膜周蛋白PICK1促进细胞膜上P2Y6受体表达及小胶质细胞的吞噬功能

膜周蛋白PICK1(protein interacting C-kinase-1)参与多种膜受体与膜上蛋白的运输并影响细胞的功能。本研究旨在探索小胶质细胞PICK1与P2Y6受体之间的相互作用是否可改变P2Y6受体在细胞膜上的表达,以及对小胶质细胞吞噬功能的影响。采用小鼠脑内皮层原代培养的小胶质细胞进行免疫共沉淀实验揭示,与PICK1敲除小鼠比较,野生小鼠皮层小胶质细胞内存在PICK1-P2Y6受体相互作用。生物素化、密度梯度离心结合蛋白质印迹实验证明,PICK1基因敲除小鼠的小胶质细胞膜表面P2Y6受体表达水平降低。荧光胶珠吞噬实验结合免疫组织化学染色显示,PICK1基因敲除小鼠的小胶质细胞对UDP(刺激)引起的荧光胶珠吞噬作用减弱。蛋白质印迹实验显示,与野生型小鼠比较,PICK1基因敲除小鼠小胶质细胞中的Akt-308T磷酸化水平明显降低;使用Akt抑制剂API-2能有效抑制Akt在小胶质细胞内的(磷酸化)激活及UDP刺激引起的吞噬作用。上述结果表明,敲除PICK1能下调小胶质细胞膜上P2Y6受体的表达,并降低小胶质细胞的吞噬功能,且这一过程依赖Akt磷酸化修饰。总之,PICK1可促进P2Y6受体在细胞膜上的表达,是小胶质细胞吞噬功能的重要调节子;敲除PICK1可下调P2Y6膜受体表达,并降低小胶质细胞的吞噬功能。这一结果可加深对小胶质细胞的吞噬功能及机制的认识。

P2Y6受体及其在神经系统疾病研究中的进展

1978年Bumstoek等发现了介导ATP神经递质信号转导的嘌呤受体，

基于P2Y6受体探讨复方七芍降压片作用机制

目的:探究复方七芍降压片降压作用机制。方法:SHR随机分为高血压对照组、抑制剂组、复方七芍组、抑制剂复方七芍组、厄贝沙坦组、抑制剂厄贝沙坦组,另取Wistar-Kyoto正常大鼠为正常对照组,采用免疫组化检测血管壁P2Y6、P65蛋白表达。大鼠血管平滑肌细胞随机分为空白对照组、抑制剂组、炎症组、抑制剂炎症组、含药血清组、抑制剂含药血清组,qPCR检测P65、P2Y6、IκBα基因表达,Western blotting检测P65、P2Y6、IκBα、p-IκBα蛋白表达。结果:动物实验结果显示,MRS2578对P2Y6表达无影响,使P65表达降低;复方七芍降压片使P2Y6和P65表达降低,与MRS2578联用可使P65表达更低;厄贝沙坦使P2Y6和P65表达均降低,与MRS2578联用可使P65表达更低。细胞实验结果显示,与空白对照组比较,TNF-α使P2Y6、P65、p-IκBα表达升高(P<0.05)。与TNF-α组比较,MRS2578对P2Y6无影响(P>0.05),使P65、p-IκBα表达降低(P<0.05);复方七芍降压片含药血清使P2Y6、P65、p-IκBα表达降低(P<0.05),与MRS2578联用可使P65、p-IκBα表达更低(P<0.05)。所有分组对IκBα表达无影响(P>0.05)。结论:复方七芍降压片可能通过抑制P2Y6的表达发挥降压功能,而机制可能是P2Y6表达降低抑制了NFκB信号通路的激活。

P2Y_6受体生物学效应的研究进展

嘌呤受体分为P1和P2受体两大类,其中,P2受体又分为配体门控离子通道型受体(P2X受体)和G蛋白偶联型受体(P2Y受体)。P2Y6受体是P2Y家族中的一员,P2Y6受体参与心血管疾病、内分泌疾病及神经病变等疾病的发生。随着氯吡格雷(P2Y12受体阻断剂)等嘌呤受体阻断剂被FDA批准应用于临床,且表现出良好的疗效,P2Y6受体的生物学效应的研究,亦成为人们开展针对P2Y受体的新型靶向性药物研究的热点之一。基于分子生物学技术的发展,P2Y6受体生物学效应的研究取得了显著进展。

P2Y6受体与免疫炎症(英文)

小胶质细胞是中枢神经系统中的一种免疫活性细胞,在神经退行性疾病的发生发展中起着重要作用,近年已经引起基础研究者的高度重视。嘌呤能受体P2Y6是P2受体家族中的一员,近年来也引起了科学界的关注。有研究表明,P2Y6受体在中枢神经系统中介导小胶质细胞的活化及其吞噬作用,在免疫系统中参与单核巨噬细胞分泌释放细胞因子IL-8。在中枢神经系统中P2Y6受体是否也参与了炎症因子的产生呢?本文就以下四个方面对P2Y6受体做一综述:(1)P2Y6受体的结构;(2)P2Y6受体的分布及特性;(3)P2Y6受体与小胶质细胞的关系;(4)P2Y6受体与免疫炎症的关系。推测P2Y6受体可能在中枢神经系统的免疫炎症反应中起重要作用,仍需进一步的研究去证实。

P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织中的表达及对Ca^(2+)的影响

目的:建立慢性癫痫发作SD大鼠模型并检测海马组织P2Y6受体表达改变,研究P2Y6受体-Ca2+信号通路改变。方法:采用氯化锂和匹罗卡品腹腔注射建立SD大鼠慢性癫痫发作模型(EPI组)并检测其脑电图,以腹腔注射生理盐水SD大鼠为对照(CON组)。采用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测EPI组和CON组SD大鼠海马组织P2Y6受体mRNA和蛋白质表达并比较其差异。采用Fura-2/AM检测EPI组和CON组SD大鼠新鲜海马组织细胞内Ca2+浓度并对比其差异。结果:CON组正常SD大鼠脑电图波形主要以α波为主,并伴有低幅度的β波及少量的δ波,几乎未捕捉到棘波发放;EPI组SD大鼠的脑电图出现较为规律的棘波发放,其频率多集中于28Hz,波幅不高于200μV。EPI组慢性癫痫发作SD大鼠海马组织P2Y6受体表达、mRNA、蛋白质和细胞内Ca2+显著高于CON组正常SD大鼠(均P<0.05)。结论:P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织表达显著升高,激活下游信号传导通路导致细胞内Ca2+水平升高,可能在慢性癫痫发作的发病机制中具有重要作用。

P2RY6在非小细胞肺癌中的表达和临床意义分析

目的:探讨P2RY6在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中的表达及临床意义。方法:在基因表达集(Gene Expression Omnibus,GEO)和癌症基因组图谱计划(The Cancer Genome Atlas Program,TCGA)数据库中获取多个NSCLC、肺腺癌和肺鳞癌的基因表达以及临床信息数据集。使用非参数检验分析癌组织与邻近正常组织的P2RY6表达水平差异,并且通过免疫组织化学研究肺鳞癌及肺腺癌组织和正常组织的P2RY6蛋白表达情况。使用χ2检验分析P2RY6表达与肺腺癌、肺鳞癌患者临床特征之间的相关性。使用Kaplan-Meier方法和Log-rank检验评估肺腺癌和肺鳞癌P2RY6表达水平与总生存期和无进展生存期之间的关系。使用Cox比例风险回归模型进一步评估P2RY6表达量对肺鳞癌患者总生存期和无进展生存期的预测效能。结果:P2RY6在NSCLC、肺腺癌和肺鳞癌中均高表达。在肺腺癌患者中,P2RY6表达与生存无关,而与性别有关。在P2RY6高表达的肺鳞癌患者中,总生存期和无进展生存期较短,P2RY6高表达是独立危险因素。结论:P2RY6与肺鳞癌患者的生存相关,P2RY6高表达预示着肺鳞癌患者总生存期与无进展生存期较短,是预后不良的独立危险因素。

复方钩藤降压片(天苓降压片)对自发性高血压大鼠P2Y6受体及炎症因子水平的影响

目的以SHR和WKY大鼠为实验对象,通过测量相关指标,观察复方钩藤降压片对P2Y6受体的表达及炎症水平的影响。方法60只SHR随机分为5组,即模型对照组、缬沙坦组、阻断剂组、钩藤组、中西药组,另12只WKY大鼠设置为空白对照组,按相应的处理方法连续干预8周后取材,测算HMI和LVMI、HE染色观察左室心肌形态、免疫组化法检测心脏IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达、RT-PCR法测定IL-6、TNF-α、IL-1β、P2Y6 mRNA的表达、Western-Blotting法测定心肌IL-6、TNF-α、IL-1β、P2Y6的蛋白表达。结果⑴自发性高血压大鼠心室重量及左室质量较正常大鼠明显增加,是良好的高血压LVH的研究模型;⑵自发性高血压大鼠炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β血清浓度增加,相应的mRNA及蛋白表达增强,提示自发性高血压大鼠炎症活动增强;⑶阻断P2Y6受体,IL-6、TNF-α、IL-1β血清浓度、mRNA及蛋白表达均明显降低,提示P2Y6受体可能是自发性高血压大鼠炎症反应的关键位点;⑷经复方钩藤降压片治疗后,IL-6、TNF-α、IL-1β血清浓度、mRNA及蛋白表达均降低,提示复方钩藤降压片一定程度上能阻断P2Y6受体的表达,且与西药缬沙坦表现出协同作用。结论复方钩藤降压片一定程度上能阻断P2Y6受体的表达,从而降低SHR的慢性炎症水平。