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抗P37多克隆抗体的制备 纯化与鉴定
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作者 杨华 吴健 寿成超 《长治医学院学报》 2011年第2期99-101,共3页
目的:用P37融合蛋白免疫动物制备抗血清,为猪鼻支原体感染作用的分子机制提供依据。方法:诱导表达GST-P37蛋白并以其免疫兔制备免疫血清,ELISA法检测抗血清的效价;Western blot-ting检测抗血清特异性。结果:免疫家兔并纯化抗血清得到特... 目的:用P37融合蛋白免疫动物制备抗血清,为猪鼻支原体感染作用的分子机制提供依据。方法:诱导表达GST-P37蛋白并以其免疫兔制备免疫血清,ELISA法检测抗血清的效价;Western blot-ting检测抗血清特异性。结果:免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗P37抗体,该抗体能检测到P37蛋白的表达。结论:成功制备了抗P37的多克隆抗体,对进一步研究P37的功能提供了一个有用的工具。 展开更多
关键词 p37蛋白 抗血清 多克隆抗体
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非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 张梦杨 何健 +1 位作者 刘阳坤 姚伦广 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期300-309,共10页
【目的】获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组... 【目的】获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE对重组蛋白的可溶性进行分析。收集菌体进行超声破碎,分离沉淀并使用8 mol/L尿素变性后离心,用0.45μm滤膜过滤离心后的上清,使用镍亲和层析柱纯化蛋白,通过SDS-PAGE、Western blotting对其纯化效果及特异性进行验证。将纯化后的p37蛋白按照50μg/只免疫小鼠,制备抗ASFV p37蛋白多克隆抗体。利用间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价;通过Western blotting、间接免疫荧光试验检测该多克隆抗体的特异性。【结果】生物信息学分析表明,p37蛋白为稳定亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(45.28%)、延伸链(15.09%)、无规则卷曲(31.54%)。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,经IPTG诱导后,成功表达重组蛋白p37,大小62 ku左右,主要以包涵体形式存在,且能与His单克隆抗体发生反应。间接ELISA结果显示,制备的鼠源多克隆抗体效价为1∶256000。Western blotting结果显示,在42 ku左右出现了特异性条带;间接免疫荧光显示出了特异性的红色荧光,表明该多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的p37蛋白发生反应,具有较好的特异性。【结论】本试验成功表达并纯化了ASFV p37蛋白,制备了抗ASFV p37蛋白多克隆抗体,重组蛋白具有较好的免疫原性,能产生较强的免疫反应,为后续ASFV p37蛋白结构功能研究、抗体及相关疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) p37蛋白 蛋白表达 多克隆抗体
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P37、P16、PAX-2在子宫内膜增生症中的表达及其意义 被引量:4
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作者 焦艳 《中国医药导报》 CAS 2019年第5期84-87,F0004,共5页
目的分析P37、P16、PAX-2在子宫内膜增生症中的表达及其意义。方法收集2012年12月~2017年8月河北省秦皇岛市妇幼保健院接受病理活检,并经病理组织学活检确诊为子宫内膜增生患者的病理组织标本,其中单纯型及复杂型子宫内膜增生标本31个... 目的分析P37、P16、PAX-2在子宫内膜增生症中的表达及其意义。方法收集2012年12月~2017年8月河北省秦皇岛市妇幼保健院接受病理活检,并经病理组织学活检确诊为子宫内膜增生患者的病理组织标本,其中单纯型及复杂型子宫内膜增生标本31个、不典型子宫内膜增生组织标本30个;另选取30个正常子宫内膜组织标本作为对照。采用免疫组化SP法检测不同组织标本中P37、P16及PAX-2蛋白阳性表达率。结果正常子宫内膜组织中未见P37蛋白阳性表达,不典型增生症组织中阳性表达率高于单纯型或复杂型增生症,差异有统计学意义(P <0.05);不典型增生组织中P16蛋白阳性表达<单纯型或复杂型增生<正常子宫内膜组织,差异有高度统计学意义(P <0.01);不典型增生组织中PAX-2蛋白阳性表达<单纯型或复杂型增生<正常子宫内膜组织,差异有高度统计学意义(P <0.01)。结论 P37、P16、PAX-2在不典型子宫内膜增生中均有一定异常表达,值得进一步深入探究。 展开更多
关键词 p37 P16蛋白 PAX-2 子宫内膜增生症
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Protein P37 of mycoplasma hyorhinis induces secretion of TNF-αfrom human peripheral blood mononuclear cells 被引量:3
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作者 NING Jinying, HUANG Su, WU Jian, MENG Lin & SHOU Chengchao Department of Biochemistry and Molecular Biochemistry, School ofOncology, Peking University and Beijing Institute for Cancer Research, Beijing 100034, China 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2003年第7期658-662,共5页
High mycoplasmal infection ratio in gastric cancer tissues suggests a possible association between my-coplasma infection and tumorigenesis. Because TNF-a plays an important role in carcinogenesis caused by microbes in... High mycoplasmal infection ratio in gastric cancer tissues suggests a possible association between my-coplasma infection and tumorigenesis. Because TNF-a plays an important role in carcinogenesis caused by microbes in-fection and P37 is a major immunogen of mycoplasma hy-orhinis (M. hyor.), investigating whether P37 could induceexpression and secretion of TNF-a will be very significant to elucidate the possible molecular mechanism of gastric car-cinogenesis involved with M. hyor. At the present study, we cloned full gene of p37 by PCR and mutated the 7 codes of TGA into TGG firstly, then expressed the P37 protein suc-cessfully with pGEX-4T-1 vector in E. coli, which was veri-fied with Western blot. By RT-PCR and sensitive L929 cell toxic assay, we found that P37 protein could induce expres-sion and secretion of TNF-a from human peripheral bloodmononuclear cells, and the inducing activity of P37 could be dramatically blocked by McAb PD4. These results suggestthat the induction of TNF-a secretion by P37 probably plays an important role in diseases caused by M. hyor. infectionand needs to be further investigated. 展开更多
关键词 胃癌 人外周血单核细胞 支原体 蛋白质 TNF-Α 发病机制
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