电子束对体外培养的细粒棘球蚴及其p38 mRNA表达的影响

目的观察电子束照射对体外培养的细粒棘球蚴形态结构、死亡率及其p38 mRNA表达的影响。方法采集自然感染的绵羊肝中的细粒棘球蚴原头蚴,随机分成3组,分别用0 Gy、30 Gy、60 Gy的不同剂量的6 MeV电子束各照射1次,照射后连续培养3 d、14 d,光镜观察虫体的大体变化及死亡率,qRT-PCR法测定p38基因的表达水平。结果60 Gy组较0 Gy、30 Gy组原头蚴变性坏死数目明显增多,死亡率有差异(P<0.0125),连续培养天数(3 d、14 d)对虫体死亡率无影响。经电子束照射后,30 Gy、60 Gy组原头蚴p38 mRNA表达水平较0 Gy组升高(P<0.05)。结论体外培养的原头蚴经电子束照射后大体形态结构发生明显变化、死亡率升高,且与电子束的剂量存在量效关系;p38 mRNA的表达量随着电子束的剂量的增加而升高,p38基因可能参与电子束所致体外杀伤棘球蚴的作用机制。

马氏珠母贝丝裂原活化蛋白激酶p38的克隆与表达

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,该蛋白激酶通过磷酸化级联介导的信号通路在细胞对细胞外刺激的反应中起着重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆获得马氏珠母贝MAPK p38(PmMAPK p38)cDNA全长序列并对其序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了PmMAPK p38在马氏珠母贝不同组织以及不同免疫刺激后的表达水平。结果显示,PmMAPK p38 cDNA全长为1516 bp,开放阅读框长度为1071 bp,共编码356个氨基酸,理论分子量为40.88 ku;结构域预测结果表明PmMAPK p38含有MAPK家族典型的S_TKc结构域;多序列比对、进化树构建以及MatGAT计算结果显示PmMAPK p38与其他物种的相似度、保守程度较高;荧光定量分析结果表明,该基因在马氏珠母贝中存在广泛表达,在肝胰腺中表达量最高,其次为外套膜,最低是闭壳肌。马氏珠母贝在受到LPS刺激后,PmMAPK p38的相对表达量在刺激后2 h达到最高,12 h降到最低,最高约为最低的5倍;而在哈维氏弧菌刺激后,PmMAPK p38的相对表达量在2 h达到最高,8 h降到最低,最高约为最低的4倍。研究表明,PmMAPK p38可能在马氏珠母贝的免疫反应,尤其是在抵御外部细菌侵入中起着重要的作用。本研究为贝类免疫防御系统的研究提供了基础资料。

益肾通癃汤通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌作用机制研究

目的探讨益肾通癃汤(YSTLD)通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌的作用机制。方法借助miRNA芯片技术检测YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后的miRNA表达谱的变化,筛选miRNA芯片结果中差异显著的miRNA,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞,CCK8法及划痕实验检测miR-145-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖与迁移作用;qRT-PCR法及Wstern blot法检测miR-145-5p对TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响;qRT-PCR及Wstern blot法检测YSTLD含药血清对miR-145-5p、TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响。结果miRNA基因芯片检测发现YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后存在35种miRNA表达水平与对照组存在显著差异,其中以miR-145-5p差异最为显著,同时qRT-PCR验证发现YSTLD处理的PC-3细胞中的miR-145-5p水平显著高于DMSO对照组(P<0.05)。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞后,发现miR-145-5p能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移。过表达miR-145-5p可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB及Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MAPK、p65 NF-κB的蛋白表达水平(P<0.05);YSTLD含药血清在干预前列腺癌PC-3细胞后,可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB、Bcl-2、TRAF1的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MARK、p65 NF-κB、TRAF1的蛋白表达水平(P<0.05)。结论YSTLD可通过上调miR-145-5p的表达水平,抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路促进前列腺癌PC-3细胞凋亡,这可能是YSTLD抗前列腺癌的重要机制。

二噁英对HepG2和SPC-A1细胞P53和P38 MAPK基因表达的影响

[目的 ]探讨二英 (TCDD)对人体肝癌细胞株 (HepG2 )和肺腺癌细胞株 (SPC A1)中P5 3基因和P3 8MAPK基因表达的影响 ,并研究剂量与效应的关系。 [方法 ]用常规的细胞培养方法 ,利用RT PCR方法对 2种基因进行表达 ,并以 β actin作为内对照。对基因表达的强度进行比较分析。[结果 ]P3 8MAPK基因在 2种细胞中都有表达 ,在HepG2中 ,P3 8MAPK基因表达随浓度 1、5、10、2 0nmol/L增加先抑后扬 (表达值分别为 0 .90 0、0 .82 0、1.2 60、0 .898,P <0 0 5 ) ,而在SPC A1中差异无显著性 (表达值分别为 0 .898、 0 .919、 0 .80 8、 0 .846,P >0 0 5 )。P5 3基因在人体肝癌细胞株(HepG2 )中有表达 ,并随浓度增加而上调 (表达值分别为 0 .764、0 .890、1.0 99、1.2 18、1.40 5 ,P <0 .0 5 )而在肺腺癌细胞株(SPC A1)中未见表达。 [结论 ]二英对人体肝癌细胞株 (HepG2 )中P5 3基因和P3 8MAPK基因有诱导作用 ,在肺腺癌细胞株 (SPC A1)中仅见对P3 8MAPK基因有诱导作用 ,P5

mRNA差异显示法克隆小鼠精子发生相关基因-p38MAPK基因

目的 克隆 1、2、3、4周龄小鼠睾丸之间差异表达的基因。 方法 应用改良的mRNA差异显示技术 ,对 1、2、3、4周龄小鼠睾丸进行了基因表达的差异显示分析 ,并对其中 1个从 2周龄小鼠中高表达的cDNA片段进行了克隆和测序。 结果 所克隆的cDNA片段与小鼠大脑、造血干细胞p38MAPK(p38betamitogen activatedpro teinkinase ,p38MAPK β)基因的同源性分别为 91%和 85 %。Northerndotblot结果显示该基因在小鼠睾丸和脑组织中表达最高。

运动对大鼠骨骼肌p38活性的影响

目的:探讨运动对大鼠骨骼肌p38磷酸化、蛋白和基因表达的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分为1h/d、1.5h/d组,共7周,运动结束后24h和48h取材。测定葡萄糖和胰岛素浓度。采用Westernblot法检测p38和phos-p38的表达,用RT-PCR法分析p38mRNA的表达。结果:与对照组比较,1h/d运动24h取材和1.5h/d运动24h与48h取材p38磷酸化水平明显升高;1.5h/d运动24h取材蛋白含量下降;p38mRNA升高发生于1h/d和1.5h/d运动24h取材组。结论:运动改善p38磷酸化、蛋白和基因表达。

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。

小菜蛾p38 MAPK基因的克隆与生物信息学分析

小菜蛾（PhttellaxylostellaL．）是一种危害十字花科植物的世界性害虫，研究其基因功能为寻找新的小菜蛾防治方法具有重要意义。本研究克隆了小菜蛾p38MAPK基因的开放阅读框（ORF），并根据其DNA序列推导出了蛋白一级结构，发现该基因编码一个含有349个氨基酸残基的蛋白。通过SMART网站分析发现该蛋白在第20～304位氨基酸残基区域存在着一个典型的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶结构域，说明它是一个潜在的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。Blast比对发现Pxp38基因与家蚕Bmp38基因、酿酒酵母ScHOGl基因、人类Homosapiensp38基因在蛋白～级结构上的相似性分别是91．7％、51．6％和78．6％，说明p3sMAPK基因在进化上具有较高的保守性。·

增生性瘢痕内p38丝裂素活化蛋白激酶及其MAPKKs基因的表达

为探讨增生性瘢痕和正常皮肤中p3 8丝裂素活化蛋白激酶 ( p3 8MAPK)及其上游信号分子mkk3和mkk6基因表达的变化 ,提取 8例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织的总RNA后 ,分离纯化mRNA ,用RT PCR方法检测这 3种基因在不同组织中的表达变化规律。结果显示 ,在正常皮肤组织中 ,mkk6和p3 8MAPK基因表达较弱 ,而在增生性瘢痕内 ,这 2种基因PCR产物的灰度比分别为正常皮肤的 1 2倍和 1 9倍 ,基因表达量明显升高 (P <0 0 5和P <0 0 1) ,而mkk3在这两种不同类型组织中的表达量没有显著性差异 (P >0 0 5 )。提示增生性瘢痕的发生可能与mkk6和 p3 8MAPK基因表达升高有关 。

PBX3基因通过p38信号通路对子宫内膜癌细胞生物学特性的影响研究

目的:探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)对子宫内膜癌细胞活力和凋亡率的影响及p38信号通路调控作用。方法:将靶向抑制PBX3的小干扰RNAs(siRNA-PBX3)及阴性对照siRNA(siRNA-Ctrl)转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,SB203580作为p38信号通路抑制剂,未转染细胞为空白对照组,转染48h。Western blot法检测PBX3、PCNA、Bax、p38和p-p38蛋白表达; MTT及流式细胞术检测细胞活力及凋亡率。结果:siRNA-PBX3转染可明显降低PBX3表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA-PBX3组转染24h、48h和72h的细胞活力均降低,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-PBX3转染细胞48h的细胞凋亡率升高,PCNA和p-p38蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与siRNA-PBX3组和SB203580组比较,siRNA-PBX3+SB203580组的细胞活力均明显降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PBX3基因表达抑制可通过下调p38信号通路降低子宫内膜癌细胞活力和诱导凋亡。

P-ERK、P-p38及iNOS、GLUT4在冠心病患者冬眠心肌中表达及意义

目的探讨冬眠心肌(HM)细胞内磷酸化ERK(P-ERK)、磷酸化p38(P-p38)、葡萄糖转运因子4(GLUT4)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化和意义,探讨P-ERK、P-p38与GLUT4、iNOS的关系。方法选择行冠脉搭桥手术的冠心病患者10例,术前1周用多巴酚丁胺超声负荷试验结合多普勒组织成像确定HM及正常心肌(NM)的存在部位,术中根据检测结果取材,用免疫印迹法检测P-ERK、P-p38、iNOS、GLUT4的表达情况,分析HM与NM的P-ERK、P-p38、iNOS、GLUT4含量;分析四者之间的相关性。结果HM细胞内P-ERK、P-p38、GLUT4、iN-OS水平较正常心肌高;P-ERK与GLUT4呈正相关(r=0.665,P<0.05),P-p38与GLUT4、iNOS呈正相关(r=0.708、0.676,P<0.05)。结论心肌缺血缺氧可触发ERK、p38活化,活化的ERK、p38促使心肌细胞增加GLUT4及iNOS表达,促进HM形成。

腺病毒介导IL-24基因对U251胶质瘤细胞p38MAPK及bcl-2表达的影响

目的:探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对人胶质瘤细胞(U251细胞)的杀伤作用,以及对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和bcl-2蛋白表达的影响.方法:应用MTT方法和双荧光染色方法测定Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;蛋白质印迹法检测p38MAPK,p-p38MAPK和bcl-2的表达变化.结果:MTT和双荧光染色方法检测表明,与空载体Ad5F35-VEC组及空白对照组相比,Ad5F35-hIL-24对U251细胞有明显抑制作用.蛋白质印迹检测显示,Ad5F35-hIL-24组的p-p38MAPK蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达减少.结论:腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤U251细胞杀伤作用明显,提示p38MAPK信号转导通路及bcl-2基因表达是Ad5F35-hIL-24重要作用靶点,该结果对于临床治疗胶质瘤有一定参考意义.

胎儿和出生后机体皮肤内p38MAPK及MAPKKs基因表达变化的比较性研究

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38mitogen- activated protein kinase,p38MAPK)及其上游信号分子MAPKKs(mkk3和mkk6 )基因,在不同胎龄胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中表达的变化,及其可能的生物学意义。 方法 用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织(作为对照)的总RNA,分离m RNA,用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription- polymerasechain reaction,RT- PCR)方法检测3种基因在不同组织中的表达规律。 结果 p38MAPK,m kk3和mkk6基因在不同发育阶段的皮肤组织中都有表达。在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,这三种基因表达较强,随着胎儿的生长发育,皮肤组织内这三种基因表达逐渐减弱。在出生后机体的皮肤细胞中,p38MAPK、mkk3和mkk6基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的39.6 %、6 3.5 %和5 4 .5 % ,明显减弱(P<0 .0 1)。 结论 p38MAPK、mkk3和mkk6基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达,显示细胞外信号引起的p38MAPK信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要。在早期妊娠胎儿皮肤中p38MAPK及其上游信号分子MAPKKs基因的高表达可能是胎儿皮肤组织细胞快速增殖、皮肤创面无瘢痕愈合的机制之一。

p38 MAPK介导E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管内皮细胞凋亡

目的:研究E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)在依托泊苷(VP-16)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及其调控机制。方法:将体外培养的原代HUVECs用pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体分别转染,通过G418(800 mg/L)和嘌呤霉素(2.5 mg/L)筛选分别获得CREG过表达组HUVECs(H-C)和CREG低表达组HUVECs(H-S)。在H-C、HUVECs(H)和H-S3种细胞模型中加入凋亡诱导剂VP-16(100μmol/L,6 h),用TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;用Western blotting检测细胞中磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白表达量;应用p38特异性抑制剂SB203580(20μmol/L)预处理H-S细胞后,检测VP-16刺激诱导的细胞凋亡情况。结果:HUVECs经pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体转染获得稳定的细胞克隆。经Western blotting证实,与HUVECs对照比较,H-C组细胞CREG表达明显增加至160%,而H-S组细胞中的CREG表达下降约70%。加入凋亡诱导剂VP-16(100μmol/L,6 h)后,TUNEL和流式双荧光染色检测结果均提示H-S中的细胞凋亡率明显升高,而H-C组细胞凋亡率较HUVECs对照组明显降低,两者具有显著差异。进一步应用Western blotting分析显示经VP-16刺激后,H-S细胞中p-p38蛋白表达较HUVECs和H-C组细胞显著增加;在H-S中添加SB203580(20μmol/L)后,VP-16诱导的细胞凋亡现象被显著抑制。结论:CREG过表达可能通过抑制p38 MAPK的激活阻遏VP-16诱导的HU-VECs凋亡。

p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系

目的探讨p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPKs)信号通路直接持续活化在γ-珠蛋白基因转录激活和胎儿血红蛋白(HbF)合成中的作用,为阐明p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系提供直接依据。方法经脂质体介导将pCDNA 3.1-MKK3(Glu)和pCDNA3.1-MKK3(Ala)重组质粒转染人红白血病细胞株K562,经G418筛选,反转录(RT)-PCR和Western blot鉴定获得p38持续高磷酸化和低磷酸化的稳定细胞株K562-MKK3(Glu)和K562-MKK3(Ala)。通过RT-PCR和联苯胺染色观察不同细胞模型中γ-珠蛋白基因的表达和HbF的合成。采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。结果不同细胞模型中p38mRNA和蛋白水平表达均无明显变化。但与K562亲本细胞、K562-vect和K562-MKK3(Ala)细胞比较,K562-MKK3(Glu)细胞中p38蛋白磷酸化水平、γ-珠蛋白表达均显著增加。联苯胺染色结果显示,K562亲本细胞、K562-vect、K562-MKK3(Ala)、K562-MKK3(Glu)和SB203580处理的K562-MKK3(Glu)细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±1.4)%、(3.7±1.2)%、(2.8±0.9)%、(32.6±5.3)%和(7.8±2.3)%(q=7.56P<0.01)。结论p38MAPKs信号通路直接持续活化可激活γ-珠蛋白基因的转录,并促进HbF的合成。p38磷酸化在K562细胞红系分化中起重要作用。

P38及上游激酶MKK6对热损伤诱导Raw264.7细胞凋亡的调控作用

目的探讨P38及其上游激酶MKK6对热损伤诱导单核细胞系Raw264.7细胞凋亡的调控作用。方法应用脂质体介导的基因转染将P38的显性负效突变体P38(AF)及具有持续活性的组成性活性突变体MKK6b(E)导入Raw264.7细胞,观察P38对细胞凋亡的调控作用。结果荧光染色及Westernblot检测显示,外源基因转染进细胞,并在细胞中得到表达;蛋白激酶活性检测显示,MKK6b(E)转染细胞系P38激酶活性明显升高,而P38(AF)转染细胞系P38激酶未被激活;流式细胞术检测显示,MKK6b(E)转染可明显诱导Raw264.7细胞凋亡,并且MKK6b(E)基因转染促进热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡,而P38(AF)基因转染抑制热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡。结论MKK6-P38信号通路参与介导热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡。

胎儿和出生后机体皮肤内p38MAPK及其MAPKKs基因表达变化的比较性研究

目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)及其上游信号分子MAPKKs(mkk3和mkk6)基因在不同胎龄的胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中表达的变化及其可能的生物学意义。方法:用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织的总RNA,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这3种基因在不同组织中的表达变化规律。结果:p38MAPK,mkk3和mkk6基因在不同发育阶段的皮肤组织中都有表达。在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,这3种基因表达较强,随着胎儿的生长和发育,皮肤组织内这3种基因表达逐渐减弱。在出生后机体的皮肤细胞中,p38MAPK,mkk3和mkk6基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的39.6%,63.5%和54.5%,基因表达明显减弱(P<0.01)。结论:p38MAPK,mkk3和mkk6基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达,显示细胞外信号引起的p38MAPK信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要。在早期妊娠胎儿皮肤中p38MAPK及其上游信号分子MAPKKs基因的高表达可能是胎儿皮肤组织细胞快速增殖,皮肤创面无瘢痕愈合的机制之一,但深层次机制还需进一步研究。

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)p38 MAPK基因克隆及表达分析

应用RACE克隆技术获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)p38 MAPK基因全长c DNA序列,并对该序列进行分析。结果显示,中国对虾p38 MAPK基因全长为1563 bp,开放阅读框长1098 bp,5'非编码区长122 bp,3'非编码区长343 bp,将该基因命名为Fcp38。氨基酸序列分析推测,该基因编码365个氨基酸,分子量为41.77 k Da,理论等电点为5.68。同源性分析表明,Fcp38基因与凡纳滨对虾和日本囊对虾的p38相似性最高,为98%。通过比对发现,该基因除含p38家族特有的标志性Thr-Gly-Tyr双磷酸化位点和底物结合位点Ala-Thr-Arg-Trp,还具有p38家族关键功能位点ED。系统进化分析显示,Fcp38与凡纳滨对虾和日本囊对虾的p38聚为一支。荧光定量PCR结果显示,Fcp38基因在肠、鳃、胃、心脏、淋巴、肝胰腺、肌肉、血细胞中均有表达,以在肌肉中表达量最高。氨氮胁迫后,该基因在中国对虾肌肉、血细胞、鳃、心脏、肠和胃中的相对表达量均显著增加,且有不同的时空表达趋势,表明Fcp38基因可能在中国对虾应对环境胁迫过程中起着重要作用。

p38调节活化蛋白激酶绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达

目的构建在哺乳动物细胞中表达的PRAK绿色荧光蛋白融合表达载体。方法将克隆在pET-14b上的PRAK亚克隆到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,随后转染Hela细胞,并在荧光显微镜下观察。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在Hela细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明EGFP-PRAK主要分布在细胞核中。结论成功构建了PRAK绿色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究PRAK的细胞内定位和移位提供了一个重要的工具。

龙胆泻肝汤治疗带状疱疹的效果及对p38 MAPK基因表达的影响

目的分析龙胆泻肝汤治疗带状疱疹的临床疗效及对患处皮肤p38 MAPK基因表达的影响。方法选取2016年1月~2017年6月广州市红十字会医院皮肤科收治的带状疱疹患者153例,采用随机信封法分为观察组(80例)和对照组(73例)。对照组采用基础治疗联合红蓝光治疗,观察组在对照组基础上联合龙胆泻肝汤治疗。记录两组患者术后水疱消退时间、结痂时间及疼痛缓解时间,并评估临床疗效;检测治疗前及治疗结束后4周患者皮肤中p38 MAPK基因表达水平。结果治疗后,观察组患者水疱消退时间、结痂时间及疼痛缓解时间均显著短于对照组(P<0.05);治疗后,观察组患者治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者患处皮肤p38 MAPK基因相对表达量均显著降低(P<0.05),且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论龙胆泻肝汤联合红蓝光治疗带状疱疹可有效提高临床疗效,改善病灶区p38 MAPK基因水平。