miR-340-5p靶向调控ARID1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平。通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化。双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系。最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展。结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P<0.05)。通过抑制BCPAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平。miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系。敲降ARID1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭。

血清miR-340-5p、Bmi-1与老年急性脑梗死后血管性认知障碍的相关性研究

目的探讨血清微小RNA-340-5p(miR-340-5p)、B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)与老年急性脑梗死后血管性认知障碍(VCI)的相关性。方法选取2021年3月至2023年2月就诊的103例老年急性脑梗死患者作为研究对象,根据MoCA评分将患者分为VCI组(n=60)和无VCI组(n=43)。比较2组患者的一般资料;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组血清中miR-340-5p、Bmi-1的表达情况;ENCORI预测miR-340-5p与Bmi-1的靶向关系;Pearson法分析VCI患者血清miR-340-5p与Bmi-1表达水平相关性;Spearman相关分析血清miR-340-5p、Bmi-1水平与MoCA评分的相关性;Logistic回归分析老年急性脑梗死患者发生VCI的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-340-5p、Bmi-1水平对老年急性脑梗死患者发生VCI的诊断价值。结果VCI组患者吸烟史、既往脑梗病史占比显著高于无VCI组(P<0.05),MoCA评分显著低于无VCI组,差异有统计学意义(P<0.05);与无VCI组相比,VCI组miR-340-5p表达水平均明显降低(P<0.05),Bmi-1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ENCORI网站预测结果显示,miR-340-5p与Bmi-1可能存在靶向关系;且VCI组患者血清miR-340-5p表达水平与Bmi-1呈负相关,血清miR-340-5p表达与MoCA评分呈正相关,Bmi-1表达与MoCA评分呈负相关(P<0.05);Logistics回归分析结果显示,MoCA评分、miR-340-5p是影响老年急性脑梗死患者发生VCI的保护因素(P<0.05),吸烟史、既往脑梗死病史、Bmi-1是影响老年急性脑梗死患者发生VCI的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-340-5p、Bmi-1表达水平(AUC=0.851、0.886)对老年急性脑梗死后VCI有良好的诊断效果,且二者联合诊断效果更佳(AUC=0.947,Z二者联合-miR-340-5p=3.018、P=0.003,Z二者联合-Bmi-1=2.636,P=0.008)。结论老年急性脑梗死后VCI患者血清,miR-340-5p表达下调,Bmi-1表达上调,二者表达水平与老年急性脑梗死患者发生VCI过程密切相关。

CircCCND1调节miR-340-5p/TGIF1轴对H446肺癌细胞恶性生物学行为的影响

背景与目的 肺癌是常见的肺部恶性肿瘤,探究肺癌发生发展的分子机制是当前研究的热点。环状RNA细胞周期蛋白D1 (circular RNA Cyclin D1,CircCCND1)在肺癌中高表达,可能是治疗肺癌的潜在靶点。本研究旨在探讨CircCCND1调节miR-340-5p/转化生长因子β诱导因子同源框1 (transforming growth factor β-induced factor homeobox 1,TGIF1)轴对肺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人肺癌H446细胞中CircCCND1、miR-340-5p及TGIF1 mRNA表达。将体外培养的H446细胞分为对照组、CircCCND1 siRNA组、miR-340-5p mimics组、阴性对照组、CircCCND1 siRNA+miR-340-5p inhibitor组,检测细胞增殖、线粒体膜电位、凋亡、迁移和侵袭情况,以及各组细胞CircCCND1、miR-340-5p、TGIF1 mRNA、BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3 (cleaved Caspase-3)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、TGIF1蛋白表达,并验证miR-340-5p与CircCCND1、TGIF1的靶向关系。结果 与BEAS-2B细胞相比,H446细胞CircCCND1、TGIF1 mRNA升高,miR-340-5p表达降低(P<0.05)。敲低CircCCND1或上调miR-340-5p表达可抑制H446细胞增殖、迁移、侵袭,降低TGIF1 mRNA和TGIF1蛋白表达,促进细胞凋亡;下调miR-340-5p可拮抗敲低CircCCND1对H446肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用。CircCCND1可能靶向下调miR-340-5p,miR-340-5p可能靶向下调TGIF1。结论 敲低CircCCND1可抑制肺癌H446细胞恶性行为,其作用可能是通过调控miR-340-5p/TGIF1轴实现的。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

老年急性缺血性脑卒中患者血清miR-340-5p及STING水平与病情及预后的关系

目的 探究老年急性缺血性脑卒中患者血清miR-340-5p及干扰素基因刺激蛋白(STING)水平与病情及预后的关系。方法 选择邯郸市中心医院2020年5月—2022年5月收治的老年急性缺血性脑卒中患者113例作为研究组,另选取同期正常健康者113例作为对照组。根据患者入院当天的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估神经缺损程度(<6分为轻度,6~<14分为中度,≥14分为重度),根据治疗3个月后改良Rankin量表(mRs)评分评估预后[预后良好(0~2分)、预后不良(≥3分)]。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-340-5p、STING表达水平,多因素logistic回归分析预后的影响因素。ROC曲线分析血清miR-340-5p、STING对预后的预测价值。结果 研究组血清miR-340-5p表达水平低于对照组(P<0.05),血清STING表达水平高于对照组(P<0.05)。神经缺损程度轻度37例、中度43例、重度33例,血清miR-340-5p在不同神经缺损程度患者中的表达水平为重度者<中度者<轻度者(P<0.05),而血清STING在不同神经缺损程度患者中的表达水平为重度者>中度者>轻度者(P<0.05)。预后良好74例,预后不良39例,预后不良组血清STING水平、入院时NIHSS评分均高于预后良好组(P<0.05),而血清miR-340-5p水平低于预后良好组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示:血清miR-340-5p为预后的保护因素(P<0.05),血清STING及NIHSS评分为其危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,血清miR-340-5p、STING联合预测预后的曲线下面积大于各指标单独预测(P<0.05)。结论 血清miR-340-5p及STING表达水平均能反映老年急性缺血性脑卒中患者的病情,在预后预测方面具有一定的临床价值。

CCCK-18CTRP-3miR-340-5p预测重症高血压性脑出血患者预后的价值

目的探讨CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p在重症高血压性脑出血患者中的表达及相关性。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2019-10—2021-10收治的80例重症高血压性脑出血患者为观察组,另选取同期健康体检者80例为对照组,比较对照组与观察组血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,依据mRS评分将观察组患者分为预后良好组(55例)和预后不良组(25例),比较不同预后患者一般资料及血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,Logistic回归分析重症高血压性脑出血患者预后的影响因素,Pearson相关性分析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p之间的相关性,ROC曲线分析血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p单独及三者联合预测高血压性脑出血预后的价值。结果观察组血清CCCK-18高于对照组,CTRP-3、miR-340-5p低于对照组(P<0.05)。预后良好组血清CCCK-18低于预后不良组,CTRP-3、miR-340-5p高于预后不良组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p均是重症高血压性脑出血患者预后的影响因素(P<0.05)。血清CCCK-18与血清CTRP-3、miR-340-5p呈负相关(r=-0.385,r=-0.406,P<0.05),三者联合检测预测患者预后的AUC值较高(P<0.05)。结论重症高血压性脑出血患者CCCK-18呈高表达,CTRP-3、miR-340-5p呈低表达,其对高血压脑出血病情判断和预后具有重要意义。

LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA TMPO反义RNA1(LncRNA TMPO-AS1)调控miR-340-5p/RUNT相关转录因子1(RUNX1)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29中TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1表达;将HCT116细胞随机分为:si-ctrl组、si-TMPO-AS1组、mimics NC组、miR-340-5p组、si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组、si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组;qRT-PCR检测6组HCT116细胞TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1水平;CCK-8法检测HCT116细胞活力;EDU法检测HCT116细胞增殖;Transwell检测HCT116细胞迁移和侵袭;western blot检测HCT116细胞RUNX1、PCNA、MMP-2表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证TMPO-AS1和miR-340-5p、miR-340-5p和RUNX1的关系。结果与HCoEpiC细胞比较,不同CRC细胞中TMPO-AS1、RUNX1表达显著性升高,miR-424-5p表达显著性降低(P<0.05),且HCT116细胞变化结果更显著,后续实验选择HCT116细胞。与si-ctrl组比较,si-TMPO-AS1组HCT116细胞TMPO-AS1、RUNX1 mRNA水平、细胞活力A值、EDU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、RUNX1、PCNA、MMP-2蛋白水平均显著性降低,miR-340-5p mRNA水平显著性升高(P<0.05);与mimics NC组比较,miR-340-5p组HCT116细胞RUNX1 mRNA水平、细胞活力A值、EDU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、RUNX1、PCNA、MMP-2蛋白水平均显著性降低,miR-340-5p mRNA水平显著性升高(P<0.05);与si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组比较,si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组HCT116细胞RUNX1 mRNA水平、细胞活力A值、EDU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、RUNX1、PCNA、MMP-2蛋白水平均显著性升高,miR-340-5p mRNA水平显著性降低(P<0.05);TMPO-AS1靶向负调控miR-340-5p表达,miR-340-5p靶向负调控RUNX1表达。结论沉默TMPO-AS1靶向上调miR-340-5p表达,从而下调RUNX1表达,抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA EBLN3P调节miR-340-5p/线粒体转录因子A轴对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA EBLN3P调节微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/线粒体转录因子A(TFAM)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法:使用NSCLC细胞系为研究对象。将A549细胞分为Ctrl组、si-NC组、si-EBLN3P组、si-EBLN3P+NC inhibitor组、si-EBLN3P+miR-340-5p inhibitor组,应用MTT、EdU、Transwell检测细胞增殖、迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证EBLN3P、miR-340-5p、TFAM 3者间的靶向关系;分别检测TFAM、miR-340-5p、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。结果:EBLN3P在肺癌组织和细胞中表达上调;在NSCLC细胞中,TFAM表达上调,miR-340-5p表达降低。抑制EBLN3P表达可显著抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭,且E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin蛋白表达下降。EBLN3P、TFAM与miR-340-5p存在靶向关系。结论:EBLN3P在NSCLC组织与细胞中呈高表达,抑制EBLN3P表达可通过调节miR-340-5p/TFAM信号轴,抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭。

P340聚丙管材——抗腐蚀新材料

介绍了Ｐ３４０聚丙管的耐蚀等性能，通过对各种管材在制碱工业中使用效果的比较，认为该管材不仅可以满足纯碱生产的工艺要求，而且在很多场合下，可以替代黑色金属及不锈钢管材，并且有投资小，寿命长，不易结疤，不堵塞，综合机械性能好，提高产品质量等优点。

2款天然气重卡大比拼——依维柯Stralis 440S33 LNG VS斯堪尼亚P340 CNG

长期以来,汽车行业一直在找寻可替代燃料的解决方案,天然气就是其中一种。在商用车领域实施欧Ⅵ排放标准中,欧洲开始加快推动这种清洁能源的实际应用。使用天然气作为燃料的车型大多应用在城市内短途交通及公共交通领域，低噪声和低燃料使用成本是其主要优势，然而相对较短的续驶里程以及加气网点分布较少是限制天然气车辆进入长途运输领域的主要原因。

hsa-miR-340-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路。方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性。运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选。结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守。采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9%。GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能。KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中。基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A。结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程。

山奈酚通过上调miR-340-5p减轻脊神经结扎大鼠的神经性疼痛

目的探讨山奈酚(kaempferol,KAE)对脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)大鼠神经性疼痛的作用机制。方法采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠星形胶质细胞建立炎症模型,用山奈酚单独或与miR-340-5p抑制剂共同处理细胞,RT-qPCR检测miR-340-5p表达,ELISA检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;荧光素酶报告基因实验验证AKT3与miR-340-5p的靶向关系;Western blotting检测自噬标志蛋白的表达。此外,建立SNL大鼠模型,山奈酚口服给药后,检测miR-340-5p表达,炎症因子以及自噬标志蛋白水平,并测定大鼠机械缩爪阈值和缩爪潜伏期。结果在LPS诱导的星形胶质细胞中,山奈酚上调miR-340-5p表达,抑制IL-1β和TNF-α分泌,转染miR-340-5p抑制剂则逆转山奈酚对miR-340-5p表达的促进作用以及对炎症因子分泌的抑制作用。AKT3被确定是miR-340-5p的靶基因。山奈酚上调miR-340-5p表达,进而阻断AKT3/mTOR信号通路,增强星形胶质细胞自噬。山奈酚给药的SNL大鼠表现出miR-340-5p表达上调,炎症因子分泌减少,自噬相关蛋白表达增加,机械缩爪阈值增加,缩爪潜伏期延长。结论山奈酚通过上调miR-340-5p靶向抑制AKT3/mTOR信号通路,抑制星形胶质细胞炎症反应,增强自噬,减轻SNL大鼠神经性疼痛。

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA和蛋白表达。结果在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达(P<0.05)。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达(P<0.05)。转染si-lncRNA XIST后,lncRNA XIST水平、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);共转染si-lncRNA XIST和miR-340-5p inhibitor后上述指标均得到逆转(P<0.05)。结论lncRNA XIST通过下调miR-340-5p促进卵巢癌细胞EMT。

MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取2017年1月至2018年6月在我院进行胃癌根治术的96例胃癌患者为研究对象,收集患者的胃癌组织及离肿瘤边缘5 cm处的癌旁组织。采用免疫组织化学染色法观察胃癌组织及癌旁组织中MICAL2的表达情况;Western Blot法检测胃癌组织中MICAL2蛋白水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胃癌组织中miR-340-5p表达水平。分析MICAL2、miR-340-5p表达水平与患者临床病理参数的关系;Pearson法分析MICAL2与miR-340-5p表达的相关性;对患者随访3年,利用Kaplan-Meier法分析不同MICAL2、miR-340-5p水平与患者3年累积生存率的关系;采用多因素Cox回归风险模型分析胃癌患者的预后影响因素。结果:胃癌患者癌组织中MICAL2、miR-340-5p表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中MICAL2蛋白阳性表达率为71.88%(69/96),癌旁组织中MICAL2蛋白阳性表达率为11.46%(11/96)(P<0.05);胃癌组织中MICAL2蛋白和miR-340-5p表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);胃癌组织中MICAL2与miR-340-5p的表达水平呈正相关(r=0.313,P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,miR-340-5p高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=9.096,P=0.003),MICAL2蛋白高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=4.329,P=0.037);Cox回归分析结果显示,MICAL2、miR-340-5p、淋巴结转移、TNM分期均是影响患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中明显高表达,二者与胃癌患者病情发展和预后密切相关,可能成为胃癌基因治疗的新靶点。

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-PCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMP-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低(P<0.05),其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2降低(P<0.05);与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2表达降低(P<0.05)。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。

急性胰腺炎患者血清微小RNA-340-3p、CXC趋化因子配体-13和CXC趋化因子配体-16的表达意义

目的:检测急性胰腺炎患者血清中微小RNA-340-3p(miR-340-3p)、CXC趋化因子配体-13(CXCL-13)和CXC趋化因子配体-16(CXCL-16)的表达特征,分析其相关性。方法:选择确诊为急性胰腺炎的患者69例作为观察组,选择经体检健康的成人69例作为对照组。留取所有研究对象的血清标本,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-340-3p的表达,应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测CXCL-13、CXCL-16的表达。应用生物信息分析预测miR-340-3p和CXCL-13、miR-340-3p和CXCL-16的靶向关系。结果:miR-340-3p在观察组中的表达量明显低于对照组,CXCL-13和CXCL-16在观察组中的表达量明显高于对照组(均P<0.05)。miR-340-3p、CXCL-13和CXCL-16在观察组不同病变分级中的表达差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组中miR-340-3p和CXCL-13(r=-0.63,P=0.032)、miR-340-3p和CXCL-16(r=-0.62,P=0.022)均呈负相关性,CXCL-13和CXCL-16(r=0.61,P=0.014)呈正相关性。生物信息分析显示miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有可能的结合位点。结论:急性胰腺炎患者血清中miR-340-3p低表达、CXCL-13和CXCL-16高表达,miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有协同负向作用,参与病变的形成和进展。

上调miR-340减轻异丙酚反复麻醉诱导大鼠的学习记忆障碍

目的揭示miR-340-5p在异丙酚(Prop)反复麻醉诱导的大鼠学习记忆障碍中的调控作用。方法通过对大鼠连续5 d尾静脉输注异丙酚诱导学习记忆障碍动物模型,然后将大鼠随机分为4组:对照组、模型组、NC-agomir组和miR-agomir组,每组10只。建模时,对照组大鼠尾静脉输注脂肪乳,其他3组大鼠均尾静脉输注异丙酚。给药处理时,对照组和模型组大鼠侧脑室注射10μl的PBS缓冲液,NC-agomir组和miR-agomir组大鼠分别注射10μl的NC-agomir和miR-340-5p-agomir。给药48 h后,通过Morris水迷宫实验评价大鼠的学习记忆功能,并对海马组织进行尼氏染色。根据试剂盒说明书检测海马组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。通过qRT-PCR检测海马组织中miR-340-5p以及β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、淀粉样前体蛋白695(APP695)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA水平。通过Western blot检测海马组织中BACE1、Bcl-2、Bax和β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)的蛋白表达水平。结果与模型组和NC-agomir组比较,miR-agomir组大鼠的逃避潜伏期缩短,而穿越平台次数增加(P<0.05)。与模型组和NC-agomir组比较,miR-agomir组大鼠尼氏体形态和数量均明显改善,海马组织中Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax降低(P<0.05)。与模型组和NC-agomir组比较,miR-agomir组大鼠海马组织中MDA水平降低,SOD水平升高(P<0.05);IL-6和TNF-α的mRNA水平降低(P<0.05),miR-340-5p水平升高,BACE1和APP695的mRNA表达水平以及BACE1和Aβ1-42的蛋白水平均降低(P<0.05)。结论上调miR-340-5p有效改善了异丙酚反复麻醉诱导的学习记忆障碍大鼠的学习记忆功能,miR-340-5p可能通过靶向抑制BACE1调节学习记忆功能。

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因，插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游，构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ，使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞，在选择培养基中筛选阳性克隆，用氨甲喋呤加压扩增，建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠，２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体，表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性，可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。

miR-340-5p靶向DNMT1对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制研究

目的:探讨miR-340-5p靶向DNA甲基转移酶1(DNMT1)对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响和分子机制。方法:采用30 mmol/L的D-葡萄糖处理小鼠肾脏足细胞MPC5构建细胞损伤模型。将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、HG+miR-NC组、HG+miR-340-5p组、HG+si-NC组、HG+si-DNMT1组、HG+miR-340-5p+pcDNA组和HG+miR-340-5p+pcDNA-DNMT1组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和DNMT1 mRNA的表达;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印记(western,Blot)检测DNMT1、肾病蛋白(nephrin)、肾小球足细胞裂隙膜蛋白(podocin)表达。双荧光素酶报告基因实验和Western Blot验证miR-340-5p对DNMT1的靶向调控关系。结果:与NG组比较,HG组MPC5细胞miR-340-5p、nephrin、podocin表达显著降低,DNMT1表达、细胞凋亡率显著升高;与HG+miR-NC组比较,HG+miR-340-5p组MPC5细胞nephrin和podocin表达显著升高,细胞凋亡率显著降低;与HG+si-NC组比较,HG+si-DNMT1组MPC5细胞nephrin、podocin和Bcl-2的表达显著升高,细胞凋亡率显著降低;与HG+miR-340-5p+pcDNA组比较,HG+miR-340-5p+pcDNA-DNMT1组MPC5细胞nephrin、podocin表达显著降低,细胞凋亡率显著升高。结论:miR-340-5p通过靶向DNMT1可抑制高糖诱导的小鼠足细胞损伤。

右美托咪定对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡的防护作用及机制

目的探讨右美托咪定(Dex)对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡的防护作用及机制。方法选取大鼠心肌细胞H9c2,根据微小RNA(miR)-340-5p抑制剂及其阴性对照抑制剂转染情况,分为对照组(未处理)、阴性对照抑制剂组和miR-340-5p抑制剂组;根据miR-340-5p抑制剂及其阴性对照抑制剂转染、Dex以及缺氧复氧干预,分为对照组(未处理)、缺氧复氧组、缺氧复氧+Dex组、缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组、缺氧复氧+miR-340-5p抑制剂+Dex组;根据miR-340-5p模拟物及其阴性对照模拟物转染、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)碱基突变情况,分为HMGB1-wtUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-mutUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-wtUTR+miR-340-5p模拟物组、HMGB1-mutUTR+miR-340-5p模拟物组。采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测HMGB1 mRNA、miR-340-5p表达量。采用蛋白质印迹法检测HMGB1、B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达量。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。采用双荧光素酶试验验证miR-340-5p与HMGB1的靶向结合。结果缺氧复氧+Dex组miR-340-5p表达量高于缺氧复氧组[(0.80±0.04)比(0.25±0.01)],HMGB1mRNA及其蛋白表达量均低于缺氧复氧组[(1.47±0.13)比(5.02±0.52)、(2.09±0.08)比(4.87±0.16)],差异均有统计学意义(均P<0.05)。缺氧复氧+Dex组细胞增殖水平低于对照组,但高于缺氧复氧组;缺氧复氧+miR-340-5p抑制剂+Dex组细胞增殖水平低于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组;差异均有统计学意义(均P<0.05)。缺氧复氧+miR-340-5p抑制剂+Dex组Bcl-2表达量低于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组,Bax表达量、凋亡率均高于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶试验结果显示,HMGB1-wtUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-mutUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-wtUTR+miR-340-5p模拟物组及HMGB1-mutUTR+miR-340-5p模拟物组相对荧光比值比较,差异有统计学意义(F=22.43,P<0.01),且HMGB1-wtUTR+miR-340-5p模拟物组相对荧光比值低于其他3组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Dex可通过上调miR-340-5p表达,从而靶向抑制HMGB1的表达,改善细胞凋亡情况,进而发挥心肌保护作用。