小麦黄花叶病毒P3蛋白致病功能域的鉴定和分析

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。

叉头框蛋白P3在乳腺癌放疗患者中的表达及临床意义

目的 探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)在乳腺癌放疗患者中的表达及临床意义。方法 选取90例乳腺癌放疗患者和30例乳腺纤维腺病患者,采用免疫组化染色法检测FOXP3表达情况,比较乳腺癌组织和乳腺纤维腺病组织中FOXP3表达情况,比较不同临床特征及分子分型乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3表达情况,采用多因素Logistic回归模型分析乳腺癌患者中FOXP3阳性表达的影响因素。比较不同FOXP3表达情况乳腺癌患者的放疗疗效及无病生存期(DFS),采用Cox比例风险模型分析乳腺癌放疗患者DFS的影响因素。结果 乳腺癌组织中FOXP3阳性表达率为38.9%,明显低于乳腺纤维腺病组织的76.7%(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,临床分期、Ki-67表达情况、淋巴结转移情况均是乳腺癌患者中FOXP3阳性表达的独立影响因素(P﹤0.05)。Luminal A型乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3阳性表达率高于Luminal B型、三阴性、人表皮生长因子受体2(HER2)过表达型乳腺癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。FOXP3阳性表达乳腺癌患者的局部失败率为2.9%,明显低于FOXP3阴性表达患者的25.5%(P﹤0.01)。FOXP3阳性表达乳腺癌患者的DFS明显优于FOXP3阴性表达患者(P﹤0.01)。Cox比例风险回归分析结果显示,FOXP3阳性表达、雌激素受体(ER)阳性表达均是乳腺癌放疗患者DFS的独立保护因素(P﹤0.05)。结论 乳腺癌组织中FOXP3阳性表达率较低,FOXP3阳性表达乳腺癌患者放疗局部失败率低于FOXP3阴性表达患者,且预后优于FOXP3阴性表达患者,FOXP3有望为乳腺癌的诊断、个体化治疗及预后评估提供新思路。

GARP、Foxp3及TGF-β在桥本甲状腺炎病人PBMC中的表达及意义

目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)病人外周血单个核细胞(PBMC)中糖蛋白A重复序列为主的蛋白(GARP)、叉头框蛋白p3(Foxp3)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达水平和意义。方法:选取HT病人32例作为观察组,选取同期健康体检者32名作为对照组。采用化学发光免疫法测定2组血清促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)水平,放射免疫法检测甲状腺抗体TmAb、TgAb水平。采用实时荧光定量PCR检查HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA,分析HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达量与甲状腺功能指标水平的相关性。结果:2组TT3、TT4、TSH水平差异均无统计学意义(P>0.05),观察组TgAb和TmAb水平均明显高于对照组(P<0.01)。观察组GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,HT病人PBMC中GARP mRNA表达水平与TgAb水平呈负相关关系(P<0.05),与TT3水平呈明显正相关关系(P<0.01)。结论:HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达降低。GARP mRNA与TgAb水平呈负相关关系,与TT3水平呈明显正相关关系,可能与HT的发生、发展相关。

乳腺癌组织中FOXP3、CMTM6、Shoc2表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)、趋化素样因子超家族6(CMTM6)、Shoc2在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取51例女性乳腺癌患者为研究对象,采集癌组织与癌旁正常组织,以免疫组织化学法测定FOXP3、CMTM6、Shoc2的阳性表达。收集患者的年龄等一般资料,分析FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系;随访3年,分析三项指标表达与患者预后的关系。结果癌组织FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌患者的年龄、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关(P>0.05);FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达患者的3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP3、CMTM6、Shoc2在乳腺癌组织内呈高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移联系紧密,参与疾病的发生与发展,且三项指标表达水平越高,则患者预后越差。

不同丙种球蛋白用药剂量治疗免疫性血小板减少症患儿的效果及对血清FOXP3、sCD40L表达的影响

目的:探究不同丙种球蛋白(IVIG)用药剂量治疗免疫性血小板减少症(ITP)患儿的效果及对血清叉头蛋白P3(FOXP3)、可溶性CD40配体(sCD40L)表达的影响。方法:回顾性分析2020年1月—2022年12月九江市妇幼保健院(儿童血液科)收治的65例ITP患儿临床资料,根据IVIG用药剂量分为对照组(32例)和观察组(33例),对照组给予标准剂量[400 mg/(kg·d)],观察组给予中等剂量[600 mg/(kg·d)]。比较两组患儿临床指标,治疗前和治疗2周后血小板指标[血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板容积(MPV)]、免疫功能[FOXP3、sCD40L、调节性T细胞(Treg)]、炎症因子[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)]水平,记录治疗期间不良反应发生情况。结果:两组患儿起效时间、出血消失时间、血小板计数(PLT)恢复正常时间、住院时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患儿PCT、Treg、FOXP3水平均较治疗前升高,PDW、MPV、sCD40L、IFN-γ、TNF-α、IL-4水平均降低(P<0.05),但两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中等剂量与标准剂量IVIG在ITP治疗中效果相当,均可改善患儿临床指标、血小板指标,提高患儿免疫能力,减轻患儿炎症反应。

甘蔗条纹花叶病毒 P3 蛋白与甘蔗 Rubisco 大亚基互作的研究

该研究以甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)的P3蛋白(SCSMV-P3)为诱饵,采用酵母双杂交技术(yeast two-hybrid system,Y2HS)从甘蔗酵母文库中筛选到1个编码核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)大亚基的基因,命名为ScRbcL。序列分析表明,该基因开放读码框(open reading frame,ORF)长度为1 337bp,编码478个氨基酸残基。Y2HS和双分子荧光互补(bimolecular flourescence complementation,BiFC)实验表明,ScRbcL与SCSMV-P3存在互作关系。研究认为SCSMV-P3与ScRbcL的互作可能是SCSMV侵染甘蔗导致花叶症状发生的分子基础。

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞和程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1通路在早期胃癌中的表达及相关性分析

目的探讨叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞(FOXP3+Tregs)与程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在早期胃癌患者中的表达及相关性。方法收集2020年10月至2022年6月南京市浦口区中医院收治的早期胃癌患者(早期胃癌组)和慢性胃炎患者的胃黏膜组织(对照组)各10例,采用组织免疫荧光法分别检测早期胃癌组和对照组的胃黏膜组织中FOXP3+Tregs及PD-1/PD-L1通路的表达情况,分析早期胃癌组织中两者表达的相关性。结果早期胃癌组FOXP3+Tregs、PD-1、PD-L1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。早期胃癌组胃黏膜组织中FOXP3+Tregs分别与PD-1、PD-L1表达水平呈正相关(r>0,P<0.01)。结论早期胃癌组织中存在FOXP3+Tregs和PD-1/PD-L1通路的共同表达,提示联合二者可为临床早期胃癌的判定提供重要参考。

口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析

以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。

乏氧对人口腔鳞状细胞癌细胞中叉头蛋白P3表达的影响及其机制

目的:观察乏氧对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中叉头蛋白P3(FOXP3)表达的影响,阐明乏氧调控FOXP3表达的表观遗传学机制。方法:选取人OSCC细胞株FaDu和OECM-1细胞,常氧和乏氧条件下培养18h。采用实时定量PCR方法检测细胞中FOXP3mRNA的相对表达水平,Western blotting法检测FaDu和OECM-1细胞中FoxP3蛋白表达水平,染色质免疫沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测FOXP3基因启动子上组蛋白修饰H3K4乙酰化(H3K4ac)、H3K4三甲基化(H3K4me3)和H3K27三甲基化(H3K27me3)水平。采用组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)基因沉默的FaDu细胞,以实时定量PCR和ChIP-qPCR法检测FaDu细胞中HDA3mRNA相对表达水平和FOXP3mTNA表达抑制率。结果:与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3 mRNA相对表达水平均明显降低,分别下降65.6%(P<0.01)和75.7%(P<0.01);Western blotting检测,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3蛋白表达水平明显低于常氧条件下;染色质免疫沉淀实验,与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu细胞中FOXP3基因启动子上的H3K4ac和H3K4me3水平明显降低(P<0.01),而H3K27me3水平无明显差异。与无HDAC3基因沉默的FaDu细胞比较,HDAC3基因沉默的FaDu细胞中缺氧诱导的FOXP3启动子上H3K4ac和H3K4me3表达抑制率明显降低(P<0.05),缺氧诱导的FOXP3mRNA相对表达抑制率降低(P<0.05)。结论:乏氧可通过HDAC3介导的FOXP3基因启动子上H3K4ac水平下调而抑制OSCC细胞中FOXP3的表达。

禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备

禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍，它除了可引起鸡传染性关节炎外，还可能引起矮小综合症和免疫抑制等。从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大，抗原性也不尽相同。ARV是一种双股RNA病毒，病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成。

叉头框蛋白P3在老年乳腺癌不同分子分型中的表达

目的探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)在不同分子分型老年乳腺癌中的表达及其与患者临床特征的关系。方法免疫组化法检测120例老年乳腺癌组织及相应癌旁组织中FOXP3蛋白的表达情况;观察不同分子分型老年乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3蛋白阳性表达情况。收集120例老年乳腺癌患者的临床资料,分析影响不同分子分型老年乳腺癌患者FOXP3蛋白表达的因素。结果乳腺癌组织中FOXP3蛋白阳性率为50.83%,明显高于癌旁正常组织的39.17%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。Luminal A型、Luminal B型、人表皮生长因子受体2(HER2)过表达型和三阴性乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3蛋白阳性率分别为46.67%、51.11%、68.75%和44.83%,组间比较差异无统计学意义(P﹥0.05)。有淋巴结转移的Luminal A型和Luminal B型乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3蛋白的阳性表达率,均明显高于无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。有淋巴结转移和组织学分级为3级的HER2过表达型乳腺癌患者乳腺癌组织中FOXP3蛋白的阳性表达率,均高于无淋巴结转移和组织学分级为1~2级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移是Luminal A型、Luminal B型乳腺癌患者乳腺癌组织FOXP3蛋白阳性表达的影响因素(P﹤0.05)。结论FOXP3蛋白在老年乳腺癌的浸润及转移中发挥作用,是老年乳腺癌进展的重要因子,FOXP3蛋白阳性表达率高的患者易发生淋巴结转移,预后较差。

IRF4通过调控FOXP3影响支气管肺发育不良模型小鼠肺血管内皮细胞增殖

目的:通过分析干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)和叉头框蛋白P3(forkhead box P3,FOXP3)的相互作用及其与肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)增殖的关系,探讨IRF4在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型小鼠肺发育中的作用。方法:利用85%高氧暴露建立C57BL/6小鼠BPD模型,以空气暴露为正常对照,将小鼠分为常氧7 d(normoxia for 7 d,N7)组、高氧7 d(hyperoxia for 7 d,H7)组、常氧14 d(normoxia for 14 d,N14)组和高氧14 d(hyperoxia for 14 d,H14)组,每组6只。分别在空气或高氧暴露7 d和14 d取肺组织,苏木素-伊红染色观察肺组织病理情况;免疫组化染色检测PVECs增殖标志物血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的表达;Western blot检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)、FOXP3和IRF4蛋白的表达水平;免疫共沉淀检测IRF4和FOXP3蛋白的相互作用。结果:与同时间点常氧组相比,高氧组小鼠肺组织CD31阳性细胞平均光密度和肺血管密度均显著降低(P<0.01);高氧组小鼠肺组织VEGFA、Ang-1和FOXP3蛋白表达水平均显著降低,IRF4蛋白表达水平显著升高(P<0.01);免疫共沉淀提示IRF4和FOXP3存在相互作用,且高氧组较常氧组相互作用显著增强(P<0.01);IRF4和FOXP3蛋白表达呈显著负相关(R=-0.932,P<0.01),FOXP3蛋白表达与CD31呈显著正相关(R=0.865,P<0.01)。结论:在高氧诱导的BPD模型小鼠中,IRF4可能通过抑制FOXP3蛋白表达影响PVECs的增殖和肺血管发育。

直肠癌患者MDSC百分比和RORαmRNA、IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA表达的临床意义

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中视黄酸相关孤儿核受体α(RORα)mRNA、白细胞介素17E(IL-17E)mRNA、叉头框蛋白P3(FOXP3)mRNA和髓源性抑制细胞(MDSC)百分比在直肠癌中的临床价值。方法选取直肠癌患者95例(直肠癌组)、健康体检者45名(正常对照组),收集所有研究对象的临床资料,检测所有研究对象PBMC中RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA水平和MDSC百分比。结果直肠癌组FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比均高于正常对照组(P<0.05),RORαmRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。有淋巴转移、TNM分期Ⅲ期的直肠癌患者FOXP3mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比分别高于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05),RORαmRNA相对表达量分别低于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径的直肠癌患者之间RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论直肠癌患者IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA水平和MDSC显著升高,RORαmRNA水平显著降低,且与TNM分期和淋巴转移有关,或可作为直肠癌筛查和病情监测的指标。

雷公藤多甙对骨缺损模型大鼠Foxp3及骨形态发生蛋白7表达的影响

目的探讨雷公藤多甙对骨缺损模型大鼠叉头框蛋白P3(Foxp3)及骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的影响。方法清洁级雌性SD大鼠36只,随机数字表法分为2组:雷公藤多甙组与对照组,每组各18只。2组均建立骨缺损模型,雷公藤多甙组给予雷公藤多甙20 mg处理缺损部位,对照组于缺损部位放入等体积的小牛血清。术后6周与12周,记录2组大鼠形态变化、最大载荷与最大应变量;测量椎体骨组织学形态参数,包括骨小梁体积(TBV)百分比和骨小梁表面(TRS)百分比;免疫组化分析Foxp3和BMP7表达情况;观察2组大鼠病理组织情况。结果所有大鼠均顺利建模成功,精神状况良好,反应灵敏、迅速,饮食、饮水均正常,毛发整洁。术后6周与12周,雷公藤多甙组大鼠的最大载荷、最大应变量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组大鼠TBV%显著高于对照组,TRS%显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组大鼠Foxp3、BMP-7相对表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组缺损部位病理病变较对照组轻,炎性细胞浸润明显减少,软骨基质及软骨细胞无退行性变,关节软骨表面光滑。结论雷公藤多甙在骨缺损模型大鼠中的应用安全性佳,能促进Foxp3及BMP-7的表达,可改善骨缺损组织的组织学形态与椎体力学状况,有利于提高修复效果。

针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的影响

目的:观察针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:144只孕鼠随机分为对照组(N)、米非司酮组(M)、米非司酮+针刺组(A)和米非司酮+黄体酮组(W),每组随机再分为6 d组、8 d组和10 d组。其中M组、A组和W组妊娠1 d给予米非司酮-麻油溶液造模,N组则给予等量麻油溶液。同时,每天下午A组固定并行针刺三阴交和后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直到处死当天结束。统计孕鼠胚胎着床数,用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜的CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,Western blotting和real-time PCR测定着床点的子宫内膜Foxp3的表达。结果:与N组相比,M组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例、着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均明显下降(P<0.05);与M组相比,A组和W组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例以及着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均有不同程度地升高。结论:针刺改善胚胎着床障碍大鼠的胚胎着床可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的调节密切相关。

外周血叉头框蛋白P3的表达与原因不明复发性流产关系的研究

目的:探讨外周血叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:选择2018年5月至2020年5月于本院进行治疗的126例URSA患者作为URSA组,选择同期于本院进行产前检查的82例健康孕妇作为对照组。比较两组的一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3的mRNA表达;多因素Logisitic回归分析影响URSA发生的相关因素;Pearson相关性分析外周血Foxp3水平与导致URSA发生的危险因素的相关性;流式细胞术检测Foxp3对Th17/Treg平衡的调控作用;ROC曲线分析Foxp3水平对发生URSA的预测价值,并评价其准确度和有效性。结果:两组的孕酮、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、Foxp3、Th17、Treg、Th17/Treg差异均有统计学意义(P<0.05)。孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平及IL-6、IL-17、Th17水平、Th17/Treg比值均是影响URSA发生的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。Foxp3分别与孕酮、IL-10、TGF-β、Treg呈显著正相关(r>0,P<0.05),与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈显著负相关(r<0,P<0.05);Foxp3刺激CD4+T细胞12小时和24小时能够显著降低Th17细胞比例和Th17/Treg比值,增加Treg细胞比例。ROC曲线分析Foxp3预测URSA发生的曲线下面积为0.795,准确度和有效性较好。结论:孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平降低及IL-6、IL-17、Th17水平及Th17/Treg比值增加均可能导致URSA的发生风险增加,Foxp3对Th17/Treg平衡具有调控作用。

肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段在大肠杆菌中克隆的研究

在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨羧基端基因片段功能打基础。采用PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用SalI和EcoRI酶切消化 ,回收 1kb大小的DNA片段并与 pUC19DNA连接 ,转入大肠杆菌JM10 9菌株。用X gal平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株 ,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。经PCR扩增MPDNA获得 1条 5 .0kbDNA片段。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出 2条带 ,1条为pUC19载体DNA带 ,另 1条是 1kb的插入片段。实验获得肺炎支原体P1蛋白结构基因及含P1蛋白羧基端DNA片段的重组克隆株。

基于FoxP3、RORγt及相关细胞因子探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎的干预机制

目的基于叉头框蛋白P3(FoxP3)、RAR相关孤儿受体γt(RORγt)及相关细胞因子探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)的干预机制。方法将48只大鼠随机分为空白组6只和模型制备组42只,模型制备组以脱氧胆酸钠加氨水联合法建立CAG模型。造模成功后,除去意外死亡及用于模型验证的12只大鼠,将剩余的30只大鼠随机分为模型组、半夏泻心汤低剂量组、半夏泻心汤中剂量组、半夏泻心汤高剂量组、叶酸组,各6只。给予空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水,给予叶酸组大鼠灌胃叶酸,分别按照4.185 g/kg、8.370 g/kg、16.740 g/kg给予半夏泻心汤低剂量、半夏泻心汤中剂量、半夏泻心汤高剂量组大鼠灌胃半夏泻心汤,均连续干预12周。实验期间观察各组大鼠一般情况。给药结束后,取各组大鼠胃黏膜组织观察病理学变化及细胞凋亡情况,并检测FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平,取血清标本检测白细胞介素(IL)-10、IL-17、转化生长因子β(TGF-β)含量。结果与空白组相比,模型组大鼠毛色泛黄且光泽度下降,食欲降低,大便稀溏,肛周潮湿,体质量下降,胃黏膜固有层腺体数量减少,凋亡细胞增多,血清IL-10、IL-17、TGF-β含量及胃黏膜组织FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组和叶酸组大鼠毛色光泽度及大便性状有所改善,食欲增大,肛周毛发干燥,体质量增长,胃黏膜固有层腺体数量不同程度增加,凋亡细胞减少,血清IL-10、IL-17、TGF-β含量及胃黏膜组织FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平均下降(均P<0.05)。在半夏泻心汤各剂量组中,半夏泻心汤低剂量组上述指标改善最为明显。结论半夏泻心汤能够有效改善CAG大鼠的临床症状和病理改变,低剂量的半夏泻心汤可获得最佳的干预效果。半夏泻心汤干预CAG的机制可能与其下调大鼠胃黏膜Foxp3、RoRγt的mRNA表达及相关细胞因子的表达有关。

外周血Foxp3、RANTES联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值

目的探讨外周血叉头框蛋白p3(Foxp3)、T细胞正常表达和分泌刺激因子(RANTES)联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值。方法选择2021年7月至2022年9月本院收治的128例原因不明复发性流产患者为病例组,另选取同期于本院体检的128例健康早孕者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象外周血的Foxp3和RANTES水平,流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)水平。采用Pearson和Spearman相关性分析法分析外周血Foxp3和RANTES水平与免疫指标和原因不明复发性流产的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血Foxp3和RANTES水平对原因不明复发性流产的诊断价值。结果与对照组比较,病例组外周血Foxp3、RANTES水平和Treg比例显著下降(P<0.05),Th17比例和Th17/Treg显著升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,病例组外周血Foxp3和RANTES水平与Th17、Th17/Treg均呈显著负相关(P<0.05),与Treg均呈显著正相关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产的发生呈显著负相关(r=-0.539,-0.554,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清Foxp3水平单独诊断原因不明复发性流产发生的曲线下面积(AUC)为0.820[95%CI(0.767,0.865)],其敏感度、特异度分别为70.31%、85.94%;血清RANTES水平单独诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.840[95%CI(0.789,0.883)],其敏感度、特异度分别为69.53%、85.16%;血清Foxp3和RANTES联合诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.909[95%CI(0.867,0.942)],显著大于Foxp3单独诊断的AUC(Z=4.165,P=0.000)和RANTES单独诊断的AUC(Z=3.183,P=0.002)。结论Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产孕妇的免疫平衡失调有关,二者联合对原因不明复发性流产具有较高的诊断价值。