人P2X1蛋白生物信息预测

利用生物信息学方法对配体门控离子通道受体人P2X_1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、亲疏水性、二级结构及三级结构、蛋白质间的相互作用、GO注释等进行预测分析。结果显示:P2X_1蛋白是两次跨膜的亲水蛋白质,由399个氨基酸组成,等电点为8.75,有一段核定位序列;二级结构存在6个α螺旋区和15个β折叠区,三级结构预测结果的可靠性为45.35%,拉曼图分析表明预测结构较稳定;与P2X_1相互作用的蛋白质主要是传导信号的嘌呤受体和离子通道蛋白质,而且P2X_1蛋白可能参与血管凝集及炎症反应等生理过程。上述对人P2X_1蛋白结构及功能的预测为研究人P2X_1蛋白在生物过程及疾病治疗方面的作用提供了重要的理论依据。

不同平面脊髓损伤致神经源性膀胱大鼠脊休克期后尿动力学及逼尿肌P2X1受体表达的变化

目的建立不同平面脊髓损伤所致神经源性膀胱大鼠模型，研究脊休克期后尿动力学及逼尿肌P2X1受体表达的变化。方法40只成年雌性Wistar大鼠分为对照组、骶上脊髓（胸腰段）损伤组、骶髓损伤组。骶上脊髓（胸腰段）损伤组于脊髓T10-L2节段横断脊髓，骶髓损伤组于脊髓T10-L2节段横断脊髓。术后6周，对3组大鼠行尿动力学检测，应用免疫组织化学方法检测P2X1受体在对照组大鼠、骶上脊髓（胸腰段）损伤组大鼠、骶髓损伤组大鼠逼尿肌中的表达。结果尿动力学检测骶上脊髓（胸腰段）损伤组大鼠膀胱充盈期逼尿肌反射亢进，逼尿肌漏尿点压力升高，膀胱顺应性增加；骶髓损伤组大鼠膀胱充盈期逼尿肌反射低下，逼尿肌漏尿点压力降低，膀胱顺应性增加。骶上脊髓（胸腰段）损伤组大鼠逼尿肌P2X1受体表达水平增高，骶髓损伤组大鼠逼尿肌P2X1受体表达水平降低。结论不同平面脊髓损伤致神经源性膀胱脊休克期后尿动力学发生明显改变，逼尿肌P2X1受体表达增强可能是逼尿肌反射亢进机制之一。

光感基因技术对脊髓栓系神经源性膀胱组织及其受体P2X1、P2X3的调控

目的研究光感基因技术对脊髓栓系神经源性膀胱组织及其受体P2X1、P2X3的影响。方法将60只未成年SD雌性大鼠(尿流动力学检查无异常)随机分组,建立脊髓栓系神经源性膀胱动物模型,分为对照组(n=15)、脊髓栓系无光感基因组(n=21)、脊髓栓系有光感基因组(n=21)。HE染色观察膀胱组织的病理学改变,Real time PCR和Western blotting检测膀胱逼尿肌受体P2X1、P2X3在分子和蛋白水平的表达情况。结果在建模过程中,诱发电位监测发现术中有3只动物脊髓受损,其余动物建模成功。与脊髓栓系无光感基因组比较,在HE染色结果中脊髓栓系有光感基因组逼尿肌细胞形态大小相对均一,肌纤维排列较有序,趋近于对照组。Real time PCR和Western blotting检测结果显示,与对照组比较,脊髓栓系无光感基因组P2X1、P2X3 mRNA和相对蛋白表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);而经蓝光照射一定时间后,脊髓栓系有光感基因组中两种受体mRNA和相对蛋白表达量均降低,与脊髓栓系无光感基因组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论光感基因技术对脊髓栓系神经源性膀胱组织及其受体P2X1、P2X3有一定的调控作用。

miR-216a对重症急性胰腺炎腺泡损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1 通路的影响

目的探索miR-216a对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腺泡细胞损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1通路的影响.方法将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组、SAP组、anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组.Con组不做任何处理,其余各组采用雨蛙肽(10 nmol/L)联合脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)(10 mg/L)处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建SAP细胞模型,anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-216a、miR-NC、miR-216a mimics.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组细胞中miR-216a及P2X7、NLRP3、caspase-1 mRNA相对表达量;Western blot法检测各组细胞中P2X7、NLRP3、Caspase-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果各组细胞中IL-6、TNF-α含量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞凋亡率和Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量比较,Con组<Sch+miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<anti-miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞Bcl-2蛋白相对表达量比较,anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组<Con组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞中miR-216a和P2X7、NLRP3、Caspase-1 mRNA及其蛋白相对表达量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-216a可通过抑制P2X7-NLRP3/caspase-1信号通路减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,从而减轻SAP腺泡损伤.

部分膀胱出口梗阻后P2X_1嘌呤受体在膀胱的表达

目的: 观察慢性膀胱出口梗阻后P2X1受体的表达水平.方法: 雌性Wistar大鼠70只,体质量250～300 g,40只为实验组,30只同龄雌性Wistar大鼠为对照组.在部分膀胱出口梗阻的动物模型成功建立后8 wk开始试验,采用免疫组织化学方法结合IMAGE-PRO图像处理软件对大鼠膀胱P2X1的表达(即阳性颗粒在某个视野下所占的百分比)进行定量研究.结果: 部分膀胱出口梗阻后大鼠较对照组大鼠膀胱的体积增大,黏膜层增厚,P2X1受体的表达水平平均为在膀胱平滑肌层[(9.60±4.78) vs (2.31±1.19)] (P<0.01),在膀胱黏膜层[(0.12±0.03) vs (0.06±0.02)] (P<0.01),浆膜层[(0.04±0.02) vs (0.03±0.01)] (P>0.05),尿道[(6.05±2.25) vs (1.48±0.14)] (P<0.01),慢性膀胱出口梗阻后P2X1受体的表达水平均明显高于对照组.结论: 膀胱出口部分梗阻后,P2X1受体在膀胱各个部位表达均升高.推测P2X1可能参与了慢性膀胱出口梗阻后膀胱的生理或病理功能的调节.

不同给药方式对P2X_1受体介导大鼠肠系膜动脉收缩反应的影响

目的研究不同方式给予α,β-MeATP对肠系膜动脉P2X1受体介导血管收缩反应的影响。方法制备大鼠离体肠系膜动脉环标本,采用非累积给药法和单浓度给药法两种方式给予α,β-MeATP,记录药物诱发的等长收缩反应。结果两种给药方式给予α,β-MeATP(10-7-10-4mol·L-1)均可使大鼠离体肠系膜动脉产生浓度依赖性收缩反应。以KCl最大收缩反应或以标本湿重标化α,β-MeATP诱发的收缩反应时,α,β-MeATP单浓度给药的收缩反应均大于非累积给药(P<0.01)。以标本湿重标化时,10-4mol·L-1浓度α,β-MeATP诱发的收缩反应分别是(0.73±0.10)g·mg-1(单浓度组)和(0.38±0.05)g·mg-1(非累积组);以KCl最大收缩反应标化时,分别是(53.17±6.0)%(单浓度组)和(36.78±5.71)%(非累积组)。在α,β-MeATP非累积给药组120mmol·L-1KCl诱发的动脉收缩反应小于单浓度给药组和NA对照组(P<0.01)。结论在大鼠肠系膜动脉,非累积给予α,β-MeATP降低P2X1受体介导的收缩反应以及高钾诱发的收缩反应,该给药方式可能导致错误的实验结论 。

长期限食对大鼠尾动脉P_2X_1受体和α_1受体介导血管收缩反应的影响

目的研究长期限食对大鼠尾动脉P2X1受体和α1受体介导血管收缩反应的影响。方法将Wistar大鼠分为对照组和限食组,对照组大鼠自由饮食,限食组大鼠每天给予正常日饮食量的50%,3周后制备大鼠离体尾动脉环标本,记录α,β-亚甲基ATP(α,β-MeATP)和去甲肾上腺素(NA)诱发的等长收缩反应。结果与对照组比较,长期限食后α,β-MeATP和NA诱发大鼠尾动脉的收缩反应明显增强(P<0.01),10-4mol/Lα,β-MeATP和NA诱发的收缩反应与对照组相比,分别增大了34.01%和25.85%。限食前后α,β-MeATP和NA诱发最大收缩反应的比值分别为0.78和0.83,两种血管激动剂的半数有效浓度值在限食前后均无明显改变(P>0.05)。结论长期限食明显增强大鼠尾动脉P2X1受体和α1受体介导的收缩反应,但对两种激动剂的受体结合率、两种受体介导最大收缩反应的比值以及血管的肌性收缩反应无明显影响。

前列腺增生患者逼尿肌中P2X_1受体表达及其意义

目的检测前列腺增生患者逼尿肌中P2X_1受体的表达,探讨嘌呤能神经受体P2X1受体对引起不稳定膀胱的作用。方法选择单纯膀胱流出道梗阻(BOO组)和逼尿肌不稳定(DI组)患者的膀胱组织标本各10例,采用免疫组化(SP法)检测其在逼尿肌及上皮中P2X_1受体的表达,并转为OD值进行半定量分析,采用Mann-Whitney U检验对结果进行分析。结果 P2X_1在膀胱逼尿肌和上皮中均可表达。与BOO组比较,P2X_1受体在DI组逼尿肌中的表达明显升高(P<0.05),而在上皮中的表达差异不显著。结论前列腺增生时,P2X_1可能介导嘌呤能神经信号,在神经源性和肌源性两方面导致逼尿肌不稳定。

力竭运动对大鼠大脑P2X_1、P2X_3、P2X_5和P2X_7受体表达的影响

目的:探讨一次和反复力竭游泳运动后大鼠大脑ATP受体P2X之4个亚型P2X1、P2X3、P2X5和P2X7的时相性变化特点。方法:健康成年雄性SD大鼠68只,分为一次力竭游泳运动组和反复力竭游泳运动组及安静对照组。反复力竭组大鼠每日负重3%体重进行力竭游泳运动,共训练2周。运动组分别于力竭运动后即刻、4小时、12小时和24小时取材。采用实时荧光定量PCR方法测定力竭运动后大鼠P2X1、P2X3、P2X5和P2X7受体亚型mRNA水平。结果:(1)一次力竭组中,P2X1和P2X7相对表达率在运动后12小时最低,且与24小时有显著统计学差异(分别为P<0.05,P<0.01)。P2X3和P2X5相对表达率在运动后各时点只在一定范围内波动。(2)反复力竭组运动后12小时4种受体亚型相对表达率均达到峰值,较其它各时间点及安静对照组、一次力竭12小时均有显著差异(P<0.01)。结论:4种受体亚型表达率在反复力竭运动后12小时出现峰值,提示4种P2X受体亚型参与的中枢神经活动在力竭运动后12小时可能达到一个活跃期。

膀胱过度活动症大鼠逼尿肌中嘌呤能受体P2X_1的表达

目的观察P2X1受体在正常大鼠和膀胱过度活动症(OAB)大鼠逼尿肌中的表达情况,探讨P2X1受体在OAB膀胱功能调节中的作用及其与膀胱功能障碍的关系。方法成功建立OAB大鼠模型后,将纳入实验的大鼠分为正常对照组、模型对照组和OAB组,采用RT-PCR、免疫组化等检测方法,观察P2X1受体在正常大鼠和OAB大鼠逼尿肌中的表达情况。结果正常对照组、模型对照组及OAB组的膀胱逼尿肌中均有P2X1受体的表达,P2X1受体在正常对照组及模型对照组大鼠膀胱逼尿肌中的表达较OAB组低,差异均具有显著性(P<0.01)。结论OAB大鼠逼尿肌中P2X1受体表达较正常大鼠增高,提示P2X1受体可能对OAB膀胱舒缩功能障碍的发病机制起重要作用;这种增高可能与膀胱功能受损密切相关。

血小板ADP受体及其拮抗剂的研究进展

二磷酸腺苷(ADP)是第1个已知的低分子血小板弱聚集诱导剂,ADP以较高的浓度储存在血小板致密颗粒中,当血小板受到刺激活化后,ADP从致密颗粒中释放出来,作为二次激动剂,通过作用于多种受体,可增强自身及其他诱导剂对血小板的诱导作用并有助于血栓的稳定化。ADP受体拮抗剂可以抑制ADP受体的表达、结合及其活性,从而有效地抑制了血小板的聚集,对治疗血栓性疾病具有重要的作用。目前,ADP受体拮抗剂类药物因为具有较好的抗栓活性和较高的安全性,已经被广泛的应用于临床。通过对血小板ADP受体的类型及重要的受体拮抗剂进行了综述,对该类药物的开发具有一定的参考价值。

P2X_1受体介导的血小板活化与急性冠脉综合征的相关性研究

目的探讨P2X1受体介导的血小板活化与急性冠脉综合征(ACS)的关系及临床意义。方法选取70例ACS患者,其中急性心肌梗死(AMI)患者30例,不稳定型心绞痛(UA)患者40例,同期入院的健康受试者20例作为对照组。受试者均给予口服阿司匹林150 mg和氯吡格雷75 mg治疗,在服药前及服药后24 h抽取静脉血进行血小板检测。分别以α,β-me ATP(3μM)、低浓度胶原(1μg/mL)激活血小板,以Fluo-3,AMester为标记物在荧光分光光度计下观察血小板钙离子水平变化及应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板P-选择素、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)水平的变化。结果 ACS组患者血小板钙离子、P-选择素及GPⅡb/Ⅲa基线水平均高于对照组(P<0.05),抗血小板治疗后ACS组及对照组患者血小板钙离子、P-选择素及GPⅡb/Ⅲa水平均较治疗前水平降低(P<0.05),但ACS组患者血小板钙离子、P-选择素及GPⅡb/Ⅲa水平下降幅度低于对照组(P<0.05)。AMI组血小板钙离子基线水平高于UA组(P<0.05),抗血小板治疗后AMI组与UA组的血小板钙离子浓度下降幅度有统计学差异(P<0.05)。结论 ACS患者血小板膜P2X1受体处于高活化状态,抗血小板治疗可以抑制血小板膜P2X1受体的激活。

P2X_1受体在急性冠状动脉综合征中的表达

目的观察P2X1受体在急性冠状动脉综合征(ACS)患者血小板中的表达及激活P2X1受体后血小板钙离子浓度的变化,探讨P2X1受体在ACS发生时对血小板功能的调节作用。方法选取70例ACS患者为研究对象,其中急性心肌梗死(AMI)患者30例,不稳定型心绞痛(UA)患者40例,同期入院的健康受试者20例为对照组。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR方法,观察P2X1受体和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)受体在对照组和ACS组血小板中的表达情况。以α,β-me ATP(3μmol/L)激活血小板,Fluo-3 AM Ester为标记物在荧光分光光度计下观察血小板钙离子水平变化。结果对照组及ACS组的血小板中均有P2X1受体、GPⅡb/Ⅲa受体的表达,且在ACS组的表达较对照组高(1.62±0.69比0.88±0.04,1.58±0.11比0.85±0.06,P<0.05);ACS组患者钙离子基线水平高于对照组[(418.96±31.85)nmol/L比(307.20±23.37)nmol/L,P<0.05]。结论 P2X1受体在ACS的发生发展过程中起重要作用。

P2X7 receptor activation causes phosphatidylserine exposure in canine erythrocytes

AIM To determine if activation of the ATP-gated P2X7 receptor channel induces phosphatidylserine(PS) exposure in erythrocytes from multiple dog breeds.METHODS Peripheral blood was collected from 25 dogs representing 13 pedigrees and seven crossbreeds. ATP-induced PS exposure on canine erythrocytes in vitro was assessed using a flow cytometric Annexin V binding assay.RESULTS ATP induced PS exposure in erythrocytes from all dogs studied. ATP caused PS exposure in a concentrationdependent manner with an EC50 value of 395 μmol/L. The non-P2X7 agonists, ADP or AMP, did not cause PS exposure. The P2X7 antagonist, AZ10606120, but not the P2X1 antagonist, NF449, blocked ATP-induced PS exposure.CONCLUSION The results indicate that ATP induces PS exposure in erythrocytes from various dog breeds and that this process is mediated by P2X7 activation.

基于P89C51X2BA单片机实现智能程控数字相位变换器设计

数字相位变换器在电子系统中的应用比较广泛,普通的数字相位变换器均由硬件电路搭接而成,系统复杂,故障率高。本文介绍了一种基于单片机控制的智能数字相位变换器的构建,弥补了普通的数字相位变换器的不足。以P89C51X2BA和逻辑门电路为基础,阐释了实现的原理和方法,给出了系统结构和软硬件构成。

清热通络方对痛风性关节炎大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路的影响

目的:研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^(-1)·d~(-1))。除空白对照组、模型组外,各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外,第4天灌胃后复制GA模型,造模后各时间段(4、6、12、24、48、72 h)检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材,HE染色观察踝关节滑膜病理情况,生化法检测血清ATP水平,ELISA法测血清白细胞介素(IL)-8、IL-37、IL-1β水平,免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65)、NALP3、IL-1β蛋白表达,RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果:造模后4 h,各组大鼠踝关节肿胀率升高,24 h达高峰后下降;热痛阈下降,24 h达最低后上升。造模72 h后,与模型组比较,秋水仙碱组和清热通络方高剂量组肿胀率和热痛阈显著改善(P<0.05)。秋水仙碱及清热通络方各剂量组踝关节滑膜细胞炎症均有所改善;秋水仙碱组和清热通络方高剂量组血清ATP、IL-8、IL-37、IL-1β水平,PBMCs中P2X7R、IL-1β蛋白及mRNA表达,滑膜组织P2X7R、NALP3、NF-κB(P50、P65)、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:清热通络方可能通过抑制GA大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路缓解炎症,发挥治疗作用。

血小板ADP受体及其拮抗剂的研究进展

ADP是人们发现最早也是体内最重要的诱导血小板聚集的物质,其在止血块和病理性动脉血栓形成中起到关键的作用。ADP对血小板的作用主要是通过与血小板膜ADP受体结合后导致血小板形态变化或使cAMP水平降低而聚集,但与凝血酶或胶原相比,其本身是一种弱的血小板激活剂,另因为ADP可以增强或放大其他激活剂的作用,而被认为是血小板激活必需的共同因子。ADP受体拮抗剂可以抑制ADP受体的表达、结合及其活性,从而有效地抑制了血小板的聚集,对血栓性疾病的治疗具有重要的作用。目前,ADP受体拮抗剂类药物因为具有较好的抗栓活性和较高的安全性,已经被较广泛的应用于临床。本文对血小板ADP受体的类型及重要的受体拮抗剂进行了综述,对该类药物的研究开发具有一定的参考价值。

壮腰健肾丸对肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X_1与P2X_3 mRNA表达的影响

为了探讨壮腰健肾丸的缩尿作用及机制,该实验采用皮下注射150 mg·kg-1剂量的D-半乳糖诱导亚急性衰老模型,并将其分为模型组、缩泉丸组(1.17 g·kg-1·d-1)、壮腰健肾丸高、中、低剂量组(2.39,1.20,0.60 g·kg-1·d-1),另取正常动物设为空白组,连续给药8周。选用代谢笼法测量大鼠24 h尿量及水负荷5 h尿量;采用全自动生化仪检测尿中Na+,Cl-,K+浓度;应用ELISA法测定血清中醛固酮(aldosterone,ALD)、抗利尿激素(antidiuretic hormone,ADH)的含量;采用RT-PCR检测大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3mRNA表达量的变化情况。结果显示壮腰健肾丸高、中剂量组对肾虚多尿大鼠24 h尿量及水负荷后5 h内尿量均显著下调(P<0.05,P<0.01);对尿中Na+和Cl-浓度均显著降低(P<0.01);血浆中ALD,ADH含量显著性升高(P<0.05,P<0.01);膀胱组织中P2X1与P2X3mRNA表达量显著下调(P<0.01);壮腰健肾丸低剂量组尿中Na+和Cl-浓度均显著降低(P<0.01)。结果说明壮腰健肾丸可能是通过下调肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3mRNA表达量从而发挥缩尿的作用。

Inhibition of P2X_7 Receptor by Extracts of Chinese Medicine

目的:探讨中草药石菖蒲粗提物 SCP01及其纯化物 SCP02(α-细辛脑)和迷迭香抽提物 X0728对人肥大细胞的作用。方法:用膜片钳技术全细胞记录人肥大细胞膜 ATP 激活的 P2X_7受体的电流。结果:40μg/mL SCP01抑制 P2X_7电流(27.6±2.0)%,而同样浓度的 SCP02抑制(29.5±2.2)%(-100 mV 电位下),笔者还比较了商业用α-细辛脑的效应,42 μg/mL 可抑制 P2X_7电流(52.2±2.0)%。相反,40μg/mL X0728激活 P2X_7电流(28.6±2.8)%,所有这些作用都是电压依赖性的。结论:α-细辛脑对 P2X_7的抑制将阻滞胞内钙的增加,从而可以解释抑制神经元死亡的原因。而 X0728刺激 P2X_7的药理学效应尚需进一步研究。

一类(p1(x),p2(x))-双调和方程解的存在性及多重性

研究一类(p1(x),p2(x))-双调和方程在Navier边界条件下的边值问题,利用山路引理和Fountain定理证明了这类方程解的存在性和多重性.