基于P2X7R/NF-κB通路探讨清解化攻方对重症急性胰腺炎肠屏障的保护作用机制

目的研究清解化攻方基于P2X7R/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障的保护作用及潜在作用机制。方法制备SAP大鼠模型,使用乌司他丁和清解化攻方干预后,采集各组大鼠血清、胰腺和回肠组织。HE染色观察胰腺和回肠组织病理变化;ELISA检测血清内毒素、D-乳酸含量;Western Blot法检测回肠组织P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达情况;IHC检测回肠组织MUC-2和Claudin-1蛋白表达;透射电境观察回肠组织线粒体自噬情况。结果与正常组相比,模型组胰腺及回肠组织出现明显的病理改变,血清内毒素、D-乳酸含量明显升高(P<0.05),P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平上调(P<0.05),Muc-2和Claudin-1蛋白表达明显降低(P<0.05);回肠组织线粒体数量减少,膜厚度增加,结构空洞,自噬小体减少;与模型组比较,清解化攻方各组和乌司他丁组大鼠胰腺及回肠组织病理损伤均缓解,血清内毒素、D-乳酸含量降低(P<0.05);P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平下调(P<0.05);MUC-2和Claudin-1蛋白表达量升高(P<0.05);回肠组织线粒体数量增多,结构较完整,自噬小体增多。结论清解化攻方可以调控P2X7R/NF-κB信号通路,减轻炎症反应,起到改善SAP大鼠肠黏膜屏障损伤作用。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路相关蛋白的影响

目的:观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路NLRP3蛋白、NLRP3mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达的影响,为夹脊电针在临床中治疗脊髓损伤提供实验理论依据。方法:将120只SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、夹脊电针组、P2X7R干扰组和干扰对照组,每组根据不同时间点分为1 d、3 d、7 d和21 d共4个亚组,每个亚组6只,假手术组仅暴露大鼠脊髓,模型组采用改良Allen’s打击法制备SCI大鼠模型,夹脊电针组于模型组基础上给予夹脊电针治疗,P2X7R干扰组于模型制备基础上注射P2X7RsiRNA干扰病毒,干扰对照组注射阴性对照病毒,选取BBB评分1~3分者纳入本实验。各组大鼠在相应时间治疗后再次进行BBB评分,然后处死并取材。用Western blot法检测NLRP3蛋白的表达,用Realtime-PCR检测各组大鼠脊髓组织NLRP3 mRNA的表达,用免疫荧光双染法观察NLRP3与OX42共定位表达。结果:BBB评分结果显示,各时间点模型组BBB评分较假手术组显著降低(P<0.05),夹脊电针治疗后BBB评分明显升高(P<0.05);术后3 d、7 d和21 d,假手术组、夹脊电针组和P2X7R干扰组NLRP3蛋白表达量均低于模型组(P<0.05),干扰对照组NLRP3蛋白表达量高于P2X7R干扰组(P<0.05);各时间点模型组NLRP3 mRNA较假手术组均升高显著(P<0.05),夹脊电针治疗后在7 d、21 d时NLRP3 mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.05),在3 d、7 d和21 d时,P2X7R干扰组NLRP3 mRNA表达水平低于干扰对照组和模型组(P<0.05);术后各时间点模型组NLRP3与OX42共定位阳性表达较假手术组明显增多,3 d、7 d和21 d时夹脊电针组NLRP3与OX42共定位阳性表达明显低于模型组。结论:夹脊电针能降低脊髓损伤大鼠NLRP3蛋白、NLRP3 mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达,减轻脊髓损伤大鼠炎症反应,改善脊髓损伤大鼠运动功能。

艾灸对结肠炎相关性结肠癌大鼠P2X7受体、Wnt/β-catenin信号通路影响的研究

目的观察艾灸对结肠炎相关性结肠癌(CAC)大鼠的干预作用,从嘌呤受体P2X7R与Wnt/b-catenin信号通路探讨可能的效应机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、CAC组、隔药灸组、隔姜灸组。CAC组、隔药灸组、隔姜灸组均采用腹腔注射AOM联合DSS法制备CAC大鼠模型,隔药灸与隔姜灸组均取天枢(双)、气海穴进行治疗。记录各组大鼠体质量、疾病活动指数(DAI)和成瘤率;通过HE染色观察艾灸对CAC大鼠结肠损伤的干预效应;通过RT-q PCR和Western Blot技术,检测艾灸对CAC大鼠结肠组织C-myc、Wnt1、b-catenin、GSK-3bm RNA和P2X7R蛋白表达的调节作用。结果与正常组相比,CAC组大鼠体质量显著降低、DAI增高、成瘤率明显增加(P<0.05),结肠组织可见腺管共壁背靠背和筛样结构,高级别腺癌形成。CAC组大鼠结肠组织P2X7R蛋白表达显著下调(P<0.05),C-myc、b-catenin、GSK-3b、Wnt1 m RNA的表达均显著上调(P<0.05)。与CAC组相比,隔药灸组和隔姜灸组大鼠体质量增加,DAI降低(P<0.05),结肠组织P2X7R蛋白表达显著上调,C-myc m RNA下调(P<0.05);隔姜灸组成瘤率明显降低(P<0.05),且Wnt1、b-catenin、GSK-3bm RNA表达显著下调(P<0.05)。结论隔药灸、隔姜灸均能调节CAC大鼠结肠组织P2X7R及C-myc的异常表达,且隔姜灸还能下调CAC大鼠结肠组织Wnt1、b-catenin、GSK-3bm RNA的表达。

基于P2X7R/NLRP3通路探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制

目的探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组,模型组(白酒),枳葛口服液高、中、低剂量组(10、5、2.5 mL/kg),造模及给药12周后处死大鼠,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织NLRP3蛋白表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平。结果与模型组比较,枳葛口服液高剂量组大鼠肝脏指数降低(P<0.05),大鼠肝组织形态正常,基本无脂肪空泡及炎症细胞浸润,肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论枳葛口服液可能通过降低P2X7R/NLRP3通路相关蛋白表达,减轻大鼠炎症因子产生,从而发挥改善酒精性肝损伤的作用。

嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7及其下游分子在痛风性关节炎中作用机制的研究进展

目前随着痛风性关节炎的发病率逐年上升,对该病炎性反应及疼痛机制的研究越来越多,该病主要由尿酸盐沉积及ATP刺激P2X7R、Nod样受体蛋白3、NEK7表达诱导炎性反应递质成熟与分泌所致,但具体机制尚不明确。现对P2X7R、NLRP3、NEK7的国内外研究进展进行综述,以探讨GA炎性反应及疼痛的发病机制,为防治GA提供新思路与治疗靶点。

基于P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3轴探讨清解化攻方对重症急性胰腺炎炎症反应的作用机制

目的:研究P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3轴在重症急性胰腺炎(SAP)炎症反应的作用机制及清解化攻方的干预作用。方法:采用雨娃素联合脂多糖建立SAP大鼠模型,分别设置空白组、模型组、不同剂量清解化攻方给药组和阳性对照组,通过HE染色观察胰腺组织病理,ELISA检测炎症指标,结合Western Blot和qRT-PCR检测胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组胰腺组织水肿、坏死出血,大鼠血清中IL-8、IL-12、IL-17、IL-18的含量明显升高(P<0.05),胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA的表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,清解化攻方各剂量组和阳性对照组能够改善SAP胰腺组织水肿,减少坏死出血,可降低SAP模型大鼠血清中IL-8、IL-12、IL-17、IL-18的含量(P<0.05),中、高剂量组和阳性对照组胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。结论:清解化攻方可能通过下调P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达,从而控制SAP炎症反应,起到治疗SAP的作用。

连翘脂素通过调控P2X7R/NF-κB/NLRP3炎性小体信号通路缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症

目的:为研究连翘脂素(Phillygenin,PHI)对脂多糖(LPS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体(P2X7R),NOD样蛋白结构域受体3(NLRP3)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:本研究采用先给予100μg·L^(-1)LPS处理24 h后,再使用5 mmoL·L^(-1)ATP 5 h建立L02细胞炎症模型。给药组在给予LPS处理的同时给予不同浓度PHI(100、50、25 mg·L^(-1))培养6 h,随后换液,继续用LPS处理18 h,ATP处理5 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测L02细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、P2X7R、NLRP3、胱天蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)、裂解胱天蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA和蛋白表达。通过分子对接实验预测P2X7R与PHI能否结合,以及DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测细胞中ROS的累积。采用小干扰核糖核酸(siRNA)沉默P2X7R,并随后通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达情况。结果:Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18的表达均有所升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显下调了IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。分子对接结果显示PHI与P2X7R有较好的结合作用。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组P2X7R的表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,给药组下调了P2X7R mRNA和蛋白表达(P<0.05)。ROS荧光探针分析显示,与空白组比较,ROS的含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显降低了ROS的积累(P<0.05)。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组NLRP3炎性小体,NF-κB的表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显降低NLRP3、cleaved-Caspase-1和上调NF-κB、IκBα mRNA及蛋白表达(P<0.05)。Real-time PCR分析显示,与模型组比较,siRNA沉默P2X7R后,IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达明显降低(P<0.05),PHI具有同样的作用,二者合用后,基因表达进一步下降。结论:P2X7R为NF-κB/NLRP3信号通路的上游,PHI可能是通过下调P2X7R从而抑制NF-κB/NLRP3信号通路的表达从而缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症,提示P2X7R可能是PHI发挥抗炎作用的靶标。

芦丁在BV2细胞中抗弓形虫的作用及机制分析

本研究旨在分析芦丁在BV2细胞中的体外抗弓形虫作用及其潜在机制。首先通过CCK8法、间接荧光染色法等测定芦丁的细胞毒性、弓形虫抑制率及增殖情况以探究芦丁在BV2细胞中的抗弓形虫作用;随后,将细胞分成4组,分别为:空白组(Normal)、感染对照组(T.gondii)、感染后低剂量芦丁治疗组(Rut 50)和感染后高剂量芦丁治疗组(Rut 100),进行弓形虫感染及芦丁处理试验,并用ELISA等方法检测细胞培养液上清液中抗氧化酶SOD、GSH及脂质氧化产物MDA水平,炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平,用Western blot检测BV2细胞中PI3K/AKT/Nrf2/HO-1、TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3信号通路中关键蛋白表达量。结果表明,在BV2细胞中,50和100μg·mL^(-1)的芦丁具有明显的抗虫效果,可显著抑制弓形虫感染率、入侵能力和增殖(P<0.05)。50和100μg·mL^(-1)的芦丁还可显著增多上清液中的SOD、GSH含量并降低MDA含量(P<0.05),且降低TNF-α、IL-6及IL-1β水平(P<0.05),并显著上调抗氧化通路PI3K/AKT/Nrf2/HO-1、下调炎症通路TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3中关键蛋白表达量(P<0.05)。结果提示,芦丁在BV2细胞中具有明显的抗弓形虫作用,这可能与其可以通过激活PI3K/AKT/Nrf2/HO-1通路从而增强细胞抗氧化能力、以及抑制TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3通路从而减弱炎症反应有关。研究结果可为后续探究芦丁体内抗虫效果及分析其对弓形虫性脑损伤保护机制相关研究提供一定的理论参考,并为将芦丁开发成治疗人畜弓形虫病的潜在药物提供科学依据。

清热通络方对痛风性关节炎大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路的影响

目的:研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^(-1)·d~(-1))。除空白对照组、模型组外,各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外,第4天灌胃后复制GA模型,造模后各时间段(4、6、12、24、48、72 h)检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材,HE染色观察踝关节滑膜病理情况,生化法检测血清ATP水平,ELISA法测血清白细胞介素(IL)-8、IL-37、IL-1β水平,免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65)、NALP3、IL-1β蛋白表达,RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果:造模后4 h,各组大鼠踝关节肿胀率升高,24 h达高峰后下降;热痛阈下降,24 h达最低后上升。造模72 h后,与模型组比较,秋水仙碱组和清热通络方高剂量组肿胀率和热痛阈显著改善(P<0.05)。秋水仙碱及清热通络方各剂量组踝关节滑膜细胞炎症均有所改善;秋水仙碱组和清热通络方高剂量组血清ATP、IL-8、IL-37、IL-1β水平,PBMCs中P2X7R、IL-1β蛋白及mRNA表达,滑膜组织P2X7R、NALP3、NF-κB(P50、P65)、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:清热通络方可能通过抑制GA大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路缓解炎症,发挥治疗作用。

基于NLRP3炎症小体探讨三石汤治疗痛风性关节炎的机制研究

目的:观察三石汤对P2X7R/PKR信号通路介导的巨噬细胞NLRP3炎症小体活化的影响,从而明确三石汤治疗痛风性关节炎的分子机制。方法:将THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、三石汤低剂量、中剂量、高剂量和抑制剂组。除空白组外,其余各组用尿酸单钠结晶诱导构建痛风性关节炎细胞模型。采用流式细胞术检测各组巨噬细胞ROS水平,以ELISA法检测各组MDA含量及SOD和GSH-PX的活性,以Western blot检测P2X7R/PKR信号通路和NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。在此基础上,构建巨噬细胞与滑膜细胞共培养体系,用CCK8和流式细胞术分别检测滑膜细胞的活性及凋亡水平。结果:与空白组相比,模型组巨噬细胞ROS水平、MDA的含量、SOD和GSH-PX的活性显著增加,NLRP3、Mature IL-1β、Pro IL-1β、Mature IL-18、Pro IL-18、Mature Caspase-1、GSDMD-NT、P2X7R和p-PKR蛋白的表达水平显著上调,GSDMD-FL蛋白的表达显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。与模型组比较,三石汤能够降低巨噬细胞ROS水平、MDA的含量、SOD和GSH-PX的活性,下调巨噬细胞NLRP3、Mature IL-1β、Pro IL-1β、Mature IL-18、Pro IL-18、Mature Caspase-1、GSDMD-NT、P2X7R和p-PKR蛋白的表达,上调GSDMD-FL蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。此外,与空白组相对比,模型组中滑膜细胞的活性降低,其凋亡的水平上升,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。而与模型组相对比,三石汤能够显著地增加滑膜细胞的活性,抑制细胞的凋亡水平,各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论:三石汤能够通过抑制P2X7R/PKR信号通路的激活从而降低NLRP3活化水平,达到治疗痛风性关节炎的作用。

百事乐加味方对氧糖剥夺联合脂多糖诱导海马神经元细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察百事乐加味方对体外培养的海马神经元细胞的保护作用,探讨其治疗卒中后抑郁的作用机制。方法体外分离培养乳鼠海马神经元细胞,以氧糖剥夺联合脂多糖诱导海马神经元细胞损伤。将细胞分为正常组、模型组、空白血清组(10%)和百事乐加味方含药血清组(10%),倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液神经递质谷氨酸(Glu)、5-羟色胺(5-HT)及促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量,免疫荧光染色检测嘌呤能P2X7受体(P2X7R)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达。结果与正常组比较,模型组海马神经元细胞形态发生明显变化,细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01),细胞上清液Glu、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著增加(P<0.05,P<0.01),5-HT含量显著减少(P<0.01),海马神经元P2X7R和NLRP3表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,百事乐加味方含药血清组海马神经元细胞形态明显改善,细胞存活率显著升高(P<0.01),细胞凋亡减少(P<0.01),细胞上清液Glu、TNF-α、IL-1β含量显著减少(P<0.05,P<0.01),5-HT含量显著增加(P<0.01),海马神经元P2X7R和NLRP3表达显著降低(P<0.01)。结论百事乐加味方可能通过抑制P2X7R/NLRP3信号通路、调节神经递质分泌、抑制炎症因子释放发挥对氧糖剥夺联合脂多糖诱导的海马神经元细胞炎症损伤的保护作用,从而治疗卒中后抑郁。

睡眠障碍后小胶质细胞活化相关信号通路的研究进展

睡眠是维持人类生命极其重要的生理状态,睡眠障碍不仅会导致焦虑、抑郁情绪的产生,还会通过诱发多系统疾病严重影响脑功能和身体健康。神经炎症反应是睡眠障碍后的关键病理过程,可导致一系列神经系统疾病的发生。近年来,小胶质细胞活化在神经炎症产生机制中所起的作用越来越受到重视,已成为该领域的研究热点。睡眠障碍后中枢微环境的失衡,导致小胶质细胞活化和极化状态改变,从而触发神经炎症反应。小胶质细胞活化受多个信号通路和复杂分子机制的调控,本文总结了睡眠障碍诱发神经炎症中小胶质细胞活化相关的5条信号通路:嘌呤P2X7受体(P2X7 receptor, P2X7R)、p38MAPK、Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)/NF-κB、JAK/STAT、α7-烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor, α7-nAChR)通路,以期为睡眠障碍后续深入研究和临床治疗靶点选择提供参考。