外源性p27^(KIP1)基因抑制SGC7901细胞的增殖

研究p2 7KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期及细胞增殖的影响。采用脂质体转染法将p2 7KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SGC790 1中 ,通过免疫印迹分析以及RNA斑点杂交方法检测p2 7KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达 ;细胞活力实验及软琼脂集落形成实验显示转染p2 7KIP1基因对细胞增殖的作用 ;流式细胞仪观察目的基因对该细胞的细胞周期的影响。结果显示 ,转染p2 7KIP1的SGC790 1细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p2 7KIP1的表达 ;细胞活力检测显示在外加Zn离子 4 8h后细胞生长被抑制 4 2 % ;转染p2 7KIP1的SCG790 1细胞的集落形成率较对照组明显减少(P <0 0 1) ;p2 7KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数 ,由 33 6 8%增加到6 9 2 9% (P<0 0 1)。研究表明 ,p2 7KIP1基因可抑制SGC790 1细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖。

鼻咽癌组织中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因甲基化及其相关性研究

目的探讨鼻咽癌组织中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化状态在鼻咽癌临床早期诊断和治疗中的作用。方法应用甲基化特异性PCR方法对65例鼻咽癌组织(鼻咽癌组)和30例正常鼻咽上皮组织(对照组)中的p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化阳性率分别为26.2%(17/65)和61.5%(40/65),两者总检出率为72.3%(47/65);而对照组中均未检测到p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化;两组间p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化阳性率的差异具有统计学意义(均P<0.01)。鼻咽癌组中p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化与其临床分期及病理特征均无明显相关性(均P>0.05)。同时,p15^(INK4b)基因甲基化和p27^(KIP1),基因甲基化间无明显相关性(r=-0.03,P>0.05)。结论p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化可能参与鼻咽癌的发生、发展;p15^(INK4b)和p27^(KIP1)基因启动子区甲基化具有一定的肿瘤特异性,有助于鼻咽癌的早期辅助诊断和治疗。

p27^(kip1)基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞系生长抑制作用的研究

目的 :研究逆转录病毒介导的p2 7kip1基因过度表达对细胞周期和细胞增殖的影响。方法 :构建含人 p2 7kip1基因的逆转录病毒真核表达载体 ,应用脂质体介导法 ,将外源性 p2 7kip1基因转染人胃癌细胞系BGC 82 3,应用Westernblot、FCM等方法 ,检测p2 7kip1蛋白在胃癌细胞内的表达及其对细胞增殖的影响。结果 :获得含人 p2 7kip1cDNA的重组逆转录病毒载体 ,外源性野生型 p2 7kip1基因整合于胃癌细胞并获稳定表达 ,细胞生长速度受抑制 ,同时出现G1期阻滞。结论 :构建的 p2 7kip1重组逆转录病毒能有效介导外源性 p2 7kip1在人胃癌细胞系中高表达 ,抑制细胞增殖 ,为进一步研究以 p2 7kip1为目的基因的肿瘤基因治疗奠定了基础。

PTEN基因稳定转染联合辐射对肿瘤细胞周期进程及G_1期激酶抑制蛋白P27^(kip1)表达的影响

目的:研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期进程及G1期激酶抑制蛋白P27表达的影响。方法:脂质体包裹重组载体体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定表达细胞株,光学显微镜和透射电镜观察稳定转染细胞形态,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞术研究稳定转染联合0~10Gy X-射线照射对胶质瘤细胞周期进程及P27kip1的表达。结果:稳定转染PTEN基因的SHG-44细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5Gy以内PTEN蛋白的相对表达量随照射剂量增加而增加;稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X-射线照射细胞周期发生明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞,细胞周期相关蛋白P27表达上调。结论:PTEN基因稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞G1期阻滞,并与P27kip1表达上调有关。

肝癌组织中p27^(KIP1)基因的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:探讨p27KIP1与肝细胞癌的发生发展及其凋亡的关系.方法:利用免疫组织化学方法检测52例肝细胞肝癌组织中p27KIP1的表达,同时采用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞.结果:p27KIP1在癌旁肝组织中的阳性细胞指数(10.7±7.6)明显高于在癌组织中的阳性细胞指数(1.5±0.9,P<0.01).并且在包膜受侵犯者(1.4±0.76vs1.8±0.3,P<0.01)、肝内转移者(1.2±0.2vs1.5±0.4,P<0.05)及低分化的肝癌组织(1.9±0.7vs1.4±0.4,P<0.01)中p27KIP1蛋白表达明显降低.进一步的研究发现,肝癌组织中高AI(apoptosisindex)组的p27KIP1阳性细胞指数(1.7±0.6)明显高于低AI组(1.4±0.3,P<0.05).结结论论:p27KIP1基因的低表达与HCC的浸润、转移及恶性程度有着密切的联系.并且肝癌细胞的凋亡与p27KIP1基因的表达有关.

结直肠癌PTEN基因表达及与ERK2、p27^(kip1)的相关性

目的:研究结直肠癌中的PTEN、ERK2及p27^(kip1)蛋白的表达及相互关系,初步探讨他们在结直肠癌发生发展中的生物学意义.方法:用免疫组织化学染色快捷法,检测40例结直肠癌组织、18例结直肠腺瘤、13例结直肠正常黏膜中PTEN蛋白、p27^(kip1)和ERK2蛋白的表达,比较PTEN蛋白表达与临床病理指标的关系,及其与p27^(kip1)、ERK2蛋白表达的相关性.结果:结直肠癌癌组织PTEN,ERK2和p27^(kip1)蛋白表达的阳性率与腺瘤及正常组织间比较差异有显著性(57.5% vs 72.2%,100%;70.0% vs 61.1%,23.1%:62.5% vs 77.8%,100%;P<0.05):PTEN蛋白表达强度与ERK2蛋白表达强度之间呈负相关(r=-0.452,P<0.05),与p27蛋白表达强度呈正相关(r=0.379,P<0.05);PTEN,p27^(kip1)蛋白与结直肠癌分化程度、淋巴结转移及Dukes分期相关(P<0.05):ERK2蛋白随结直肠癌淋巴结转移、Dukes分期的进展而增高.结论:抑癌基因PTEN的表达与结直肠癌生物学行为密切相关;在结直肠癌发生、发展过程中,可能由于PTEN蛋白的低表达或失表达抑制p27^(kip1)蛋白表达及Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的异常激活,使细胞发生癌变,并促进癌变细胞的浸润、转移.

p27^Kip1在RA诱导人神经前体细胞分化中的作用

目的观察全反式视黄酸(RA)对体外培养的人神经前体细胞的诱导作用,研究在这个过程中细胞周期调节蛋白p27Kip1、p21Cip1及相关分子cdk2、cyclinE的变化,探讨p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中的作用。方法取12wk的人胚胎前脑纹状体,原代培养人神经前体细胞。在细胞进入对数生长期时给予1μmol·L-1RA诱导。在诱导的d1、3、7,用相差显微镜观察细胞形态的变化;用免疫细胞化学染色、RT-PCR等方法检测p27Kip1、p21Cip1及其相关的cdk2、cyclinE的变化。结果在RA诱导d3,人神经前体细胞形态发生变化,至d7时已接近成熟神经元形态。免疫细胞化学染色结果显示p27Kip1的表达在RA诱导d3增加,在RA诱导d7时明显增加,与未经RA诱导的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,p27Kip1 mRNA的表达在RA诱导d3增加,并在RA诱导d5达到高峰,而p21Cip1 mRNA的表达在RA诱导后略呈下降趋势。cdk2、cy-clinE的mRNA水平在RA诱导前后没有明显变化。结论p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中具有重要作用,并且其表达增加是通过转录水平调节的。

转化生长因子β1和即刻早期基因及p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)、即刻早期基因 (c fos)、周期素依赖性激酶抑制蛋白 p2 7在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互之间的关系 ,探讨其表达对胆脂瘤侵袭能力的影响。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶染色法检测TGF β1、c fos和 p2 7在 31例胆脂瘤上皮、11例胆脂瘤患者外耳道上皮和 10例正常外耳道上皮中的表达 ,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果 TGF β1和c fos在胆脂瘤上皮中表达阳性率分别为 87 1%和 83 9% ,与胆脂瘤患者外耳道上皮和正常外耳道上皮相比表达差异有显著性。而p2 7在胆脂瘤上皮和外耳道上皮组上皮中均未见阳性表达。胆脂瘤上皮中c fos与TGF β1表达无相关性 (r =0 339,P =0 331) ;胆脂瘤侵袭能力与c fos表达有高度显著相关关系 (r =- 0 96 5 ,P <0 0 1) ,与TGF β1表达也有高度相关关系 (r =- 0 4 0 6 ,P <0 0 1)。 结论 即刻早期基因c fos在胆脂瘤中表达显著增强 ,且与胆脂瘤的侵袭能力有高度显著相关性 ,提示高c fos表达是胆脂瘤高增殖特征的因素之一。TGF

宫颈癌中p27^(Kip1)基因的表达与体外药物敏感性的关系

背景与目的:p27K ip1基因是调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要基因。它与诱导肿瘤细胞的凋亡和化疗药物的耐药也有关系。本文旨在探讨宫颈癌组织中p27K ip1基因的表达与体外药敏的关系。方法:采用MTT法检测了部分化疗药物在46例宫颈癌组织中的抑制率,并采用免疫组织化学方法检测了癌组织中p27K ip1基因的表达。结果:宫颈癌组织中p27K ip1表达的阳性率为15.2%(7/46)。顺铂(DDP)、表柔比星(E-ADM)、替尼泊苷(VM26)、紫杉醇(Taxol)、吉西他滨(Gem zar)、氟尿嘧啶(5-FU)和BLM的平均抑制率分别为47.6%、38.0%、42.7%、27.4%、23.0%、26.3%和24.8%。DDP、VM26和Taxol在p27K ip1表达阴性的宫颈癌标本中的抑制率显著低于阳性标本(P<0.05),而在其他药物中差异无显著性。结论:p27K ip1的表达可作为判断肿瘤对化疗药物的敏感性的指标,指导临床用药。

p27kip1基因对食管癌细胞DNA复制及蛋白质合成的影响

目的 :研究p2 7kip1基因对人食管癌细胞EC -970 6的DNA复制及蛋白质合成的影响。方法 :重组体腺病毒Ad -p2 7kip1转染EC -970 6细胞 ,采用细胞生长计数、[3H] -TdR、[3H] -Leucine掺入法、流式细胞术 ,研究其对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 :Ad -p2 7kip1组细胞生长明显受抑 ,[3H] -TdR和 [3H ] -Leucine掺入量均明显减少 ,与对照组比较P <0 0 1;食管癌细胞的增殖明显受抑制。结论 :p2 7可有效抑制食管癌细胞的增殖活性 ,这与其抑制食管癌细胞DNA复制及蛋白质合成有关。

5-Aza-CdR对胃癌细胞系p27kip1基因异常甲基化的影响

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞系SGC7901的p27kip1基因异常甲基化及表达的影响。方法选择不同浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的SGC7901细胞后,用MSP法检测用药前后细胞中p27kip1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中p27kip1的mRNA及蛋白表达的变化。结果 p27kip1基因的甲基化状态得到了逆转,p27kip1基因的mRNA和蛋白表达得到增加。结论 SGC7901细胞中p27kip1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。

p27kip1基因纳米粒子抑制鼠移植静脉内膜增殖的实验研究

用美国FDA批准使用的生物可降解材料聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)为载体材料,制备载p27kip1基因的纳米粒子.用激光光散射法测定纳米粒子的平均粒径为288.9nm,粒径呈窄分布,扫描电镜观察纳米粒子表面光滑.DNA含量为3%.包封效率为86%.观察p27kip1基因纳米粒子的体外释放情况,发现DNA体外最初释放速度较大,约1周后释放速度开始减缓,可维持平稳释放15天以上.体外转染大鼠血管平滑肌细胞,用流式细胞仪检测到p27kip1基因纳米粒子对细胞周期进程的抑制作用.建立自体静脉移植大鼠模型,随机分成三组进行试验:p27kip1基因纳米粒子组,空白纳米粒子组,单纯静脉移植组.分别于给药后3天、7天、14天、28天取材,HE染色及Verhoeff染色检测内膜厚度,蛋白质印迹检测P27抑癌基因蛋白的表达,免疫组化SABC法检测移植静脉内膜PCNA、E2F表达.动物模型试验中转基因组内膜平均厚度较其他组明显减少(P<0.01);转基因组PCNA的表达较其他组明显降低(P<0.01);转基因组E2F的表达7￣14天较其他组显著降低(P<0.01);对照组及单纯静脉移植组之间均无明显差异.纳米粒子作为p27kip1基因载体能够有效抑制自体静脉移植后内膜平滑肌细胞的增殖.

外源性p27^(Kip1)基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响

目的:探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响。方法:应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。结果:免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制。结论:外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用。