P2z/P2x7受体检测的研究

目的 检测白血病细胞的 P2 z/ P2 x7受体。方法 将 T淋巴细胞白血病细胞株 (CEM)、急性单核细胞白血病细胞株 (THP- 1)、M2 型白血病细胞株 (HL - 6 0 )、M3型白血病细胞株 (NB4 )、巨核细胞病细胞株 (Dam i/Dam)和伯基特淋巴瘤细胞株 (Raji)共六株白血病细胞株制成 2× 10 7/ m l的细胞悬液 ,分别加入 P2 z/ P2 x7受体的激动剂 ATP和 /或特异性抑制剂 KN- 6 2 ,测定加入前后细胞内荧光强度变化 ,同时以 P2 z/ P2 x7受体多克隆抗体免疫组化 ABC法鉴定 P2 z/ P2 x7受体。结果 10 .4 mm ol/ L 的 ATP对于 THP- 1、NB4和 HL- 6 0细胞株钙离子通透性有较强的激活作用 ,其激活率分别为 5 4 .91%、39.4 5 %和 30 .4 6 % ;ATP对 CEM、Dam和 Raji细胞株的激活作用很弱 ,激活率分别为 10 .4 35 %、13.2 15 %和 2 .6 7% ;KN- 6 2对 THP- 1有很强的抑制作用 (抑制率达 88.74 % ) ,而对 NB4和 HL- 6 0的抑制作用很弱 (抑制率仅为 15 .81%和 12 .5 0 % ) ,对 Raji细胞株没有抑制作用 ;2免疫组化ABC法显示各对照细胞株均成阴性 ,而白血病细胞株均成阳性。结论 THP- 1细胞含 P2 z/ P2 x7受体 ,NB4和 HL-6 0含 P2受体其它亚型的细胞株 ,CEM、Raji和 Dam细胞株不含 P2 z/ P2 x7受体 ;免疫组化 ABC法使用的多克隆抗?

力竭运动对大鼠大脑P2X_1、P2X_3、P2X_5和P2X_7受体表达的影响

目的:探讨一次和反复力竭游泳运动后大鼠大脑ATP受体P2X之4个亚型P2X1、P2X3、P2X5和P2X7的时相性变化特点。方法:健康成年雄性SD大鼠68只,分为一次力竭游泳运动组和反复力竭游泳运动组及安静对照组。反复力竭组大鼠每日负重3%体重进行力竭游泳运动,共训练2周。运动组分别于力竭运动后即刻、4小时、12小时和24小时取材。采用实时荧光定量PCR方法测定力竭运动后大鼠P2X1、P2X3、P2X5和P2X7受体亚型mRNA水平。结果:(1)一次力竭组中,P2X1和P2X7相对表达率在运动后12小时最低,且与24小时有显著统计学差异(分别为P<0.05,P<0.01)。P2X3和P2X5相对表达率在运动后各时点只在一定范围内波动。(2)反复力竭组运动后12小时4种受体亚型相对表达率均达到峰值,较其它各时间点及安静对照组、一次力竭12小时均有显著差异(P<0.01)。结论:4种受体亚型表达率在反复力竭运动后12小时出现峰值,提示4种P2X受体亚型参与的中枢神经活动在力竭运动后12小时可能达到一个活跃期。

P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠中表达的特点

目的:探讨不同P2X家族受体在小鼠急性T淋巴细胞白血病发展中的表达变化规律。方法:制备Notch1过表达小鼠GFP+T细胞急性淋巴细胞白血病移植模型,流式术分选CD45.2+GFP+白血病细胞,实时定量PCR检测P2X受体家族的表达变化,荧光分光光度计检测P2X7受体介导的钙离子浓度的变化。结果:对照组和白血病组小鼠骨髓细胞表达除P2X5外的其他6种P2X家族受体。Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中,P2X7的表达水平逐渐升高,P2X1和P2X3的表达水平逐渐降低,而P2X2、P2X4和P2X6表达水平没有显著变化;分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞中,P2X家族受体的表达呈现相同的规律。对照组和白血病组小鼠骨髓细胞中P2X7受体在激动剂苯甲酰-苯甲酸ATP(BzATP)的刺激下都能介导细胞内钙离子浓度升高,但白血病组小鼠骨髓细胞内钙离子处于持续高浓度状态,而对照组小鼠细胞内钙离子浓度短暂升高后逐渐下降;P2X7介导的这种钙离子反应可被其特异的拮抗剂KN62所阻断。结论:P2X受体家族中P2X1、P2X3和P2X7的表达变化与小鼠急性T淋巴细胞白血病的发展相关,提示其介导的细胞间通讯可能在白血病发展中发挥重要作用。

P2X7/P2X4 Receptors Mediate Proliferation and Migration of Retinal Microglia in Experimental Glaucoma in Mice

Microglia are involved in the inflammatory response and retinal ganglion cell damage in glaucoma.Here,we investigated how microglia proliferate and migrate in a mouse model of chronic ocular hypertension(COH).In COH retinas,the microglial proliferation that occurred was inhibited by the P2X7 receptor(P2X7R)blocker BBG or P2X7R knockout,but not by the P2X4R blocker 5-BDBD.Treatment of primary cultured microglia with BzATP,a P2X7R agonist,mimicked the effects of cell proliferation and migration in COH retinas through the intracellular MEK/ERK signaling pathway.Transwell migration assays showed that the P2X4R agonist CTP induced microglial migration,which was completely blocked by 5-BDBD.In vivo and in vitro experiments demonstrated that ATP,released from activated Müller cells through connexin43 hemichannels,acted on P2X7R to induce microglial proliferation,and acted on P2X4R/P2X7R(mainly P2X4R)to induce microglial migration.Our results suggest that inhibiting the interaction of Müller cells and microglia may attenuate microglial proliferation and migration in glaucoma.