三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制

目的:研究三磷酸腺苷(ATP)对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法:取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种24 h后行ATP处理;(3)KN-62(P2X7受体阻断剂)干预组:KN-62孵育30 min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程。XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X7受体表达;Western blotting检测细胞P2X7受体蛋白水平;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:500μmol/L ATP和1 mmol/L ATP对细胞活力损伤程度较小,作用24 h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%。当ATP浓度达到或高于2 mmol/L时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组。细胞周期及凋亡检测结果显示,ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P<0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P<0.01)。免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X7受体的表达分布没有影响。Western blotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X7受体蛋白水平没有明显差异(P>0.05)。ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用。结论:高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制可能与P2X7受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关。

人白血病细胞系KG1a中P2X_7受体的表达和功能研究

用半定量RT-PCR和流式细胞术,研究了白血病细胞系KG1a中P2X7受体在基因和蛋白水平的表达。用荧光分光光度计,测定了用激动剂三磷酸腺苷(ATP)和苯甲酰苯甲酸ATP(BzATP)刺激前后细胞内钙离子浓度的变化,证明P2X7受体的功能。结果表明:KG1a细胞表达P2X7受体,且在激动剂的刺激下能引起KG1a细胞通过P2X_7受体的胞外钙内流;去除胞外钙离子时,激动剂不能引起胞内钙浓度的升高;提示KG1a细胞表达P2X7受体的基因和功能蛋白,激活该受体引起胞外钙离子的内流。

P2X7受体与视网膜神经元细胞死亡相关性研究现状与进展

视网膜神经元细胞是视觉形成的重要参与者。由于再生能力差，当神经元细胞发生损伤或死亡时，往往会导致视功能不可逆转的损害。P2X7受体是一种三磷酸腺苷（ATP）门控的阳离子通道受体。近期研究发现，P2X7受体在视网膜神经元细胞的变性死亡中发挥着重要的作用。在一系列动物模型中，暴露于缺血缺氧、高眼压、机械创伤等环境或加入外源性受体激动剂的情况下，胞外升高的ATP可活化神经元细胞表面的P2X7受体。而经活化的受体可经直接或间接途径引起神经节细胞、光感受器细胞等视网膜神经元细胞的死亡，通过受体特异性的拮抗剂及基因敲除技术下调P2X7受体的表达及功能后，神经元细胞的丢失得到了明显的改善。P2X7受体有可能成为与神经元细胞损伤相关的视网膜疾病的一个新的治疗靶点。