白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病大鼠 p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB信号通路的影响

目的:探讨白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组、白藜芦醇高剂量组,每组10只。模型组及白藜芦醇组采用烟熏联合脂多糖气道内注射法复制COPD大鼠模型,模型构建成功后,白藜芦醇低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予5、15、45 mg/(kg·d)白藜芦醇,正常组及模型组给予等量0.9%氯化钠溶液,连续28 d。HE染色观察肺组织病理形态,分光光度法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-8(IL-8),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)含量,Western blot检测p38MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,白藜芦醇低、中、高剂量组肺泡结构较为完整,有少量炎性细胞浸润,TNF-α、IL-8、MDA、MMP-9含量降低、p38 MAPK、核因子κB抑制因子α(IκB α)及NF-κB p65表达下调,SOD活性及TIMP-1含量升高。结论:白藜芦醇能够缓解COPD大鼠肺损伤,可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

丹参酮ⅡA通过调控p38MAPK/NF-κB信号通路减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤实验研究

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对糖尿病雄性大鼠生殖损伤的影响及其机制。方法:随机选取43只雄性SD大鼠中的35只通过高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病动物模型,并分为模型组、TanⅡA(6 mg/kg)组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂,2 mg/kg]组和TanⅡA+SB203580(6 mg/kg+2 mg/kg)组,每组8只;剩余8只设为正常组。给药治疗4周后,检测空腹血糖(FBG)水平。ELISA法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量。检测精子质量(浓度、存活率和活力),测量睾丸重量并计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织病理学改变。检测睾丸组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8含量。Western blot法检测睾丸组织p38MAPK、p-p38MAPK、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达。结果:与模型组比较,TanⅡA组、SB203580组和TanⅡA+SB203580组FBG水平比较差异无统计学意义(均P>0.05);T、LH、FSH含量和精子浓度、存活率及活力升高(均P<0.05);睾丸重量和睾丸指数升高(均P<0.05);睾丸组织病理学改变明显改善;T-SOD、CAT活力升高且MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量降低(均P<0.05);HMGB1水平和p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(均P<0.05)。TanⅡA+SB203580组以上指标优于TanⅡA组和SB203580组(均P<0.05)。结论:TanⅡA可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,降低氧化应激水平和炎症反应,从而减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤。

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病大鼠的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病(DCM)大鼠的影响。方法取45只Wistar大鼠,随机选择8只作为正常组,其余大鼠采用高糖高脂饮食12周并负荷一次性30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DCM模型。将32只造模成功的大鼠随机分为模型组、藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组和藏红花素+p38 MAPK激动剂组,每组8只。藏红花素组给予50 mg/kg藏红花素腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK抑制剂组给予50 mg/kg藏红花素和5 mg/kg SB203580腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK激动剂组给予50 mg/kg藏红花素和2 mg/kg ANS腹腔注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,均1次/d。连续注射12周后,心脏超声检测大鼠心功能指标[左心室收缩末期压(LVESD)、左心室舒张末期压(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)],ELISA法检测血清心肌酶[谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]和炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,苏木精-伊红、马森染色观察心肌组织病变和纤维化情况,RT-PCR法、免疫组织化学法检测心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Col-I)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组大鼠LVESD、LVEDD及血清AST、LDH、CK-MB、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),LVFS明显升高(P<0.05);心肌组织病变和纤维化情况均明显改善,心肌组织损伤评分和胶原容积分数均明显降低(P均<0.05);心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、TGF-β1、Col-I mRNA相对表达量和蛋白表达积分吸光度均明显降低(P均<0.05)。与藏红花素组比较,SB203580可显著增强藏红花素对DCM大鼠心功能指标、心肌酶和炎症因子水平、心肌组织病变和纤维化情况、p38 MAPK/NF-κB信号通路相关因子mRNA和蛋白表达的调控作用,ANS则明显逆转藏红花素对DCM大鼠的上述作用。结论藏红花素可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路减轻炎症反应和组织纤维化,从而对DCM大鼠起到保护作用。

紫草素对过敏性紫癜性肾炎小鼠肾功能、炎症及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨紫草素对过敏性紫癜性肾炎(HSPN)小鼠肾功能、炎症及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法:建立HSPN小鼠模型,将造模成功小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(给予环磷酰胺22 mg/kg)、紫草素低剂量组(给予紫草素5 mg/kg)、紫草素高剂量组(给予紫草素10 mg/kg),每组12只;另外取12只小鼠不进行处理,正常饲养作为对照组。各组小鼠给予相应药物干预28 d。全自动生化分析仪和酶联免疫吸附法分别检测小鼠肾功能和血清炎症指标;HE染色观察肾脏组织病理学变化;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测肾脏组织中p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达。结果:对照组小鼠肾脏组织肾小管及肾小球结构清晰,无炎性细胞浸润、系膜增生情况;与对照组相比,模型组小鼠出现肾脏组织炎性细胞浸润、系膜增生现象严重,肾小管萎缩,肾小球血管网结构模糊、血管充血等病理损伤,血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿液中尿蛋白(24 h UP)、血清白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肾脏组织p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,环磷酰胺组、紫草素低、高剂量组小鼠肾脏组织炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变性及肿胀等现象得到改善,SCr、BUN、24 h UP、血清IL-6、IL-1β、TNF-α、肾脏组织p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);紫草素高剂量组上述指标改善效果优于紫草素低剂量组(P<0.05)。结论:紫草素可改善HSPN小鼠肾功能和炎症反应,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的激活有关。

川芎多糖调节p38 MAPK/NF-κB信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨川芎多糖(LCPS)调节p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响。方法:将144只大鼠数字编码后按照随机数字表法分为假手术组、模型组、盐酸维拉帕米(VH)组(20 mg/kg)和LCPS低剂量组(50 mg/kg)、LCPS中剂量组(100 mg/kg)、LCPS高剂量组(200 mg/kg),每组24只大鼠。给药预处理14 d后,采用阻断冠状动脉左前降支30 min制备MIRI大鼠模型。再灌注2 h后,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法、心脏超声法、苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌梗死面积、心功能指标[左室舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩末期压力(LVESP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))]和心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清心肌酶和心肌组织炎性因子水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平、炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,VH组、LCPS中剂量组和LCPS高剂量组心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶水平、炎性因子水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且LCPS上述效应呈一定的剂量依赖性。除+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、IL-1β外,LCPS高剂量组对其他指标的影响优于VH组(P<0.05)。结论:LCPS对大鼠MIRI和心功能有保护作用,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路及其介导的炎症反应有关。

槲皮素调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对大鼠分泌性中耳炎的作用机制

目的 探究槲皮素(quercetin, Que)对大鼠分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)的作用及机制。方法 选取雄性SD大鼠48只,随机性分为对照组(Control)、模型组(Model)、Que组(100 mg·kg^(-1))、Que+p38 MAPK激动剂组(100 mg·kg^(-1)Que+2 mg·kg^(-1)Anisomycin),每组各12只。除Control组外,其余各组大鼠均采取腹腔注射卵清蛋白复制分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠进行相应干预21 d。给药干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠中耳组织形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IFN-γ、IL-4水平;实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路相关mRNA及蛋白表达变化。结果 与Control组相比,Model组大鼠表现中耳内黏膜层增厚,伴有大量炎性细胞浸润,血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IL-4增加,IFN-γ降低(P <0.01),中耳黏膜组织p-p38MAPK/MAPK、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达水平均明显升高(P <0.01)。与model组相比,Que能够明显改善中耳内黏膜增厚,抑制炎性细胞浸润,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、IL-4及中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路mRNA和蛋白表达,升高IFN-γ(P <0.05或P <0.01)。与Que组相比,Anisomycin能够逆转Que对SOM大鼠的保护作用。结论 Que能够有效改善SOM发生、发展,其机制与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路介导的炎性反应相关。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子(NF)-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制。方法选取SPF级SD大鼠50只,10只为对照组,其余40只建立功能性消化不良模型,其中30只随机分为模型组、药物对照组、针刺组各10只。对照组、模型组不接受治疗,药物对照组采用莫沙必利治疗,针刺组选取大鼠太冲穴、足三里穴针刺治疗。观察各组大鼠一般情况、病理组织学、饮水量、进食量、胃肠动力、炎症因子、线粒体自噬、线粒体膜电位变化比例、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、p38 MAPK/NF-κB通路情况。结果与对照组相比,模型组、药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP明显下降,白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞色素(CYT)-C、微管结合蛋白1A/1B-轻链(LC3)B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05);与药物对照组相比,针刺组饮水量、进食量、ATP明显增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05)。结论采用针刺对功能性消化不良大鼠进行干预,可介导线粒体自噬,使体内胃肠动力增加,改善大鼠症状,其作用机制可能与调控p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

P38 MAPK/NF-κB/NLRP3对脑卒中大鼠模型对神经元的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信息通路(NLRP3)对脑卒中大鼠模型脑神经元的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、p38 MAPK阻断剂(SB203580)组,分别干预2w,检测各组大鼠脑梗死体积百分比,Zea Longa分值,海马组织神经元的损伤和凋亡,以及海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)和IL-1β的水平,p38 MAPK(p-p38 MAPK)中各主要蛋白表达。结果模型组脑梗死体积百分比相较于假手术组明显升高(P<0.05),p38 MAPK阻断剂组脑梗死体积百分比较模型组减少(P<0.05);模型组Zea Longa评分相较于假手术组明显升高,(P<0.05),p38 MAPK阻断剂组Zea Longa评分较模型组减少(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组则呈明显的下降表现。模型组海马组织IL-6、L-1β和TNF-α水平相较于假手术组均明显升高(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组呈现明显的下降(P<0.05)。模型组在p38 MAPK/NF-κB/NLRP3蛋白的表达上,相较于假手术组呈明显升高(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组呈明显的下降(P<0.05)。结论阻断p38 MAPK可抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路,促使炎症反应进入受抑状态,弱化神经元凋亡表现,来发挥对缺血性脑卒中模型大鼠脑损伤的保护效果。

菊苣酸调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元凋亡及炎症反应的影响

目的分析菊苣酸(CA)对缺血性脑卒中大鼠神经元凋亡、炎症反应的影响及其作用机制。方法采用改良线栓法制备缺血性脑卒中大鼠模型。将大鼠分为假手术组、模型组、CA组(10 mg/kg)、CA+p38 MAPK激活剂(Anisomycin)组(10 mg/kg CA+2 mg/kg Anisomycin),各组进行相应干预2 w,对大鼠进行Zea Longa评分和检测脑梗死体积百分比,尼氏(Nissl)染色检测大鼠海马组织神经元损伤,TUNEL法检测大鼠海马组织神经元凋亡,酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经元形态不规则、染色较浅,尼氏体数目明显减少,Zea Longa评分、脑梗死体积百分比、神经元细胞凋亡率、海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,CA组大鼠神经元形态明显改善,形态较饱满,染色均匀,尼氏体密集,Zea Longa评分、脑梗死体积百分比、神经元细胞凋亡率、海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3蛋白表达水平显著降低(P<0.05);Anisomycin可逆转CA对缺血性脑卒中大鼠的上述改善作用。结论CA可通过抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制炎症反应,减少神经元凋亡,缓解缺血性脑卒中引起的大鼠脑损伤。

盐酸巴马汀抑制NF-κB/p38 MAPK信号通路及NLRP3炎症小体抗炎机制研究

目的观察黄连异喹啉生物碱盐酸巴马汀在人急性单核白血病细胞(THP-1)中的抗炎活性,研究其对NF-κB/p38 MAPK信号通路以及NLRP3炎症小体的调控作用机制。方法通过脂多糖(LPS)刺激THP-1细胞建立初筛模型,ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)水平,初筛黄连中的小檗碱、黄连碱、药根碱、盐酸巴马汀和表小檗碱5种异喹啉生物碱对炎症细胞因子IL-6释放的抑制活性;采用MTT法测定盐酸巴马汀的作用浓度;Western Blot法测定盐酸巴马汀对LPS联合三磷酸腺苷(ATP)刺激THP-1细胞炎症模型中p-IκBα、IκBα、p-IKK、IKK、p-p38、p-38、p-JNK、JNK蛋白表达的影响,同时测定NLRP3、ASC和Caspase-1 p20蛋白的表达,并用Co-IP检测NLRP3炎症小体中pro-caspase-1和ASC的相互作用;ELISA法测定细胞因子IL^-1β和IL^-18的水平。结果与空白对照组比较,模型组IL-6含量升高(P<0.01);与模型组比较,黄连碱组、小檗碱组和盐酸巴马汀组IL-6含量明显降低(P<0.01),由于黄连碱和小檗碱已被大量研究,故选取盐酸巴马汀进行机制研究;盐酸巴马汀在1~60μmol·L^-1浓度范围对THP-1细胞生长没有明显影响(P>0.05),选取1、10、30μmol·L^-1作为盐酸巴马汀低,中,高剂量。与空白对照组比较,模型组p-IκBα、p-IKK、p-p38、p-JNK、NLRP3、Caspase-1 p20蛋白表达明显升高(P<0.01),细胞因子IL^-1β和IL^-18分泌增加(P<0.01);与模型组比较,盐酸巴马汀中剂量组的p-IκBα、p-p38蛋白和盐酸巴马汀高剂量组的p-p38蛋白表达减少(P<0.05),盐酸巴马汀高剂量组p-IκBα、p-JNK、NLRP3和Caspase-1 p20蛋白的表达明显降低(P<0.01),pro-Caspase-1和ASC蛋白的相互作用减弱(P<0.01),细胞因子IL^-1β和IL^-18释放减少(P<0.01)。结论盐酸巴马汀降低THP-1细胞炎症模型中p-IκBα、p-p38、p-JNK、NLRP3和Caspase-1 p20蛋白的表达,干扰pro-caspase-1和ASC的绑定,减少IL^-1β和IL^-18的释放,说明盐酸巴马汀的抗炎作用机制与NF-κB/p38 MAPK信号通路和NLRP3炎症小体信号通路相关。

p38丝裂素活化蛋白激酶/核转录因子-κB转导通路在脓毒症所致内皮细胞凝血功能障碍中的作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38MAPK/NF-κB）是否参与了脓毒症所致的内皮细胞凝血功能障碍.方法 选取22例脓毒症患者血浆刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以8名健康人血浆刺激HUVEC 60 min作为阴性对照,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为阳性对照.用酶联免疫吸附法（ELISA）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）、免疫荧光法检测p38MAPK和NF-κB的磷酸化.结果 脓毒症患者血浆TNF-α水平（ng/L）明显高于健康对照者（155.68±89.74比5.00±0.47,P〈0.01）.与20%的健康人血浆比较,用20%的脓毒症患者血浆刺激HUVEC后,组织因子（TF,μg/L）于180 min时达高峰（5.87±0.14比1.25±0.11,P〈0.01）,血管性血友病因子（vWF,μg/L）于120 min达到高峰（9.59±0.07比3.59±0.06,P〈0.01）并随后下降.用20%的脓毒症患者血浆刺激HUVEC后p38MAPK和NF-κB发生活化,p38MAPK的活化早于NF-κB（2 min比5 min）;加入p38MAPK特异性抑制剂SB239063后,NF-κB的磷酸化和核移位受阻.结论 p38MAPK/NF-κB转导通路在脓毒症引起的凝血功能障碍中具有一定的作用.

益气化瘀解毒方对急性呼吸窘迫综合征大鼠NF-κB/p38MAPK通路的影响

目的观察益气化瘀解毒方对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的保护作用并探讨其作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为空白组、模型组及益气化瘀解毒方低、中、高剂量组5组,每组6只。尾静脉注射LPS建立ARDS模型。治疗组益气化瘀解毒方灌胃,造模后16小时处死大鼠收集标本,测定大鼠肺系数、肺通透指数、核转录因子-κB p50、IκBα、p38的蛋白表达及光镜下观察肺组织病理学改变。结果益气化瘀解毒方减少肺损伤大鼠肺泡结构破坏、肺水肿及炎性细胞浸润,降低肺系数(P<0.05)与肺通透指数(P<0.01),并在一定程度减少核转录因子-κB p50、丝裂原活化蛋白激酶p38,增加抑制因子IκBα的蛋白表达。结论益气化瘀解毒方对LPS诱导的ARDS有一定的保护作用,其机制与抑制NF-κB/p38MAPK炎性反应信号通路有关。

二甲双胍对糖基化终末产物诱导牙周膜成纤维细胞凋亡及p38 MAPK/NF-κB通路的影响

目的探讨二甲双胍对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导牙周膜成纤维细胞(PDLCs)凋亡及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。方法体外培养人PDLCs细胞,分别加入0、100、200、300μg/mL的AGEs培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测不同浓度、不同时间点的细胞增殖情况,筛选AGEs的最佳作用浓度和作用时间,分别为300μg/mL和48 h。收集细胞,设对照组、AGEs组及2、4、8 mmol/L二甲双胍组,对照组仅加入培养基,AGEs组加入终浓度为300μg/mL的AGEs,2、4、8 mmol/L二甲双胍组加入终浓度为300μg/mL的AGEs及终浓度分别为2、4、8 mmol/L的二甲双胍,培养48 h。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测细胞p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白p-p38 MAPK、NF-κB的相对表达量。结果与对照组相比,AGEs组细胞OD值降低,细胞凋亡率升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞OD值升高,细胞凋亡率降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组细胞OD值高于、细胞凋亡率低于低浓度组(P均<0.05)。与对照组相比,AGEs组细胞中SOD水平降低,MDA水平升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞中SOD水平升高,MDA水平降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组SOD高于、MDA低于低浓度组(P均<0.05)。与对照组相比,AGEs组细胞上清液中IL-6、TNF-α水平升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞上清液中IL-6、TNF-α水平降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组IL-6、TNF-α水平低于低浓度组(P均<0.05)。与对照组相比,AGEs组细胞p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达低于低浓度组(P均<0.05)。结论二甲双胍对AGEs诱导的氧化应激反应、p38 MAPK/NF-κB通路激活、炎症反应均具有抑制作用,可减少细胞凋亡并促进细胞增殖。

lncRNA Neat1介导p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路调控白蛋白诱导HK-2细胞凋亡

目的 探讨长链非编码RNA核富集丰富转录本1(lncRNA Neat 1)通过miR-204-3p介导p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路调控白蛋白诱导HK-2细胞凋亡的机制。方法 将HK-2细胞分为对照组(正常培养)、模型组(白蛋白损伤模型)、p38抑制药组(10μmol·L^(-1)p38抑制药SB203580处理后造模)、OV-Neat 1组(转染Neat 1过表达质粒后造模)和OV-Neat 1+p38抑制药组(转染Neat 1过表达质粒,再用p38抑制药SB203580处理后造模)。用细胞计数法-8(CCK-8)检测细胞增殖活力,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-204-3p、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达水平;用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组、p38抑制药组、OV-Neat 1组和OV-Neat 1+p38抑制药组的细胞增殖活性分别为0.95±0.02、0.70±0.01、0.78±0.02、0.63±0.01和0.75±0.02,细胞凋亡率分别为(4.38±1.03)%、(23.79±0.97)%、(16.79±0.55)%、(31.26±0.79)%和(20.75±1.44)%,miR-204-3p表达水平分别为1.00±0.02、0.08±0.00、0.42±0.03、0.04±0.00和0.16±0.01,Bax mRNA表达水平分别为1.00±0.05、7.57±0.21、1.91±0.10、18.82±0.88和3.21±0.26,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1.00±0.04、0.10±0.01、0.58±0.06、0.04±0.00和0.30±0.04,Bax蛋白表达水平分别为0.18±0.02、0.64±0.00、0.25±0.03、0.85±0.01和0.29±0.01,Bcl-2蛋白表达水平分别为0.98±0.01、0.23±0.00、0.48±0.02、0.17±0.01和0.36±0.02。模型组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);OV-Neat 1组和p38抑制药组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);OV-Neat 1+p38抑制药组的上述指标与OV-Neat 1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 lncRNA Neat 1过表达能激活p38MAPK信号通路,促进白蛋白诱导的HK-2细胞凋亡,抑制miR-204表达。

胸腔热灌注对兔急性肺损伤中Toll样受体4/核转录因子/P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的观察胸腔热灌注(IHP)对兔急性肺损伤(ALI)中Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)炎症信号通路的影响。方法新西兰大白兔31只,按随机数字表法分为4组,假撞击组(A组,7只)、胸部撞击组(B组,8只)、撞击+35℃常温灌注组(C组,8只)和撞击+43℃度热灌注组(D组,8只),垂直撞击兔右侧胸部,建立ALI模型行IHP,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织中热休克蛋白70(HSP70)及肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。荧光定量PCR技术检测肺组织中NF-κB、p38MAPK、TLR4。蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织p-ATF2、磷酸化蛋白p38(p-p38)蛋白表达情况,并进行组间比较,组间比较采用t检验。结果IHP12 h后,D组的HSP70(17.40±2.30)高于A组(5.30±2.40)、B组(6.10±2.10)、C组(6.20±2.60),差异有统计学意义(t=9.126、10.262、9.963,P<0.05)。D组NF-κB的mRNA(2.74±0.10)高于A组(0.73±0.13)、B组(1.85±0.07)、C组(1.41±0.28),差异有统计学意义(t=33.823、20.623、12.652,P<0.05)。D组p38MAPK的mRNA(2.49±0.23)高于A组(0.39±0.12)、B组(1.43±0.16)、C组(1.25±0.08),差异有统计学意义(t=21.648、10.701、14.403,P<0.05)。D组TLR4的mRNA(3.41±0.32)高于A组(0.56±0.18)、B组(2.32±0.18)、C组(1.73±0.11),差异有统计学意义(t=22.347、8.397、14.043,P<0.05)。D组磷酸化活化转录因子2(p-ATF2)的蛋白灰度值(1.04±0.12)高于A组(0.48±0.11)、C组(0.65±0.08),差异有统计学意义(t=9.369、7.649,P<0.05)。D组p-p38的蛋白灰度值(0.79±0.13)高于A组(0.37±0.09)、C组(0.53±0.07),差异有统计学意义(t=7.162、4.981,P<0.05)。D组的TNF-α(50.30±7.70)低于B组(94.40±5.80)和C组(79.60±8.40),差异有统计学意义(t=-12.939、-7.273,P<0.05)。D组的IL-1(63.40±9.70)低于B组(135.70±6.80)和C组(103.20±8.40),差异有统计学意义(t=-17.263、-8.773,P<0.05)。D组的IL-6(34.20±3.70)低于B组(78.40±2.90)和C组(56.70±2.80),差异有统计学意义(t=-26.593、-13.715,P<0.05)。结论胸腔热灌注通过TLR4/NF-κB/p38MAPK信号通路的高表达,对炎症反应具有抑制作用。

薯蓣皂苷通过p38MAPK/NF-κB通路对支气管哮喘幼鼠气道炎症及气道重塑的作用机制研究

目的观察薯蓣皂苷(Dio)对支气管哮喘(BA)幼鼠气道炎症及气道重塑的作用,并探讨可能机制。方法取40只BALB/c幼鼠,随机选取10只设为Control组,其余幼鼠建立BA模型,成功30只,随机分为BA组、Dio组、Dio联合anisomycin组,各10只。Dio组灌胃Dio 80 mg/kg,Dio联合anisomycin灌胃Dio 80 mg/kg后腹腔注射anisomycin 2 mg/kg,Control组、BA组灌胃、腹腔注射等体积生理盐水。每天1次,持续2周。检测肺功能指标;检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、核转录因子-κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2蛋白表达。结果与BA组比较,Dio组肺容积(LV)、每分钟静息通气量(VE)增加,IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05);与Dio组比较,Dio联合anisomycin组LV、VE减少,IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05);与BA组比较,Dio组p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2降低(P<0.05);与Dio组比较,Dio联合anisomycin组p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2升高(P<0.05)。结论Dio可减轻BA幼鼠气道炎症反应,抑制气道重塑,可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响及作用机制

目的:研究淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响并探讨其可能的作用机制。方法:将游泳训练筛选后的ICR雄性小鼠随机分为正常组、模型组、维生素C组和淫羊藿多糖低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外各组通过负重游泳训练建立运动性疲劳模型。负重游泳2周后,淫羊藿多糖低、中、高剂量组分别给予100、200、400 mg·kg^(-1)淫羊藿多糖灌胃,维生素C组给予200 mg·kg^(-1)维生素C灌胃,正常组和模型组灌服等量的生理盐水,连续2周。实验结束后,纪录各组小鼠体质量、末次力竭游泳时间;试剂盒检测各组小鼠血清尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,骨骼肌中肌糖原(MG)、肝脏中肝糖原(HG)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察肌组织病理形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化(p)-p38 MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达;免疫荧光法(IF)检测各组小鼠骨骼肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量下降、游泳力竭时间降低(P<0.01),血清中疲劳代谢产物LA、LDH、BUN和脂质过氧化产物MDA含量显著升高(P<0.01),MG、HG、SOD、GSH-Px水平下降(P<0.01),骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK1/2、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,淫羊藿多糖低、中、高剂量组和维生素C组小鼠体质量、游泳力竭时间增加(P<0.05,P<0.01),LA、LDH、BUN、MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01),MG、HG、SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05,P<0.01),骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿多糖可通过抑制p38 MARK/NF-κB信号通路,从而减少代谢产物的堆积、提高抗氧化酶活性、增加机体糖原含量、减轻骨骼肌炎症,起到缓解运动性疲劳的作用。

基于p38MAPK/NF-kB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组,剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠,造模14 d后进行旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(PMT)检测各组大鼠焦虑样行为,筛选造模成功的大鼠60只,随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(6、12、24 g·kg^(-1))和地西泮组(1 mg·kg^(-1)),每组12只,连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮,给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、钙结合蛋白(Iba-1)mRNA的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平;免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏,OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加(P<0.01),PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少(P<0.01),下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高(P<0.01),血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达显著减低(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常,OFT边缘运动距离和时间明显减少(P<0.05,P<0.01),PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加(P<0.05,P<0.01),下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平,发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。

骨关节炎患者膝关节软骨和滑膜中p38MAPK、NF-κB的表达及其意义

①目的探讨骨关节炎(Osteoarthritis,OA)中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达及其意义。②方法采用免疫组织化学技术检测60例OA患者及20例正常对照组膝关节软骨与滑膜中磷酸化p38(P-p38)、NF-κB p65的表达,并进行相关性分析。③结果 P-p38、NF-κBp65蛋白在实验组阳性表达的积分光密度(IOD)值均显著高于正常对照组(P<0.01),实验组P-p38及NF-κB p65蛋白表达成正相关(r=0.426,P<0.01)。④结论 p38MAPK及NF-κB信号转导通路在OA关节软骨和滑膜细胞中被激活,P-p38的高表达可能促进了NF-κB的表达,二者对OA的发生发展起重要作用。

泼尼松对阿霉素肾病大鼠肾组织FAK、RANK、RANKL、p38MAPK、NF-κB表达的影响

目的:观察泼尼松对阿霉素肾病大鼠粘着斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)、核因子-κB受体活化因子(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B,RANK)、核因子-κB受体活化因子配体(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand,RANKL)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)、核转录因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法:利用随机数字表法把SD大鼠分为正常组(尾静脉一次性注射等量生理盐水)、模型组(注射盐酸阿霉素6.5 mg/kg造模)、治疗组(成功造模后以泼尼松每天10 mg/kg灌胃),在实验不同的时间点测定24 h尿蛋白定量,观察肾组织电镜结果,用电泳迁移率变动分析(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)检测NF-κB含量,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Fluorescence Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测FAK、p38MAPK、RANK、RANKL、Nephrin表达水平的变化,用Western blot检测肾组织FAK、RANK、RANKL、Nephrin蛋白以及p38MAPK蛋白和磷酸化蛋白。结果:①与正常组相比,模型组尿蛋白水平升高(P<0.01);用药后的治疗组尿蛋白水平下降(P<0.01);②模型组电镜下可见足细胞足突广泛融合、肿胀或增宽,治疗组明显减轻;③模型组PCR结果示FAK、p38MAPK、RANKL、RANK mRNA表达较正常组升高(P<0.01),治疗组FAK、p38MAPK、RANKL、RANK mRNA表达较模型组降低(P<0.01);④与正常组相比,模型组RANK、RANKL蛋白以及FAK、p38MAPK总蛋白和磷酸化表达升高(P<0.01),Nephrin蛋白表达减少(P<0.01);与模型组相比,治疗组RANK、RANKL蛋白以及FAK、p38MAPK总蛋白和磷酸化表达降低(P<0.05),Nephrin蛋白表达升高(P<0.05);⑤EMSA检测结果显示,与正常组相比,模型组NF-κB表达增多(P<0.01);与模型组相比,治疗组NF-κB表达水平降低(P<0.01)。结论:阿霉素肾病肾组织中有RANK/RANKL的表达,经激素治疗,FAK-p38MAPK/RANKL-RANK-p38MAPK的通路被抑制,使NF-κB入核减少,炎症反应被控制,蛋白尿减少。