基于嘌呤能受体P2X7R的痛风性关节炎病理研究

目的 观察冰水泳浴对痛风大鼠模型病理变化的影响并探究其中P2X7R的调控机制。方法 雄性SD大鼠分为正常(NORM)组和实验组,实验组包括痛风对照(GC)组、冰水泳浴(IWS)组和亮蓝G(BBG,P2X7R拮抗剂)组。实验组大鼠通过尿酸酶抑制法联合Coderre法塑造高尿酸血症合并痛风性关节炎模型。冰水泳浴组大鼠在Coderre法造模后的0 h和12 h,分别于深约0.5 m的冰水混合物中进行5 min的耐力游泳,BBG组则在造模后立即腹腔注射BBG溶液1次。公式计算踝关节肿胀指数;尿酸酶法检测大鼠血清尿酸水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;HE染色观察踝关节和滑膜组织的病理变化;Western blot和免疫组化分别检测滑膜组织中P2X7R和NLRP3蛋白表达。结果 与正常组相比,实验组大鼠血清尿酸水平及踝关节肿胀指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),且滑膜组织均存在不同程度的炎性浸润。与痛风对照组相比,冰水泳浴组踝关节肿胀指数在12 h显著升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量(P<0.01)及滑膜组织中P2X7R、NLRP3蛋白量均有显著表达(P<0.05);病理结果显示软骨表面破损,滑膜组织出现严重增生与糜烂,并伴有大量炎性细胞聚集。BBG组大鼠滑膜组织的P2X7R、NLRP3蛋白表达与病理损伤较痛风对照组无显著变化(P>0.05),而血清IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均有显著改善(P<0.01)。结论 冰水泳浴模拟的寒冷刺激和剧烈运动可加重痛风性关节炎的病理损伤,其机制可能与关节局部P2X7R的高表达有关。

P2X7R过表达的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达观察

目的观察嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7的配体(P2X7R)过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞单钠尿酸盐(MSU)晶体诱导痛风炎症反应过程中NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白、IL-1β、TNF-α表达情况。方法取人单核细胞白血病细胞系THP-1,并随机分为过表达组、空白组、模型组、对照组;过表达组和空白组分别转染P2X7R过表达质粒、空白载体质粒,转染5 d,将过表达组、空白组、模型组THP-1细胞用100 ng/mL的PMA刺激3 h后分化为巨噬细胞,另将MSU晶体用氢氧化钠溶解配制成浓度为100μg/mL的MSU乳糜状悬液加入培养液中孵育6 h;对照组正常培养。分别采用RT-PCR法和Western blot法测算巨噬细胞P2X7R mRNA、蛋白,ELISA法检测巨噬细胞上清液IL-1β、TNF-α,Western blot法测算巨噬细胞NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白。结果与对照组比较,过表达组、空白组、模型组P2X7R mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组、空白组比较,过表达组P2X7R mRNA、蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论P2X7R过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达增加,IL-1β、TNF-α水平升高可能通过激活NLRP3蛋白来实现。

P2X7嘌呤能受体在自身免疫性疾病中的作用

嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7(P2X7R)是嘌呤能受体P2X家族的重要成员,分布于体内多种组织和器官,主要表达于单核细胞和巨噬细胞,在人体的固有免疫中发挥重要作用。多种炎症状态下炎症局部组织中P2X7R的表达上调,进而调控炎症介质的表达和释放,诱导细胞产生炎症细胞因子,介导炎症反应和免疫应答,参与自身免疫性疾病的发生和发展,近年来P2X7R的研究备受关注。本文主要对P2X7R在炎症反应中的作用及其在自身免疫性疾病中的研究进展做一综述。

P2X7R在缺血性中风发病中作用的研究进展

由于老年人口的持续增加,脑血管病已成为中老年人死亡的主要原因之一。因此,进一步研究缺血性中风发生、发展的机制,积极开展有效的早期预防,是广大医务工作者的共同愿望。该文对P2X嘌呤能受体7(P2X7R)在缺血性中风发病中作用的研究进展进行综述,旨在为缺血性中风的治疗提供理论依据。

湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物(+)-chlorahupetenes B对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用

目的评价湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物(+)-chlorahupetenes B[(+)-CHB]对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)炎症反应的影响及作用机制。方法RAW264.7细胞分为对照组(给予等体积DMSO)、模型组(给予等体积DMSO)、地塞米松磷酸钠注射液(Dex,阳性对照,1μmol·L^(-1))组和(+)-CHB低、中、高浓度(5、10、20μmol·L^(-1))组。各组分别加入相应药物孵育细胞1 h,除对照组外,其余组加入LPS(1μg·mL^(-1))诱导24 h造成炎症应答模型。细胞增殖检测法用于评估细胞活力;Griess反应检测一氧化氮(NO)浓度;酶联免疫分析检测炎症细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的生成;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-6和TNF-αmRNA表达;Western blotting检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)p65、p-NF-κBp65、NLRP3、嘌呤能受体(P2X7)蛋白表达水平。结果与模型组比较,(+)-CHB减少了梭形细胞数量,使大部分细胞恢复正常形态;显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β生成(P<0.01),显著降低COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α、NLRP3、IL-1βmRNA水平(P<0.05、0.01);显著降低TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NLRP3、P2X7蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论(+)-CHB通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路和P2X7/NLRP3/IL-1β炎症小体轴激活缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。

银杏蜜环口服溶液对孤养结合慢性不可预知温和应激大鼠抑郁模型P2RX7/NLRP3信号通路的影响

目的:通过观察银杏蜜环口服溶液对抑郁模型大鼠的影响,探讨银杏蜜环口服溶液抗抑郁的机制。方法:50只SD大鼠,除正常组外,采用孤养结合慢性不可预见性应激(CUMS)大鼠抑郁模型,模型成功的大鼠分为模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1),银杏蜜环口服溶液高、低剂量组(618,309 mg·kg-1),每组10只;连续造模21 d,刺激第7天给药,以10 mL·kg-1体积连续给药14 d,正常组与模型组灌胃蒸馏水;进行糖水偏好实验、旷场实验、悬尾不动实验;苏木素-伊红(HE)染色法观察抑郁大鼠海马组织病理形态变化;运用多因子检测技术(Luminex)及蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测各组大鼠海马组织白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及NOD样受体3(NLRP3)及其相关激活信号通路蛋白的表达水平。结果:连续给药14 d后,与正常组比较,模型组大鼠糖水消耗率明显降低、直立次数明显减少、悬尾不动累积时间明显延长(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠表现为直立、穿格次数增加,糖水消耗率增加,悬尾不动累积时间明显缩短(P<0.05,P<0.01)。HE结果显示,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠海马区神经元细胞排列有序,轻度疏松,小胶质细胞浸润不明显;与正常组比较,模型组海马组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠脑组织IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。分子生物学实验表明,与正常组比较,模型组嘌呤能受体P2X7(P2RX7),NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组可明显抑制P2RX7,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:银杏蜜环口服溶液可以改善孤养结合CUMS诱导的大鼠抑郁样行为,其作用机制与调控P2RX7/NLRP3信号通路相关。

基于ATP能量代谢探讨金匮敏煎方对肾阳虚慢性荨麻疹大鼠的影响及机制

目的:基于ATP能量代谢探讨金匮敏煎方对肾阳虚慢性荨麻疹的影响及机制。方法:48只SD大鼠按完全随机设计分为空白组,模型组,氯雷他定组,金匮敏煎方低、中、高剂量组,以羟基脲灌胃28 d建立肾阳虚模型后开始免疫,在第29、38天用卵白蛋白1 mg与10 g/L氢氧化铝混悬液(共1 mL)腹腔注射致敏建立大鼠肾阳虚慢性荨麻疹模型,从首次免疫后第7天开始,各给药组灌胃相应的药物,连续14 d。灌胃结束后用ELISA法测定血清免疫球蛋白E(IgE)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、睾酮(T)、促甲状腺激素(TSH)水平,甲苯胺蓝染法观察并计数大鼠皮肤肥大细胞脱颗粒率,免疫组化和Western Blot法检测皮肤P2X7、ENPP3的表达水平,HE染色观察大鼠皮肤、胸腺和睾丸的组织病理学变化。结果:在改善肾阳虚荨麻疹大鼠过敏性炎症方面,与模型组比较,氯雷他定组及金匮敏煎方高、中、低组可显著降低IgE、IL-4水平,提高IFN-γ水平(P<0.05)。在抑制皮肤肥大细胞脱颗粒方面,与模型组比较,氯雷他定组及金匮敏煎方高、中、低剂量组肥大细胞脱颗粒率显著降低(P<0.05)。在病理组织结构修复方面:与模型组比较,氯雷他定组及金匮敏煎方高、中剂量组对恢复大鼠皮肤结构效果显著,而金匮敏煎方低剂量组对大鼠皮肤结构无明显的改善。金匮敏煎方各组均能够促进大鼠胸腺、睾丸组织的恢复,而氯雷他定对胸腺、睾丸组织结构无明显的修复作用。与模型组比较,金匮敏煎方高、中、低剂量组能显著升高cAMP、T、TSH水平,降低cGMP水平(P<0.05)。与模型组比较,金匮敏煎方中、高剂量组大鼠T、TSH水平显著升高(P<0.05)。在皮肤P2X7、ENPP3的表达方面:与模型组比较,氯雷他定组及金匮敏煎方高、中剂量组P2X7/ENPP3蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:金匮敏煎方主要是通过改善机体能量代谢增加ATP酶活性来发挥疗效,同时可能通过降低IgE含量、升高IFN-γ含量,使皮肤肥大细胞脱颗粒受到限制,从而降低炎症反应。

柴胡桂枝汤减轻慢性胰腺炎神经性腹痛机制的探讨

目的:探讨柴胡桂枝汤(CHGZT)减轻三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠慢性胰腺炎(CP)神经性腹痛的初步机制。方法:50只雄性SD大鼠随机均分为5组,分别为假手术组、模型组、CHGZT低、中、高剂量组(4、8、16 g·kg^(-1))。假手术组轻轻翻动胰腺后即关腹,模型组采用向胰管内逆行注射2%TNBS-10%乙醇。CHGZT在造模后4周开始灌胃给药,连续2周。5组大鼠分别于术后6周进行Von Frey疼痛阈值检测;苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺组织慢性炎症及纤维化病变;免疫组化法(IHC)检测PGP9.5蛋白表达,同时观察神经周围炎性改变;IHC及免疫荧光(IF)染色观察胰腺相关胸段脊髓后角离子钙结合蛋白-1(Iba-1)、嘌呤能受体P2X7(P2RX7)的定位及P2RX7和小胶质细胞的共表达。结果:与假手术组比较,模型大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分显著增高(P<0.01),大鼠在不同力值疼痛反应值均明显升高(P<0.05,P<0.01),PGP9.5周围炎性浸润评分显著升高(P<0.01),模型组大鼠脊髓后角Iba-1与P2RX7表达均显著增强(P<0.01);与模型组比较,CHGZT高、中剂量组明显降低大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分,明显降低疼痛反应值,明显降低PGP9.5周围炎性浸润评分(P<0.05,P<0.01),CHGZT高、中、低剂量组显著降低Iba-1及P2RX7表达(P<0.01)。结论:CHGZT可明显减轻CP模型大鼠腹痛程度,可能和通过抑制胰腺内神经炎症、降低相应脊髓后角小胶质细胞P2RX7活化有关。