基于p38丝裂原活化蛋白激酶通路探讨瑶医除闷汤药浴治疗膝骨关节炎大鼠的作用机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路探讨瑶医除闷汤药浴治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的效果与作用机制。方法在60只8周龄雄性SPF级SD大鼠(体重200~220 g)中随机选取10只作为空白组,在实验第1、4天,于空白组右膝关节腔内注射0.1 ml生理盐水,其余大鼠注射0.1 mlⅡ型胶原蛋白酶与弗氏完全佐剂的混合乳剂(质量浓度为0.5 mg/ml)。第7天根据大鼠膝关节情况评估造模结果,将50只造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、双氯芬酸钠组及除闷汤高、中、低剂量组,每组10只。实验第8天,对除闷汤高、中、低剂量组进行药浴干预(浓度分别为49.00、24.50、12.25 g/L),模型组进行温水泡浴,双氯芬酸钠组于造模部位予0.01 g的1%双氯芬酸钠凝胶,空白组常规饲养,连续干预4周,干预期间观察各组一般情况。干预后观察各组膝关节解剖学情况,测量膝关节直径,采用苏木精-伊红(HE)染色观察膝关节软骨组织形态学改变。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10含量;采用免疫组织化学染色检测各组软骨组织中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达水平。结果药物干预期间,空白组一般情况正常;模型组强迫运动时跛行,伴膝关节屈伸功能障碍;除闷汤各剂量组膝关节屈伸功能与步态逐渐恢复,双足跛行状态减少。干预后,空白组膝关节解剖可见滑膜平滑半透明,软骨透明光滑,关节面完整,HE染色可见软骨细胞排列规则清晰;模型组膝关节解剖可见滑膜增厚糜烂,软骨表面粗糙磨损,色泽灰暗,HE染色可见软骨基质减少甚至消失,软骨细胞大量减少,形态不规则;除闷汤各剂量组膝关节解剖及HE染色可见膝关节软骨有不同程度改善。模型组膝关节直径大于空白组,血清IL-1β、IL-6及软骨p38MAPK、p-p38MAPK、MMP-13表达均高于空白组,血清IL-10低于对照组(P<0.05)。除闷汤各剂量组膝关节直径小于模型组,血清IL-10高于模型组,软骨p-p38MAPK、MMP-13表达均低于模型组(P<0.05)。除闷汤高、中剂量组血清IL-1β、IL-6及软骨p38MAPK低于模型组和除闷汤低剂量组,IL-10高于除闷汤低剂量组(P<0.05)。除闷汤高剂量组膝关节直径小于除闷汤低、中剂量组,软骨p-p38MAPK、MMP-13表达低于除闷汤低剂量组,血清IL-10高于除闷汤低、中剂量组,软骨MMP-13表达低于除闷汤中剂量组(P<0.05)。结论瑶医除闷汤可能通过靶向抑制p38MAPK通路表达,减轻KOA大鼠的炎症反应,改善软骨退变。

沐舒坦对大鼠机械通气所致肺损伤时p38丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的评价沐舒坦预处理对大鼠机械通气所致肺损伤时p38丝裂原活化蛋白激酶通路（p38MAPK）的影响。方法清洁级健康雄性成年SD大鼠30只，体质量280～320g。采用随机数字表法分为三组（n=10）：对照组（C组）、机械通气肺损伤组（VILI组）和机械通气肺损伤＋沐舒坦预处理组（AMB组）。采用潮气量40mL／kg机械通气4h的方法制备大鼠机械通气肺损伤模型。AMB组予以沐舒坦50mg／kg腹腔注射预处理3d，C组和VILI组给予等容量生理盐水腹腔注射。通气结束后观测各组动脉血氧分压与肺组织病理学结果并进行肺损伤评分，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），测定BALF总蛋白、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）；取肺组织称质量，计算肺湿／干质量比（W／D），检测磷酸化P—p38MAPK、IL-1βmRNA、TNF—dmRNA、IL-6mRNA和ICAM-1mRNA表达水平。结果与C组比较，VILI组和AMB组肺动脉血氧分压（PaO2）明显降低，W／D、肺损伤评分、BALF总蛋白、IL-1β、TNF—α、IL-6及ICAM-1的浓度，肺组织P—p38 MAPK与IL-1β、TNF—α、IL-6和ICAM-1的mRNA表达水平升高（P〈0．05）；与VILI组比较，AMB组PaO2明显升高，肺W／D、肺损伤评分、BALF总蛋白、IL-1β、TNF—α、IL-6及ICAM-1的浓度，肺组织P—p38MAPK与IL-1β、TNF—α、IL-6和ICAM-1的mRNA表达水平降低（P〈0．05）。结论沐舒坦可减轻大鼠机械通气肺损伤，其机制可能与抑制p38MAPK有关。

基于p38丝裂原活化蛋白激酶通路的胰高血糖素样肽-1对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的影响及机制。方法将雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、GLP-1组和p38MAPK抑制剂组,每组12只。模型组、GLP-1组和p38MAPK抑制剂组通过大脑中动脉栓塞及再灌注建立脑I/R损伤模型,GLP-1组给予利拉鲁肽(70μg/kg)、p38MAPK抑制剂组给予p38MAPK抑制剂SB202190(10μmol/L、5μl)干预。比较四组大鼠的脑梗死体积、水迷宫行为参数及梗死脑组织细胞凋亡率、氧化应激指标、炎症细胞因子、p38MAPK通路分子的差异。结果与模型组比较,GLP-1组和p38MAPK抑制剂组大鼠的脑梗死体积明显降低,逃避潜伏期明显缩短、穿越平台次数明显增多,梗死脑组织中的细胞凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38水平显著减少,SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)水平明显增加(均P<0.05),p-ERK1/2、p-JNK的表达水平无明显变化。与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长、穿越平台次数明显减少,梗死脑组织的细胞凋亡率及MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38水平明显增高,SOD、GPx水平明显减少(均P<0.05),p-ERK1/2、p-JNK的表达水平无明显变化。结论GLP-1能够通过抑制p38介导的氧化应激及炎症反应减轻大鼠脑I/R损伤。

辛伐他汀抑制高糖损伤乳鼠心肌细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-p38丝裂原活化蛋白激酶通路抑制心肌细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对高糖损伤乳鼠心肌细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、培养液中半胱天冬氨酸蛋白激酶-3(Caspase-3)的干预作用以及对乳鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:原代培养新生1~3d SD乳鼠心肌细胞72 h后,随机分为五组并加入相应的处理药物,即对照组、高糖组和三组不同浓度的辛伐他汀干预组即分别为高糖+10-7M辛伐他汀组、高糖+10-6M辛伐他汀组、高糖+10-5M辛伐他汀组。培养72 h后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组心肌细胞活力,化学比色法测定心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的表达,通过Western blot测定细胞内p38MAPK蛋白表达,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-Elisa)测定各组心肌细胞培养液中Caspase-3浓度,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡情况。结果:高糖组、高糖+10-7M辛伐他汀组和高糖+10-6M辛伐他汀组心肌细胞的细胞活力、SOD活力均较对照组明显降低,LDH活力均较对照组明显升高(P均<0.01);三组不同浓度的辛伐他汀干预组心肌细胞的细胞活力、SOD活力均较高糖组明显升高,LDH活力较高糖组明显降低,且呈浓度依赖性(P均<0.05)。高糖组、高糖+10-7M辛伐他汀组、高糖+10-6M辛伐他汀组心肌细胞培养液Caspase-3浓度较对照组明显升高,其NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的相对表达水平以及p38MAPK蛋白表达水平均较对照组明显升高,TUNEL阳性细胞数较对照组升高;三组不同浓度的辛伐他汀干预组心肌细胞培养液Caspase-3浓度较高糖组呈浓度依赖性地降低,其NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的相对表达水平以及p38MAPK蛋白表达水平均较高糖组明显降低,且呈浓度依赖性(P均<0.05),TUNEL阳性细胞数呈浓度依赖性地降低。结论:辛伐他汀通过抑制NADPH氧化酶-p38MAPK信号通路抑制心肌细胞凋亡,从而对高浓度葡萄糖诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用。

p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一。p38MAPK属于MAPK的一个亚族,是广泛存在于细胞浆内的含有丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白质激酶。它通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平,参与多种胞内信息传递过程,能对广泛的细胞外刺激发生反应,介导细胞生长、发育、分化及死亡全过程。近年研究发现,p38MAPK在许多疾病的发病过程中具有重要作用。

晚期氧化蛋白产物通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路促进ECV304细胞基质细胞衍生因子1α的表达

目的观察晚期氧化蛋白产物对ECV304细胞基质细胞衍生因子1α表达的影响,并探讨其作用机制。方法牛血清白蛋白与次氯酸钠等量混合体外制备晚期氧化蛋白产物,RT-PCR法检测ECV304细胞基质细胞衍生因子1αmRNA的表达,Western Blotting法测定基质细胞衍生因子1α以及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白水平,以p38MAPK特异性阻断剂SB203580进行阻断实验,酶联免疫吸附法测定上清液中基质细胞衍生因子1α浓度。结果与对照组比较,200μmol/L晚期氧化蛋白产物处理ECV304细胞2h后基质细胞衍生因子1αmRNA及蛋白表达量显著升高(P均<0.05);基质细胞衍生因子1αmRNA表达量6h达高峰(P<0.01),之后逐渐下降,24h时与对照组比较差异无显著性;随时间的推移基质细胞衍生因子1α蛋白表达量逐渐升高,24h表达量最高(P<0.01)。晚期氧化蛋白产物作用15min后p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平明显增强(P<0.05),不同浓度(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)SB203580降低了晚期氧化蛋白产物刺激下基质细胞衍生因子1α蛋白的表达(分别为618.85±60.12、500.98±69.47和359.97±59.81,P<0.05或0.01)。结论晚期氧化蛋白产物可诱导ECV304细胞基质细胞衍生因子1α表达,p38MAPK通路是介导这一作用的重要途径之一。

p38丝裂原活化蛋白激酶通路在非对称性二甲基精氨酸诱导内皮细胞通透性增高中的作用

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对单层内皮细胞通透性的影响,以及氧化应激、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在此过程中的作用。方法利用Transwell小室建立单层内皮细胞屏障结构,设立实验组和对照组,实验组经浓度25、50、100、200μmol/L ADMA作用24 h和100μmol/L ADMA分别刺激细胞4、8、16、24 h,或分别经烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂、p38 MAPK抑制剂预处理细胞后再加入ADMA刺激。随后用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的右旋糖酐漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值,并用免疫荧光染色显示细胞骨架及细胞间连接的形态学改变。结果 ADMA呈剂量及时间依赖性的增加单层内皮细胞的通透性,同时促进内皮细胞中应力纤维的形成并破坏细胞间连接。NADPH氧化酶抑制剂和p38 MAPK抑制剂均可对抗ADMA的上述作用。结论 ADMA通过引起氧化应激,激活p38 MAPK通路,改变细胞骨架及细胞间连接的结构,使单层内皮细胞通透性增高。

牙周炎与p38丝裂原活化蛋白激酶通路的研究与进展

背景:牙周组织受到细菌等外源性物质刺激后,一系列的炎症信号通路被激活,后续炎症因子的表达则跟随增强,而炎症对于牙周组织的修复和再生都有密切的关系。目的:从牙周病炎症免疫反应和牙周炎密切相关炎症因子与p38丝裂原活化蛋白激酶通路的相关性进行阐述,为日后牙周炎的治疗提供新的思路及方法。方法:检索中国生物医学文献数据库、中国知识资源总库系列数据库、中文科技期刊数据库、Pub Med数据库在1990年1月至2016年1月期间收录的牙周炎与p38通路的相关文章,并分析其对牙周炎修复和再生的研究进展。结果与结论:文章最终纳入36篇文献。调节炎症和相关信号传导通路如p38丝裂原活化蛋白激酶及后续炎症递质的表达,可一定程度的控制疾病所引发过度宿主炎症和免疫反应,可能对牙周炎的发生发展有一定的影响作用,但这需要更多的研究来证实。p38丝裂原活化蛋白激酶通路的调节对牙周病治疗研究仍具有重要意义,希望更多的研究结果可以为临床医生诊治牙周炎提供新的思路及依据。

盐酸氨溴索对AECOPD患者p38丝裂原活化蛋白激酶通路的影响研究

目的探讨盐酸氨溴索对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的影响。方法 90例AECOPD患者在给予抗感染、解痉平喘等对症支持治疗的基础上,根据应用祛痰药物不同,随机分为生理盐水组、溴己新组、氨溴索组,每组30例,监测治疗过程中白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比例(N%)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、红细胞沉降率(ESR)变化;测定3组患者入院当天及用药治疗7d后血清中p38MAPK、白细胞介素(IL)-8、IL-10的变化情况。结果经治疗后患者血常规、CRP、ESR较治疗前明显下降;并且氨溴索组改善情况优于溴己新组;氨溴索组治疗后第7天,与生理盐水组、溴已新组治疗后第7天比较,以氨溴索组的p38MAPK、IL-8、IL-10下降最明显,3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论氨溴索通过下调p38MAPK通路活化,调节AECOPD患者血清IL-8、IL-10,是其抗炎作用机制之一。

C57BL/6小鼠p38丝裂原活化蛋白激酶通路抑制后抗结核效应

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路抑制后小鼠对结核分枝杆菌感染的反应,以进一步阐明该通路在结核病免疫中的作用机制。方法以腹腔注射二甲基亚砜(DMSO)为对照组、注射p38 MAPK抑制剂SB203580(用DMSO溶解)C57BL/6小鼠为观察组,H37RV感染小鼠;30 d后处死小鼠,分析小鼠肺脏、淋巴结、脾脏和肝脏等组织的细菌载量和小鼠肺组织炎症细胞浸润情况和CD4^+、CD8^+、CD4^+IFN-γ^+和CD8^+IFN-γ^+T细胞亚群比例以及细胞因子表达水平。结果观察组小鼠肺、淋巴结、脾脏和肝脏等组织细菌载量(lgCFU/mL)分别为(6.21±0.042)、(5.11±0.07)、(4.91±0.06)和(4.11±0.07),对照组分别为(5.76±0.05)、(4.16±0.05)、(3.96±0.05)和(3.46±0.05),观察组显著高于对照组(P<0.05);观察组小鼠肺组织单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、CD4^+、CD8^+、CD4^+IFN-γ^+和CD8^+IFN-γ^+T细胞的比例(%)分别为(1.82±0.21)、(4.01±1.68)、(1.92±0.6)、(31.23±2.44)、(59.95±2.98)、(0.48±0.09)和(0.25±0.06),对照组分别为(2.71±0.31)、(7.11±1.88)、(3.42±0.68)、(31.95±1.69)、(59.23±1.38)、(1.22±0.11)和(0.19±0.03),除CD4^+、CD8^+以及CD8^+IFN-γ^+T细胞外,观察组显著低于对照组(P<0.05);相对于内参基因,观察组TNF-α、IL-12P40、IL-17A、IFN-γ、CXCL1、CXCL5和CXCL15分别为(0.52±0.07)、(0.40±0.07)、(0.32±0.082)、(0.46±0.03)、(0.59±0.14)、(0.37±0.21)和(0.41±0.09),对照组分别(1.02±0.11)、(1.03±0.14)、(1.11±0.25)、(1.01±0.08)、(1.17±0.14)、(1.27±0.30)和(1.08±0.26),观察组明显低于对照组(P<0.05)。结论C57BL/6小鼠p38 MAPK通路受到抑制后,可能通过多种免疫路径抑制其抗结核作用。

丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

目的研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ)_(1 42)致原代培养皮质神经元凋亡。方法将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ_(1-42)干预组(干预组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞0.1μmol/L组(A组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞1μmol/L组(B组)、Aβ_(1 42)+丁基苯酞10μmol/L组(C组)。Aβ_(1-42)作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase 3蛋白表达水平。结果免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂。与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P<o.05);与干预组比较,A、B、C组caspase 3蛋白表达及B、C组p p38蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论丁基苯酞可以通过p38蛋白磷酸化拮抗Aβ_(1-42)致原代培养皮质神经元凋亡。

急性重症胰腺炎大鼠P38丝裂原活化蛋白激酶通路对海马神经元环氧化酶-2和前列腺素E2表达的调控

目的:研究在急性重症胰腺炎(SAP)大鼠模型中,P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)通路对于海马CA1区神经元环氧化酶-2(COX-2)和前列腺素E2(PGE2)表达的影响.方法:随机将SD大鼠分为SAP模型组、SB203580抑制剂组和对照组.采用Nissl染色、免疫组织化学显色、免疫印迹,观察每组大鼠海马CA1区p-P38、COX-2以及PGE2的表达变化和SB203580对上述指标变化的影响.结果:SAP模型组海马CA1区p-P38、COX-2、PGE2阳性神经元的数量较对照组显著增加;SB203580抑制剂组与SAP模型组比较,海马CA1区p-P38、COX-2、PGE2阳性神经元的数量明显减少.结论:P38MAPK通路对SAP大鼠模型海马COX-2和PGE2表达可能有重要调控作用,SB203580对SAP大鼠海马神经元具有保护作用.

探讨葛根素基于p38丝裂原活化蛋白激酶通路对慢性牙周炎小鼠症状的改善作用及对牙周组织生长的影响

目的:建立慢性牙周炎小鼠模型,探讨葛根素对慢性牙周炎小鼠的治疗作用及其对牙周组织生长情况的影响,并探讨其作用机制。方法:将实验小鼠随机分为对照组、模型组、葛根素低剂量组、葛根素中剂量组和葛根素高剂量组。除对照组外,其余各组均采用正畸钢丝结扎法建立慢性牙周炎模型,并分别在建模后的第3、5、7和9天将2μL牙龈卟啉菌液和15μL 1 mg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)0.9%氯化钠溶液均匀注射到全部牙周组织。建模4周后,对葛根素低、中、高剂量组小鼠进行灌胃给药,剂量分别为200、400、800 mg/kg,对照组和模型组小鼠给予等量的羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)溶液,给药溶液现用现配,每天1次,共治疗2周。观察各组实验小鼠的活动状态及表现,通过酶联免疫吸附试验检测各组小鼠外周血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的浓度,通过Western Blot(蛋白质印迹法)实验检测小鼠牙周组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)的表达水平。结果:建立小鼠慢性牙周炎模型4周后,实验小鼠食欲减退,活动状态低迷,表现出慢性牙周炎症状:牙龈明显红肿、肥大,牙龈组织松软,部分出现溃疡现象,探诊出血明显,并有自发出血倾向。酶联免疫吸附试验检测结果显示:与对照组比较,模型组小鼠外周血清中的TNF-α、IL-1β和IL-6的水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,葛根素低、中、高剂量组小鼠外周血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平降低(P<0.05)。Western Blot检测结果显示:与对照组比较,模型组小鼠牙龈组织中p38MAPK和P-p38MAPK的蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,葛根素低、中、高剂量组小鼠牙龈组织中p38MAPK和P-p38MAPK的蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:葛根素能够缓解小鼠慢性牙周炎的症状,减轻牙周炎症反应,对于小鼠慢性牙周炎有显著的改善和治疗作用,且可能是通过p38MAPK信号通路发挥治疗作用。

达格列净调控p38丝裂原活化蛋白激酶通路对高糖诱导足细胞增殖、凋亡及炎症反应影响的研究

目的 探讨达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对高糖诱导的足细胞增殖及凋亡的影响。方法 将人肾小球足细胞(HGPC)分为正常对照(Con)组、低、中、高D-葡萄糖组(Glu 10、Glu 20、Glu 30)、高糖组(HG)、HG+低、中、高浓度达格列净组(HG+Dap 12.5、HG+Dap 25、HG+Dap 50)、HG+达格列净组(HG+Dap)、HG+抑制剂组(HG+SB 203580)、HG+达格列净+抑制剂组(HG+Dap+SB 203580)、达格列净+激活剂组(HG+Dap+C16-PAF),干预24 h,检测各组细胞活力、增殖率、凋亡率和相关因子水平。结果 与Con组比较,HG组IL-1β、TNF-α、细胞凋亡率、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白表达、p53、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),细胞增殖率、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG组比较,HG+Dap、HG+SB 203580组增殖率、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α、细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA和蛋白表达、p53、p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+Dap组比较,HG+Dap+SB 203580组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α、细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA和蛋白表达、p53、p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),HG+Dap+C16-PAF组IL-1β、TNF-α、细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA和蛋白表达、p53、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论 达格列净可促进高D-葡萄糖环境下HGPC增殖,抑制细胞凋亡及炎症反应,其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路信号转导相关。

重楼皂苷Ⅶ通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法 于2021年6月至2022年6月,取对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷Ⅶ组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L)、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂]组(SB203580 10μmol/L)、联合组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L、SB203580 10μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与对照组24、48、72 h吸光度值,迁移率(74.33±9.37)%,凋亡率(3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数(364.92±47.99)个比较,重楼皂苷Ⅶ组24、48、72 h吸光度值,迁移率(11.21±3.35)%降低,凋亡率(39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数(54.84±7.41)个减少(P<0.05);SB203580组24、48、72 h吸光度值,迁移率(89.30±14.56)%升高,凋亡率(1.05±0.15)%,p-p38MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(617.04±75.34)个增加(P<0.05)。与重楼皂苷Ⅶ组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,迁移率(40.52±8.18)%升高,凋亡率(11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(141.36±16.75)个增加(P<0.05);与SB203580组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、p-p38 MAPK/p38MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

穴位埋线通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶通路对哮喘大鼠气道上皮的影响

目的:观察穴位埋线对支气管哮喘(BA)大鼠肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)和气道上皮细胞(AEC)的影响,探讨穴位埋线治疗BA的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组和穴位埋线组,每组10只。采用卵蛋白和氢氧化铝混悬液腹腔注射制备BA模型。穴位埋线组予“肺俞”“定喘”和“膻中”埋线治疗1次。地塞米松组予地塞米松磷酸钠(1.5 mg/kg)腹腔注射治疗,每日1次,治疗2周。记录各组大鼠每分钟打喷嚏次数;HE染色法观察大鼠肺组织病理形态学的变化;透射电镜观察大鼠肺组织中AEC超微结构的变化,测量支气管壁和支气管平滑肌的厚度;Western blot法检测大鼠肺组织中p-p38 MAPK、IL-4和INF-γ的表达水平。结果:模型组大鼠支气管变形明显,AEC内出现大量自噬泡结构,线粒体减少;地塞米松组和穴位埋线组大鼠支气管变形缓解,AEC内空泡结构减少,线粒体数量增加。与空白组比较,模型组大鼠每分钟打喷嚏次数、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度明显增加(P<0.01),肺组织中p-p38 MAPK和IL-4表达水平明显升高(P<0.01),IFN-γ的表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,地塞米松组和穴位埋线组大鼠治疗后打喷嚏次数、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度明显减少(P<0.01),肺组织中p-p38 MAPK和IL-4的表达水平明显降低(P<0.01),IFN-γ的表达水平明显升高(P<0.01)。结论:穴位埋线可通过抑制p38 MAPK信号通路,降低IL-4的表达、升高IFN-γ的表达,从而缓解BA大鼠AEC受损的程度。

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降低(22.53±0.53、24.13±1.00 vs 29.56±1.46,10.37±0.59、10.16±0.21 vs 15.13±1.00,0.39±0.01、0.38±0.01 vs 1.12±0.01,0.34±0.01、0.31±0.01 vs 0.89±0.01,0.40±0.01、0.40±0.02 vs 0.88±0.01,P<0.05),IL-10、Arg-1表达显著升高(177.33±7.57、187.21±6.87 vs 64.67±11.50,0.41±0.01、0.44±0.03 vs 0.10±0.01,P<0.05)。与GA组比较,GA+抑制剂组细胞足突增多、胞体变大,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著降低,IL-10、Arg-1表达显著升高(P<0.05);GA+激活剂组细胞足突减少、胞体变小,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著升高,IL-10、Arg-1表达显著降低(P<0.05)。结论GA可通过阻断p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞M2极化。

丹皮酚通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探讨丹皮酚对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响及其机制。方法使用SPF级雄性SD大鼠构建缺血性脑卒中大鼠模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丹皮酚组(Paeonol组,20 mg/kg丹皮酚)、丹皮酚联合p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活剂组(Paeonol+Anisomycin组,20 mg/kg丹皮酚+2 mg/kg Anisomycin)。造模48 h后观察大鼠神经功能缺损评分,检测脑梗死体积,使用TUNEL染色及免疫荧光染色观察神经元凋亡及小胶质细胞激活情况,酶联免疫吸附测定法检测缺血半暗带区脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,Western blot检测p-p38 MAPK、p38 MAPK蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组大鼠神经功能损伤严重,脑组织出现白色梗死灶,神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,Paeonol组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Paeonol组比较,Paeonol+Anisomycin组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积增加,且丹皮酚改善缺血性脑卒中大鼠脑损伤及炎症反应的作用可被Anisomycin逆转(P<0.05)。结论丹皮酚可能通过抑制p38 MAPK通路,抑制小胶质细胞激活及炎症反应,减轻缺血性脑卒中引起的脑损伤。

微小RNA-30a调控丝裂原活化蛋白激酶通路对主动脉夹层大鼠的影响

目的探讨微小RNA(miR)-30a调控MAPK通路对主动脉夹层大鼠模型夹层形成、炎性因子及血管收缩的影响。方法选取SD大鼠50只,建立主动脉夹层大鼠模型,将其随机分为对照组、模型组、miR-NC组、miR-30a组、miR-30a抑制剂组,各组10只。组织病理学染色观察大鼠主动脉组织变化、主动脉中膜弹力纤维与胶原纤维变化;采用PCR、尾动脉压力计、ELISA法对各组miR-30a表达、干预前后收缩压情况、血清炎性因子表达进行检测;采用Western blotting检测各组大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-6、MMP-2蛋白表达以及MAPK通路相关蛋白表达。结果MiR-30a抑制剂组血管壁撕裂程度和内动脉壁排列紊乱有所改善;miR-30a抑制剂组改善血管重构;与对照组相比,模型组miR-30a表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组、miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;干预前,各组收缩压比较差异无统计学意义,P>0.05;与对照组相比,模型组收缩压较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;与对照组相比,模型组肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;与对照组相比,模型组、MMP-6、MMP-2、Ras、Raf、P38 MAPK及ERK1/2蛋白表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05。结论MiR-30a参与主动脉夹层的形成、炎症反应、调控主动脉夹层血管重构,可能是通过调控MAPK信号通路实现的。