小胶质细胞P2Y_(12)受体在小鼠卒中后中枢痛中的作用和机制

目的探讨小胶质细胞P2Y_(12)受体在小鼠卒中后中枢痛中的作用及机制。方法选取无特定病原体(SPF)级雄性C57BL/6J小鼠32只,7~8周龄,体质量25~30 g,采用随机数字表法分为4组:假手术组(C组)、CPSP组、CPSP-M组(CPSP+P2Y_(12)受体拮抗剂MRS2395)、C-M组(假手术+P2Y_(12)受体拮抗剂MRS2395),每组8只。采用右侧丘脑腹后内侧核和腹后外侧核内注射10 nL 0.001 U/nLⅣ型胶原酶制备CPSP模型。CPSP-M组和C-M组在CPSP模型制备前30 min时腹腔注射MRS 2395(1.5 mg/kg),1次/d,连续注射5 d;C组和CPSP组给予等量生理盐水。造模前1 d(T_(0))和造模后1、3、5 d(T_(1)、T_(2)、T_(3))时测定热缩足潜伏期(TWL)、冷缩足潜伏期(CWL)和机械缩足反应频率(PWF)。随后处死小鼠取脑组织,采用免疫荧光法观察P2Y_(12)受体的表达部位,苏木精-伊红(HE)染色法观察脑组织病理改变,蛋白质印迹法检测脑组织P2Y_(12)受体、Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核转录因子κB-p65(p-NF-κB p65)和NF-κB p65的表达水平。结果P2Y_(12)受体在CPSP组脑组织内只表达于小胶质细胞中,星形胶质细胞和神经元中未表达。与C组比较,CPSP组和CPSP-M组T_(1)~T_(3)时TWL、CWL缩短,PWF升高,脑组织损伤程度加重,P2Y_(12)受体、TLR4和p-NF-κB p65表达上调,C-M组T_(1)~T_(3)时以上各项指标与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与CPSP组比较,CPSP-M组T_(1)~T_(3)时TWL、CWL延长,PWF降低,脑组织损伤程度减轻,P2Y_(12)受体、TLR4和p-NF-κB p65表达下调(P<0.05)。结论小胶质细胞P2Y_(12)受体可能通过激活TLR4/NF-κB信号通路参与小鼠CPSP的形成。

脊髓背角P2Y_(12)受体/P38MAPK参与MRS2395对CCI大鼠的镇痛作用

目的:观察鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395对慢性坐骨神经结扎(chronic constriction injury,CCI)大鼠机械痛阈及脊髓背角P2Y12受体、P2X4受体和P38MAPK表达变化的影响,探讨P2Y12受体参与神经病理性疼痛的相关机制。方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):假手术组、CCI模型vehicle组(鞘内注射0.005%DMSO生理盐水)、MRS2395处理组(CCI+鞘内注射MRS2395 100 pmol/L)。CCI及MRS2395处理组大鼠均于鞘内置管7天之后行坐骨神经结扎,连续14天鞘内注射0.005%DMSO生理盐水、MRS2395(100 pmol/L),每天2次,在术前1天、术后第1、3、5、7、10、14天测定给药1 h后机械缩足反射阈值(mechanical withdraw threshold,MWT);在第7、14天处死大鼠,取脊髓背角,免疫印迹观察P2Y12受体、P2X4受体和P38 MAPK表达变化。结果:大鼠CCI术后1天即可出现机械痛敏;与假手术组相比,CCI组第1、3、5、7、10、14天MWT明显降低(P<0.01);与CCI组相比,MRS2395处理组术后第1,3,5,7天MWT明显升高(P<0.01);术后10天和14天MWT升高较缓(P<0.05)。与假手术组相比,CCI组第7、14天背角P2X4受体、P2Y12受体和P38 MAPK表达明显上调(P<0.05);与CCI组相比,MRS2395处理组第7、14天P2Y12受体和P38MAPK表达上调均明显减弱(P<0.05);MRS2395处理组不影响CCI组第7天P2X4受体表达,但可以明显抑制CCI组第14天P2X4受体表达上调(P<0.05)。各组大鼠脊髓背角P2Y12受体和P2X4受体表达之间存在正相关。结论:鞘内注射P2Y12拮抗剂MRS2211可以明显抑制CCI大鼠机械痛敏症状;而且脊髓背角P2X4受体和P38 MAPK表达下调。这提示P2Y12受体拮抗剂可能通过影响脊髓背角小胶质细胞P2X4受体和P38 MAPK表达,在脊髓水平发挥镇痛作用。

血小板功能试验监测P2Y_(12)受体拮抗剂的抗血小板聚集效果研究进展

P2Y_(12)受体拮抗剂广泛应用于心脑血管疾病的预防和治疗中,而监测治疗后血小板功能变化有助于改善患者的预后。血小板功能试验是评估抗血小板聚集治疗后残留血小板高反应性的重要方法,主要包括透射光法血小板聚集试验(LTA)、电阻抗法血小板聚集试验(WBIA)、血管舒张剂刺激磷酸蛋白(VASP)、血栓弹力图(TEG)、血小板功能分析仪-100型(PFA-100)和Verify Now系统。这些试验监测抗血小板聚集治疗后血小板残留反应性的能力各不相同,评估效果也各有不同。其中,LTA是评估抗血小板药物疗效的经典方法,便捷而廉价,但易受操作和环境干扰;WBIA临床应用较少,缺乏评估临界值;VASP对血小板功能变化敏感,但试验复杂且成本高;TEG能监测药物对血小板的抑制率,但指导治疗的安全性还需要验证;PFA-100监测抗血小板聚集药物的敏感性和特异性尚不明确;Verify Now有效可靠,但成本过高。临床研究证据显示,LTA、VASP和Verify Now系统能敏感反映P2Y_(12)受体拮抗剂抗血小板聚集的效果,且与心血管疾病患者主要不良心脏事件(MACE)风险相关。

P2Y12受体介导小胶质细胞在肌萎缩侧索硬化疾病中的作用

目的 探索分析P2Y12受体介导小胶质细胞在肌萎缩侧索硬化(ALS)疾病发生发展中的作用。方法 应用SOD1-G93A转基因小鼠,通过转棒实验、Western blot方法及免疫荧光双标染色,观察SOD1-G93A转基因小鼠在症状前期、症状中期、终末期及对照组小鼠运动功能、皮质与腰髓P2Y12受体及小胶质细胞特异性标记物IBA1表达的变化情况。结果 SOD1-G93A转基因小鼠随病程进展运动功能逐渐下降;腰髓P2Y12受体随病程进展有逐渐降低趋势,与对照组比较,终末期P2Y12受体表达明显减低(P<0.05),皮质各期变化不明显;腰髓IBA1受体随病程进展有逐渐升高趋势,与对照组比较,终末期IBA1表达明显升高(P<0.05),皮质各期变化不明显。结论 随SOD1-G93A转基因小鼠病程进展运动功能逐渐降低,腰髓P2Y12受体表达减少,小胶质细胞增生明显,P2Y12受体介导的小胶质细胞活化可能参与了ALS的发生发展。

抗血小板膜P_2Y_(12)受体拮抗剂的研究进展

抗血小板药物是治疗急性冠脉综合征的必备用药,其中抗血小板膜P2Y12受体拮抗剂已成为急性冠脉综合征药物治疗研究中最活跃的一个领域,从基础到临床研究,不断地开发出系列新药。本文就对P2Y12受体拮抗剂作用机制、药代动力学、急性冠脉综合征临床研究、临床指南等进行分析,为临床合理用药提供参考。

P2Y_(12)受体抑制剂与炎症的研究

P2Y12属于视紫红质类G蛋白偶联受体家族,是位于多种细胞膜表面的跨膜蛋白,P2Y12受体主要分布在血小板膜。当P2Y12受体与配体结合后,使血小板维持稳定及持久聚集,从而导致动脉血栓形成。P2Y12受体还表达于炎症细胞,对炎症细胞的激活及迁移有重要作用。抑制P2Y12受体具有抗炎作用,P2Y12受体抑制剂除抑制血小板激活、黏附、聚集外,其抗炎作用可能成为冠心病潜在的治疗靶点。

基于美国数据库的P2Y12受体拮抗剂不良事件信号检测与分析

目的挖掘噻氯匹啶、氯吡格雷、普拉格雷和替格瑞洛4个P2Y12受体拮抗剂的不良事件(ADE)信号,为临床安全用药提供参考。方法在美国食品药品监督管理局(FDA)不良事件报告系统(FAERS)中提取4个P2Y12受体拮抗剂在2004年1月1日至2022年12月31日的报告数据,采用比例失衡法中的报告比值比(ROR)和贝叶斯置信度递进神经网络法(BCPNN)对所提取的数据进行挖掘与分析。结果4个P2Y12受体拮抗剂共得到1512个有效信号,其中噻氯匹啶101个,普拉格雷257个,氯吡格雷771个,替格瑞洛383个。ADE信号累及系统器官分类(SOC)22个。噻氯匹啶ADE信号数最多的SOC是血液及淋巴系统疾病,占28.71%;普拉格雷ADE信号数最多的SOC是心脏器官疾病,占18.36%;氯吡格雷ADE信号数最多的SOC是胃肠系统疾病,占23.75%;替格瑞洛ADE信号数最多的SOC是全身性疾病及给药部位各种反应,占22.86%。结论经挖掘FAERS数据库,发现噻氯匹啶、氯吡格雷、普拉格雷和替格瑞洛4个P2Y12受体拮抗剂均存在ADE信号累及的SOC以及常见的不良事件,故临床需密切关注这些ADE,以避免出现其累及的SOC,防范风险事件发生。

心血管疾病抗血栓的新靶点P2Y_(12)受体

阿司匹林的应用降低了心血管疾病的病死率和发病率,但其有限的抗血小板效果及近来发现的阿司匹林抵抗现象驱使人们寻找更有效的抗血小板药物。噻氯匹啶和氯吡格雷,通过其代谢产物作用于血小板ADP受体亚基,目前称为P2Y12(过去称P2T,P2TAC,P2YADP或P2Ycyc)受体拮抗剂,显示了很好的临床疗效。天然的P2Y12受体拮抗剂ATP有快速而直接的作用。AR-C69931MX,就是类似ATP的一种拮抗剂,对ADP诱导的血小板活化、聚集、分泌凝血活性物质有抑制作用。Ⅱ期临床研究显示在急性冠脉综合征的患者注射AR-C69931MX能获得快速稳定的血小板聚集抑制作用,t1/2仅几分钟。血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa拮抗剂临床应用的局限性给这些抗血小板药物提供了很好的发展前景。

血小板P2Y_(12)受体拮抗剂临床研究概况

随着人口老龄化时代的到来,心脑血管疾病发生率日益增加,已经成为导致我国居民死亡的重要因素之一,口服抗血小板药物,如环氧化酶-1受体抑制剂阿司匹林和噻吩并吡啶类药物P2Y_(12)受体拮抗剂氯吡格雷等是最为常用的治疗药物。但它们在有效性,患者耐受性,对血小板抑制作用的特异性,以及不同患者对药物反应的差异性等方面都有不足之处。目前一些新型的P2Y_(12)受体拮抗剂类抗血小板药物已经进入临床,初步结果显示其作用更强,与传统药物相比更加安全和方便。现对常用P2Y_(12)受体拮抗剂类抗血小板药物及正在研究中的此类新药做一概述。

氯吡格雷抵抗与血小板P2Y_(12)受体

目前,关于血小板对氯吡格雷抵抗这一现象发生机制的解释,正日益成为关注的热点,除与患者的低依从性、剂量不足、吸收不良、血小板代谢等多种因素有关外,还与血小板P2Y12受体的功能状态有着密切关系。

AM1241抑制ADPβS诱发培养大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体表达及炎症因子释放

目的:离体条件下,观察大麻素CB2受体激动剂AM1241对嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。方法:培养纯化新生SD大鼠(<3 d)脊髓背角小胶质细胞,荧光定量PCR技术检测AM1241(10^(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10^(-5)mol/L,3 h)诱发的背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达的影响;ELISA技术检测AM1241(10^(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10^(-5)mol/L,3 h)诱发的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。结果:与正常对照组相比,ADPβS(10^(-5)mol/L,3 h)可以刺激脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体在mRNA水平表达上调(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α释放相应增加(P<0.05)。AM1241(10^(-5)mol/L,1 h)几乎完全阻断ADPβS刺激小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放的效应(P<0.05);AM1241的这种抑制效应可以被CB2受体拮抗剂AM630(10^(-5)mol/L,1 h)反转(P<0.05)。结论:大麻素CB2受体激活可以抑制ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA水平表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放。

P2Y_(12)受体拮抗剂与质子泵抑制剂相互作用的研究进展

质子泵抑制剂可以明显降低急性冠状动脉综合征及经皮冠状动脉介入术后双联抗血小板治疗患者的出血风险,但近年来的研究显示氯吡格雷与质子泵抑制剂相互作用可能导致主要心血管不良事件的增加,对临床工作造成了困扰。现重点阐述P2Y12受体拮抗剂与质子泵抑制剂相互作用的研究进展,并为临床决策提供建议。

CFTR通过调控二磷酸腺苷受体P2Y_(12)影响血小板活化

【目的】二磷酸腺苷受体P2Y_(12)介导的血小板活化是血小板活化及血栓形成的核心机制,本研究探讨囊性纤维化跨膜转导调节子(CFTR)对P2Y_(12)介导的血小板活化的影响。【方法】应用8~16周龄CFTR全基因敲除(Cftr^(-/-) )小鼠及野生型(Cftr^(+/+) )小鼠,分别制备胶原蛋白和肾上腺素诱导的肺栓塞小鼠模型。分离Cftr^(-/-) 和Cftr^(+/+) 小鼠外周血的血小板,采用免疫印迹技术检测P2Y_(12)、PI3K以及AKT总蛋白及磷酸化蛋白的表达。采用二磷酸腺苷(ADP)孵育人巨核细胞株Meg-01,检测ADP对CFTR和上述蛋白表达的影响。进一步应用特异性CFTR氯通道抑制剂CFTRinh-172与Meg-01细胞共孵育,检测其对CFTR和上述蛋白表达的影响。【结果】与Cftr^(+/+) 小鼠肺栓塞模型组相比,Cftr^(-/-) 鼠肺栓塞组织切片栓塞显著增加。Cftr^(-/-) 显著增加小鼠外周血血小板P2Y_(12)、磷酸化PI3K和AKT蛋白表达。P2Y_(12)全基因敲除小鼠血小板CFTR蛋白表达无明显改变,上述结果提示CFTR负性调控P2Y_(12)维持正常血小板活化功能。Meg-01细胞实验结果表明ADP浓度依赖性地诱导Meg-01细胞P2Y_(12)蛋白和PI3K以及AKT蛋白磷酸化增高,而CFTR蛋白表达水平逐渐降低。CFTR特异性阻断剂CFTRinh-172显著诱导Meg-01细胞P2Y_(12)蛋白表达增高。【结论】本研究揭示了血小板活化的一个新机制,即CFTR通过调控血小板P2Y_(12)蛋白表达影响血小板活化。

急性冠状动脉综合征合并心源性休克患者应用P2Y_(12)受体拮抗剂研究进展

急性冠状动脉综合征(ACS)是一种心脏急性缺血性综合征,而心源性休克(CS)是急性心肌梗死后泵衰竭的严重并发症。ACS合并CS患者常伴肝功能不全等多器官功能损害,影响药物的活化代谢,亦是ACS患者临床死亡的主要原因。血小板的黏附、活化和聚集是ACS患者血栓形成的重要因素。目前,P2Y_(12)受体抑制剂是ACS患者抗血小板治疗的常用药物,但部分患者用药后而表现为血小板高反应性,亦增加临床心血管不良事件。

血小板膜P2Y_(12)受体信号传导通路与冠心病相关性研究

目的探讨血小板膜P2Y_(12)受体介导的血小板活化及凝血激活与冠心病的关系及临床意义。方法采用病例对照研究,检测238例中国四川地区[冠心病(coronayatheroscleroticheartdisease,CHD)组177例,对照(control)组61例]血小板最大聚集度(Maximumplateletaggregationratio,MAR)、血浆P选择素(granulemembraneprotein,GMP140)及各项凝血指标。结果冠心病组与对照组比较,MAR、GMP140、纤维蛋白原(Fibrinogen,FIB)水平显著升高,凝血酶原时间(prothrombintime,PT)显著降低(P<0.01);多元Logistic回归分析逐步校正后,GMP140水平和冠心病密切相关(r=0.69,P<0.1)。结论血小板膜P2Y12受体活化介导的血小板高活状态引起的血浆高GMP140水平在冠心病的发生发展中起重要作用。

P2Y_(12)受体拮抗剂在急性冠脉综合征患者中的应用进展

阿司匹林联合P2Y_(12)受体拮抗剂的抗血小板方案可降低急性冠脉综合征患者的血栓事件风险。考虑到疾病分型、患者年龄、基础疾病等因素,该抗血小板方案中P2Y_(12)受体拮抗剂的选择不尽相同。临床常用口服P2Y_(12)受体拮抗剂(氯吡格雷、替格瑞洛和普拉格雷)因生物活性、可逆性、药效等特点,不同患者群中应给予不同推荐。本文对比了近年来各指南与共识中急性冠脉综合征患者抗血小板治疗方案,同时结合临床大数据试验,以期为临床实践和决策提供帮助。

急性冠状动脉综合征患者P2Y_(12)受体抑制剂降阶治疗研究进展

急性冠状动脉综合征患者需要接受双联抗血小板治疗。与氯吡格雷相比,强效P2Y_(12)受体抑制剂在减少缺血事件方面更具优势,但伴随而来的是出血风险增加。目前指南推荐急性冠状动脉综合征患者应优选替格瑞洛或普拉格雷治疗。近年来,随着支架工艺、介入技术及围术期管理等多方面的进步,缺血事件发生率明显降低,人们越来越重视强效P2Y_(12)受体抑制剂相关出血风险,P2Y_(12)受体抑制剂降阶治疗策略逐渐引发关注。本文针对P2Y_(12)受体抑制剂降阶治疗相关定义、发生率及现有证据等进行综述。

急性冠脉综合征合并糖尿病患者P_(2)Y_(12)受体拮抗剂治疗进展

急性冠脉综合征(ACS)是一种极度危及人们生存的常见疾病。双联抗血小板治疗始终是ACS治疗的基石。这种双联抗血小板治疗方案可有效地减少ACS患者的缺血及血栓风险事件。糖尿病是冠状动脉粥样硬化性心脏病的传统危险因素,ACS合并糖尿病时增加心血管死亡率,且糖尿病患者大多数具有高龄以及合并症的患病率较高等特点,因此P_(2)Y_(12)受体拮抗剂的抉择在ACS合并糖尿病患者中显得尤为重要。现对近期ACS合并糖尿病患者使用P_(2)Y_(12)受体拮抗剂治疗的有关研究进行总结,对临床实践和治疗提供借鉴。

从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂及其抗血小板聚集作用的评价

目的建立从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂的模型,并验证候选化合物抗血小板聚集的药理活性。方法根据《中国药典》中的活血化瘀药种类,找出了32种具有抗血栓作用的中药,建立中药成分的虚拟化合物库,以P2Y12受体为靶标蛋白进行虚拟筛选,获得结合自由能最低的化合物,然后进行体外抗血小板凝集实验以验证其活性。结果通过虚拟筛选,得到了结合自由能最低的化合物紫丁香苷,计算其结合自由能力为-14.3 kcal/mol。进一步的实验验证结果表明,该化合物有显著的抗二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板凝集作用。结论从32种活血化瘀的中药中,基于P2Y12受体三维蛋白结构,利用虚拟筛选的方法,筛选出紫丁香苷对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用,该模型可用来后续的进一步虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂。