胃癌P2RX7表达状态与中医脾虚毒蕴证的相关性研究

目的:探讨胃癌组织中P2RX7的表达水平与胃癌脾虚毒蕴证的相关性,并探讨胃癌脾虚毒蕴证的危险因素。方法:收集胃癌新发病例的中医四诊资料,填写中医症状调查表,并进行辨证分型,收集患者的手术或胃镜石蜡切片进行免疫组织化学检测,采用χ^(2)检验、Pearson相关性分析和二分类Logistic回归分析方法研究P2RX7表达与胃癌脾虚毒蕴证的关系。结果:本研究共纳入80例胃癌患者。其中男42例,女38例;有肿瘤家族史者21例;P2RX7高表达者47例,低表达者33例;TNM分期为Ⅰ期者4例,Ⅱ期者19例,Ⅲ期者44例,Ⅳ期者13例;中医辨证为脾虚毒蕴证者36例,非脾虚毒蕴证者44例。胃癌脾虚毒蕴证患者的P2RX7蛋白表达水平显著高于胃癌非脾虚毒蕴证患者(P<0.05),Pearson相关性分析显示P2RX7与脾虚毒蕴证存在相关性(R^(2)=0.253,P<0.01),Logistic回归分析显示P2RX7蛋白高表达和肿瘤家族史是胃癌患者脾虚毒蕴证的独立危险因素(P<0.05)。结论:胃癌脾虚毒蕴证患者的肿瘤组织中P2RX7显著高表达,胃癌患者肿瘤组织中P2RX7表达状态与脾虚毒蕴证相关,且P2RX7高表达是胃癌患者脾虚毒蕴证的独立危险因素。

P2RX7基因单核苷酸多态性与原发性痛风及高尿酸血症的相关性

目的探讨P2RX7基因的五个位点(rs2230911,rs208294,rs435309,rs1718119和rs3751143)的单核苷酸多态性与宁波地区汉族男性原发性痛风发病和高尿酸血症的相关性。方法男性原发性痛风患者293例、男性高尿酸血症患者187例和男性健康对照者269例,用SNaPshot SNP分型技术对P2RX7基因五个位点的基因型进行检测。用Logistic回归来评估基因型与疾病的易感性程度。对各组基因型均进行Hardy-Weinberg平衡检验,用SHEsis软件对SNP位点进行连锁不平衡检验,并进行单倍型分析。结果P2RX7基因rs2230911,rs208294和rs1752809三个位点在研究人群中符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05)。其中原发性痛风和健康对照组基因型频率差异有统计学意义(P=0.002),且原发性痛风组等位基因rs2230911-G的频率明显高于健康对照组(OR=1.755,95%CI=1.278~2.410,P<0.01);在显性模型中,原发性痛风的基因型(CG+GG)频率明显高于健康对照组(OR=1.876,95%CI=1.303~2.701,P=0.001)。结论 P2RX7基因rs2230911位点单核苷酸多态性可能与宁波地区汉族男性原发性痛风发病相关,等位基因G是痛风发病的危险因素。该研究为原发性痛风的诊疗提供了可能的新靶点。

P2RX7基因多态性与中国汉族男性原发性痛风的相关性

目的探讨P2RX7基因四个位点(rs2230911、rs208294、rs435309和rs28360447)的单核苷酸多态性与我国汉族男性原发性痛风发病的相关性。方法选取219例男性原发性痛风患者和247例男性健康对照者,用SNa Pshot SNP分型技术对P2RX7基因四个位点的多态基因型进行检测。用Hardy-Weinberg平衡检验研究对象的基因型,P>0.05认为所选研究对象达到遗传平衡,具有可靠的群体代表性。用SPSS 18.0统计学软件对实验所得数据进行统计学处理,符合正态分布的计量资料比较用t检验或方差分析;计数资料比较则用卡方检验。用Logistic回归分析计算比值比(OR)及95%可信区间(95%CI),估计痛风发病的相对风险。双侧P<0.05认为差异有统计学意义。结果 P2RX7基因rs2230911、rs208294和rs435309三个位点在研究人群中符合哈迪-温伯格遗传平衡定律(P>0.05)。其中rs2230911位点基因型CG+GG发生痛风的风险是基因型CC的1.79倍[OR(95%CI)=1.79(1.20,2.67),P=0.005]。等位基因G发生痛风的风险是等位基因C的1.56倍[OR(95%CI)=1.56(1.10,2.21),P=0.013]。其余位点在两组基因型及等位基因的分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P2RX7基因rs2230911位点多态性可能与我国汉族男性原发性痛风发病相关,等位基因G是痛风发病的危险因素。

P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡参与TSA缓解的烟草烟雾暴露所致的小鼠子宫损伤过程

目的探索P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡是否参与了曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)缓解的烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程。方法通过烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露30 d方法制备CS暴露小鼠模型,CS暴露的同时给予TSA进行治疗;HE染色观察CS暴露后小鼠子宫组织形态学变化;Western blot技术检测小鼠子宫肌层P2RX7,细胞焦亡相关蛋白(IL-1β、ASC、NLRP3和cleaved caspase-1)和细胞凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3和cleaved caspase-9)的表达水平;Real time-PCR技术检测Hdac 1,P2rx7,Il-1β和Asc的mRNA转录活性。结果HE染色结果显示,CS暴露后小鼠子宫肌层明显变薄,间质细胞和腺体数量明显减少;Western blot结果显示,TSA明显抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织P2RX7、细胞焦亡和凋亡相关蛋白的表达;Real time-PCR结果显示,TSA抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织中Hdac1,P2rx7和Asc的mRNA转录活性升高。结论P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡参与了TSA缓解的CS暴露所致的小鼠子宫损伤过程。

P2RX7基因单核苷酸多态性与尿酸水平的相关性研究

目的探讨P2RX7基因的3个位点(rs435309,rs2230911和rs208294)的单核苷酸多态性与尿酸水平的相关性。方法选取261例健康体检者,用SNaPshot SNP分型技术对P2RX7基因位点进行基因型的分型检测。结果 P2RX7基因rs435309,rs2230911和rs208294位点符合哈迪-温伯格遗传平衡定律。各位点的基因型尿酸水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P2RX7基因的单核苷酸多态性(rs435309,rs2230911和rs208294)与血清尿酸水平无关。

miR-125a-3p靶向作用P2RX7抑制糖尿病肾病小鼠肾纤维化发展

目的 探究miR-125a-3p靶向作用P2RX7对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化发展的影响。方法 60只小鼠均分为对照组、模型组、miR-125a-3p NC组和miR-125a-3p mimic组,构建DN小鼠模型,腹腔注射miR-125a-3p NC或mimic。qRT-PCR检测肾组织miR-125a-3p表达,Western blotting检测P2RX7、Col-I、α-SMA蛋白表达,ELISA检测血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),HE染色和Masson染色检测肾脏病理改变和胶原蛋白体积分数(CVF),双荧光素酶报告检测miR-125a-3p与P2RX7的靶向关系。结果 与对照组比较,模型组和miR-125a-3p NC组P2RX7、Cr、BUN和CVF、Col-I和α-SMA蛋白升高,miR-125a-3p表达降低(P<0.05);与模型组和miR-125a-3p NC组比较,miR-125a-3p mimic组上述趋势得到逆转(P<0.05)。miR-125a-3p可与P2RX7靶向结合(P<0.05)。结论 miR-125a-3p高表达靶向抑制P2RX7蛋白,缓解DN小鼠的肾纤维化,保护肾功能。

P2rx7基因单核苷酸多态性与抑郁症关系的Meta分析

目的:探讨嘌呤P2X受体(P2rx7)基因和抑郁症发病之间的关联程度。方法:设定检索词,对国内外相关数据库进行检索,利用统计软件分析数据。结果:最终筛选得到7篇文献,病例、对照组分别有3 262、6 712例,主要采用4种遗传模型进行Meta分析:显性模型(AG+GGvsAA)、隐性模型(GGvsAG+AA)、纯合比较(GGvsAA)、杂合比较(AGvsAA)。结果显示P2rx7基因多态性rs2230912与抑郁症无显著相关性。亚组分析提示研究间异质性来源可能为大样本研究,而小样本研究亚组分析提示该位点突变呈现保护性作用趋势,但无统计学意义。各研究无明显发表偏倚。结论:P2rx7基因多态性可能与抑郁症发病无关,需要进一步研究证实。

银杏蜜环口服溶液对孤养结合慢性不可预知温和应激大鼠抑郁模型P2RX7/NLRP3信号通路的影响

目的:通过观察银杏蜜环口服溶液对抑郁模型大鼠的影响,探讨银杏蜜环口服溶液抗抑郁的机制。方法:50只SD大鼠,除正常组外,采用孤养结合慢性不可预见性应激(CUMS)大鼠抑郁模型,模型成功的大鼠分为模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1),银杏蜜环口服溶液高、低剂量组(618,309 mg·kg-1),每组10只;连续造模21 d,刺激第7天给药,以10 mL·kg-1体积连续给药14 d,正常组与模型组灌胃蒸馏水;进行糖水偏好实验、旷场实验、悬尾不动实验;苏木素-伊红(HE)染色法观察抑郁大鼠海马组织病理形态变化;运用多因子检测技术(Luminex)及蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测各组大鼠海马组织白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及NOD样受体3(NLRP3)及其相关激活信号通路蛋白的表达水平。结果:连续给药14 d后,与正常组比较,模型组大鼠糖水消耗率明显降低、直立次数明显减少、悬尾不动累积时间明显延长(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠表现为直立、穿格次数增加,糖水消耗率增加,悬尾不动累积时间明显缩短(P<0.05,P<0.01)。HE结果显示,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠海马区神经元细胞排列有序,轻度疏松,小胶质细胞浸润不明显;与正常组比较,模型组海马组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠脑组织IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。分子生物学实验表明,与正常组比较,模型组嘌呤能受体P2X7(P2RX7),NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组可明显抑制P2RX7,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:银杏蜜环口服溶液可以改善孤养结合CUMS诱导的大鼠抑郁样行为,其作用机制与调控P2RX7/NLRP3信号通路相关。

芪风固表颗粒对肺炎克雷伯菌感染的预防和抑制作用研究

目的:研究芪风固表颗粒对肺炎克雷伯菌(Kp)感染小鼠的预防和抑制作用。方法:BALB/C小鼠,预防给予芪风固表颗粒高(2.6 g/kg)、中(1.3 g/kg)、低(0.65 g/kg)剂量40 d后,乙醚麻醉小鼠,滴鼻感染5×10^(8)CFU/mL的Kp50μL1次,感染24 h后处死小鼠。HE染色观察给药后小鼠肺组织结构病理改变;肺泡灌洗观察不同组小鼠肺泡灌洗液内白细胞数;小鼠肺组织细菌浓度测定观察各组肺组织中细菌浓度;免疫组织化学法观察Pannexin1/P2RX7在肺组织中的表达位置;蛋白免疫印迹法检测肺组织Pannexin1/P2RX7/Caspase-11蛋白表达变化;Real-Time PCR法观察肺组织Pannexin1/P2RX7/Caspase-11 mRNA表达变化。结果:与模型组比较,HE染色结果显示,芪风固表组的肺组织病理结构有所改善,仅出现少量充血以及少量炎细胞浸润,肺组织损伤程度降低;给药组小鼠肺泡灌洗液中白细胞数降低(P<0.05,P<0.01);小鼠肺组织细菌浓度测定结果显示,芪风固表颗粒高、中剂量组较模型组细菌浓度数明显减少(P<0.05);免疫组化结果发现,芪风固表各剂量组Pannexin1、P2RX7蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);蛋白印迹结果显示,芪风固表高剂量组Pannexin1、P2RX7、Caspase-11和中剂量组P2RX7的表达降低(P<0.05);Real-Time PCR结果显示,芪风固表高剂量组及中剂量组Pannexin1、P2RX7、Caspase-11 mRNA表达降低(P<0.05)。结论:芪风固表颗粒可以对肺炎克雷伯菌感染引起的肺部炎性改变及损伤有明显的改善作用,机制可能与抑制Caspase-11细胞焦亡通路信号有关。

基于NOD样受体3/嘌呤能受体P2X7通路探讨芪蛭真武汤对盐敏感高血压肾病大鼠的机制

目的基于NOD样受体3(NLRP3)/嘌呤能受体P2X7(P2RX7)通路探讨芪蛭真武汤对盐敏感高血压肾病大鼠的机制。方法选取Dahl/SS盐敏感大鼠28只,按随机数字表法分为模型组、芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组,每组各7只,SS-13BN盐不敏对照大鼠(含有肾素基因13号染色体替换的大鼠)7只(空白对照组)。各组大鼠行HE和Masson染色和免疫组化反应。记录动物一般状态观察,肾脏指数,全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮,Western blot检测蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血压明显升高,与模型组比较,中药不同剂量治疗组血压水平降低,其中阳性对照组呈现血压下降趋势;真武汤高剂量组治疗28 d后血压水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);真武汤常剂量组治疗第14、21天后血压水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮和肌酐比较,模型组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组较模型组有不同程度降低,常剂量组下降,差异有统计学意义(P<0.05);模型组较对照组肾间质增宽,肾小管出现散在的空泡状,有部分蓝色胶原纤维沉积;芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组胶原纤维沉积分数较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,模型组NLRP3、P2RX7、CCL2和IL-1β蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照的NLRP3、P2RX7、CCL2和IL-1β蛋白表达较空白对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),芪蛭真武汤常剂量组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对盐敏感高血压肾病大鼠应用芪蛭真武汤治疗,可有效改善大鼠肾组织病理损害,通过调控P2RX7/NLRP3通路降低大鼠炎症指标,改善盐敏感高血压肾病大鼠症状,以常剂量芪蛭真武汤效果最佳。

温和灸对溃疡性结肠炎大鼠天枢穴P2RX_7的作用机理研究

目的:溃疡性结肠炎(UC)是艾灸治疗的有效病症,本研究从艾灸作用的始动环节与穴位响应密切相关的角度,探讨温和灸的对穴区P2X嘌呤受体7表达的影响。方法:将20只SD雄性大鼠随机分成正常组6只、模型组14只。采用自由饮用4%葡聚糖硫酸钠(DSS)法建立UC模型,连续饮用7天后,取2只大鼠进行模型鉴定,造模成功后将剩下的12只大鼠随机分成UC组、UC+温和灸组,第8天改为自由饮用1%DSS溶液,第8天开始采用温和灸天枢穴(双)干预7天,每天10 min。疗程结束后,称量大鼠体质量、取双侧天枢穴皮肤,采用HE染色观察病理组织学形态变化,采用免疫组化法对P2RX7的蛋白检测,从分子水平观察温和灸对天枢穴皮肤的作用;采用q RT-PCR的方法检测P2RX7在天枢穴皮肤中的表达。结果:与正常组比较,UC组体质量于第4天开始明显降低(P<0.05),天枢穴P2RX7基因的m RNA表达水平降低(P<0.05),天枢穴皮肤中主要分布在真皮层皮脂腺中的P2RX7明显减少(P<0.05)。与UC组比较,UC+温和灸组在第8天明显增加(P<0.05),天枢穴P2RX7基因m RNA表达水平增高(P<0.05),天枢穴皮肤P2RX7主要分布在皮脂腺中的明显增加(P<0.05)。温和灸干预后所增加体重与天枢穴P2RX7免疫组化IOD值的相关系数r=0.823(P<0.05)。结论:温和灸能明显增加UC大鼠体重,其起效的机制可能与上调天枢穴位皮肤P2X嘌呤受体7密切相关。

βB2基因敲除小鼠睾丸组织长链非编码RNA的差异性表达分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在βB2基因敲除小鼠睾丸中的表达及其影响睾丸发育的可能机制。方法采用lncRNA芯片技术,筛选野生型(WT)和βB2基因敲除(KO)小鼠睾丸组织(均n=3)中lncRNA及信使RNA(mRNA)表达谱的变化;对差异表达lncRNA和mRNA进行GO数据库分析及KEGG数据库分析,建立调控网络图;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的lncRNA和mRNA,探讨调控通路。结果 (1)两组小鼠睾丸组织差异表达的lncRNA共140条,mRNA共477条;(2)通过GO数据库分析,筛选出差异表达lncRNA共12条,其中上调7条,下调5条;(3)经KEGG数据库进行路径分析,发现差异表达mRNA主要经由Ca2+信号、配体-受体相互作用等信号通路起作用;(4)用关联矩阵法建立了lncRNA和mRNA共表达网络图,共有17个节点,12条连接,包含9条lncRNA和8条mRNA;其中Rsl1由3条lncRNA调控,Lpo和Mpo各由2条lncRNA调控,Hdac1、Ephb4等各由1条lncRNA调控。(5)qRT-PCR分析结果表明,在βB2基因敲除小鼠睾丸组织中,lncRNA A-30-P01019163和P2rx7的表达均下调(P<0.05)。结论 lncRNA与βB2基因的晶状体外功能密切相关,其中lncRNA A-30-P01019163可能通过调控下游P2rx7mRNA的表达影响睾丸组织细胞周期及信号转导,进而调控睾丸发育。

电针原发性高血压模型大鼠太冲、曲池穴观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素Ⅱ的影响

目的通过观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素Ⅱ的影响,分析电针降压机制。方法选择原发性高血压模型大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)作为高血压动物模型,将SHR随机分为4组:假手术组、miR9抑制剂+电针组、电针组、模型组,Wistar大鼠作为空白组(共5组,每组10只)。其中,miR9抑制剂+电针组在SHR室旁核内行双极插管植入术后注射microRNA-9抑制剂(每单侧100 nL/天),假手术组、电针组注射等剂量脑脊液。术后5天进行电针干预,穴取双侧太冲、曲池。在电针前和电针后3、7、10、14天测量收缩压,连续电针治疗2周后取材,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对各组大鼠下丘脑microRNA-9的表达进行定量检测,利用qPCR和蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测各组大鼠P2X7受体的mRNA和蛋白水平,使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测下丘脑室旁核和血浆中炎性因子白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANGⅡ)的含量。最后使用抗体Iba1进行免疫组化染色,评估下丘脑室旁核内小胶质细胞的活化程度。结果(1)与假手术组相比,电针组降低了高血压大鼠的收缩压(P<0.01),与电针组相比,miRNA9抑制剂+电针组的降压效果下降(P<0.05);(2)电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比,miRNA9水平明显升高(P<0.01);(3)与miRNA9抑制剂+电针组相比,电针组室旁核、血清中的IL-6含量更低(P<0.01,P<0.01),与miRNA9抑制剂+电针组相比,电针组室旁核、血清中的TNF-α含量更低(P<0.05,P<0.05);(4)与假手术组相比,电针组的ANGⅡ含量下降明显(P<0.01),但电针组与miR-9抑制剂+电针组ANGII的含量相比无统计学差异(P>0.05);(5)与假手术组相比,电针组降低了P2X7受体的蛋白及mRNA表达(P<0.01,P<0.01),与电针组相比,miRNA9抑制剂+电针组中P2X7受体的蛋白及mRNA表达明显较高(P<0.01,P<0.01);(6)免疫组化染色结果显示,电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比,室旁核小胶质细胞激活程度明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论电针干预后影响了SHR下丘脑室旁核内miRNA-9的表达,并可能通过抑制P2X7受体的表达、炎症因子IL-6、TNF-α的释放、小胶质细胞的激活,从而降低血压。

柴胡桂枝汤减轻慢性胰腺炎神经性腹痛机制的探讨

目的:探讨柴胡桂枝汤(CHGZT)减轻三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠慢性胰腺炎(CP)神经性腹痛的初步机制。方法:50只雄性SD大鼠随机均分为5组,分别为假手术组、模型组、CHGZT低、中、高剂量组(4、8、16 g·kg^(-1))。假手术组轻轻翻动胰腺后即关腹,模型组采用向胰管内逆行注射2%TNBS-10%乙醇。CHGZT在造模后4周开始灌胃给药,连续2周。5组大鼠分别于术后6周进行Von Frey疼痛阈值检测;苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺组织慢性炎症及纤维化病变;免疫组化法(IHC)检测PGP9.5蛋白表达,同时观察神经周围炎性改变;IHC及免疫荧光(IF)染色观察胰腺相关胸段脊髓后角离子钙结合蛋白-1(Iba-1)、嘌呤能受体P2X7(P2RX7)的定位及P2RX7和小胶质细胞的共表达。结果:与假手术组比较,模型大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分显著增高(P<0.01),大鼠在不同力值疼痛反应值均明显升高(P<0.05,P<0.01),PGP9.5周围炎性浸润评分显著升高(P<0.01),模型组大鼠脊髓后角Iba-1与P2RX7表达均显著增强(P<0.01);与模型组比较,CHGZT高、中剂量组明显降低大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分,明显降低疼痛反应值,明显降低PGP9.5周围炎性浸润评分(P<0.05,P<0.01),CHGZT高、中、低剂量组显著降低Iba-1及P2RX7表达(P<0.01)。结论:CHGZT可明显减轻CP模型大鼠腹痛程度,可能和通过抑制胰腺内神经炎症、降低相应脊髓后角小胶质细胞P2RX7活化有关。