重组人IFNα-2b融合表达及纯化工艺研究

为了利用多分子伴侣表达载体在大肠埃希氏菌中融合表达人干扰素（IFNα）-2b，并进行IFNα-2b纯化工艺研究，试验采用人工设计并合成Smt3-IFN（x-2b克隆至自行构建的P32-TrxA载体中，将重组表达质粒P32-TrxA—Smt3-IFNα-2b转化至大肠埃希氏菌（E．coil）BL21（DE3），经IPTG诱导表达、SDS—PAGE分析，在此基础上利用金属螯合层析、SUMO蛋白酶酶切、阴离子交换层析以及凝胶层析建立了IFNot-2b的纯化工艺。结果表明：重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确；融合蛋白分子质量约为40ku，主要以可溶形式表达，表达量占菌体总蛋白的30％以上；纯化的IFNα-2b分子质量约为17ku，蛋白纯度达到95％以上，利用细胞病变抑制法测得干扰素的效价为1．0×10^8IU／mg。说明成功在大肠埃希氏菌中表达并经过简易工艺纯化了重组蛋白IFNα-2b。