p38蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响

目的观察特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响。方法BALB/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组。通过原位分子杂交和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-4、IL-5 mRNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4、IL-5含量以及肺组织IL-4、IL-5mRNA的表达较正常对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.01);SB203580干预组小鼠上述指标较哮喘模型组小鼠明显降低,差异亦具有显著性(P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻。结论SB203580能降低气道炎症细胞的聚集和炎症介质的表达。抑制p38 MAPK的活性可能成为哮喘治疗的新途径。

p38蛋白激酶信号通路对骨桥蛋白介导的三阴性乳腺癌细胞自噬、凋亡活性的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)和自噬相关蛋白Beclin 1在三阴性乳腺癌组织中的表达及OPN下调对p38蛋白激酶(p38MAPK)、Beclin 1表达及乳腺癌细胞自噬、凋亡活性的影响。方法选取2015年1月至2016年12月南阳市中心医院收治的60例女性三阴性乳腺癌患者的癌组织标本为研究对象,另选取同期手术治疗的40例女性乳腺纤维腺瘤或乳腺增生结节患者的正常乳腺组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测三阴性乳腺癌组织和正常乳腺组织中OPN和Beclin 1的表达。将MDA-MB-231细胞株分为特异性OPN小干扰RNA(siRNA)实验组(OPN-siRNA组)、非同源阴性CON-siRNA对照组(CON-siRNA组)和mock空白对照组(mock组);以慢病毒介导基因干扰技术制备OPN低表达MDA-MB-231细胞模型,应用透射电镜及流式细胞术检测OPN下调后细胞自噬体形成和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测OPN下调后p38MAPK及Beclin 1的表达。结果 OPN蛋白在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的阳性表达率分别为68. 3%(41/60)和12. 5%(5/40),OPN蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率高于正常乳腺组织(χ~2=56. 881,P=0. 000); Beclin 1蛋白在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的阳性表达率分别为18. 3%(11/60)和42. 5%(17/40),Beclin 1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率低于正常乳腺组织(χ~2=54. 692,P=0. 000);三阴性乳腺癌组织中OPN蛋白表达与Beclin 1蛋白表达呈负相关(r=-0. 713,P=0. 003)。病毒转染48 h后,OPN-siRNA组细胞中OPN mRNA和蛋白相对表达量显著低于CON-siRNA组和mock组(F=57. 170、50. 410,P=0. 001)。OPN表达下调后,OPN-siRNA组细胞中自噬体个数、早期凋亡率显著高于CON-siRNA组和mock组(F=17. 590,P=0. 004; F=23. 180,P=0. 003); OPN-siRNA组细胞中Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于CON-siRNA组和mock组(F=29. 873、32. 174,P=0. 001),p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量低于mock组和CON-siRNA组(F=32. 735、37. 110,P=0. 000); mock组与CON-siRNA组细胞中自噬体个数、早期凋亡率、Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达量及p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论抑制OPN表达可促进三阴性乳腺癌细胞自噬和凋亡活性,其作用机制可能与p38MAPK表达下调、Beclin 1表达上调有关。

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)+LPS组、PDTC(NF-κB抑制剂)+LPS组和SB203580+PDTC+LPS组。分别采用免疫细胞化学(SP法)和Western blot检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB抑制蛋白(I-κB)的表达。结果与正常对照组相比,LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,而I-κB的表达显著降低(均P<0.01)。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB,p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比,并显著增强I-κB的表达(均P<0.05)。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞,与LPS刺激组相比,p38蛋白激酶和NF-κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低(P<0.05),I-κB的表达显著增强(P<0.05),但分别与SB203580+LPS和PDTC+LPS组相比,差异均无显著性意义(均P>0.05)。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF-κB活化;p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF-κB的活化,NF-κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。

特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子变化的影响

目的:探讨特异性p38蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th1／Th2类细胞因子(IFN-γ／IL-4)变化的影响。方法:BALB／c小鼠30只随机分成3组:正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ含量,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果:与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P<0.01);与哮喘模型组比较,SB203580干预组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4水平明显降低,IFN-γ水平明显上升(P<0.01),肺组织病理学改变显著减轻。结论:SB203580能抑制哮喘小鼠的气道炎症反应,纠正IFN-γ／IL-4平衡的失调。

p38蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞Raw264.7凋亡中的作用

为探讨ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞株Ｒａｗ ２６４．７凋亡中的调控作用．应用流式细胞检测术、透射电镜技术、ＤＮＡ 凝胶电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、激酶活性测定检测ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导细胞凋亡中的作用．结果显示，热损伤后５ ｍ ｉｎ，ｐ３８即被激活，３０ ｍ ｉｎ 时达到最高水平，然后逐渐下降，２ ｈ 达基底水平；热损伤后３ ｈ 细胞凋亡率开始明显增高，ｐ３８蛋白激酶活性增高是细胞凋亡发生之前的事件；进一步观察了ｐ３８特异性抑制剂ＦＨＰＩ对细胞凋亡的影响，发现ＦＨＰＩ可以抑制热损伤诱导的细胞凋亡．上述结果提示，ｐ３８参与介导热损伤诱导的Ｒａｗ ２６４．７细胞凋亡．

p38蛋白激酶不同亚型在RAW264.7细胞中的定位

目的 探讨p38的4种亚型在细胞中的分布以及对外界刺激的反应。方法 应用激光共聚焦显微镜对RAW264.7单核细胞内的4种亚型进行定位观察。结果 p38(、p38(在未受刺激的静息细胞内的荧光强度呈弥散性分布，受脂多糖（LPS）刺激后，细胞核荧光强度明显增强，细胞浆荧光强度降低，提示LPS诱导p38(和p38(磷酸化活化后移位入细胞核。p38(在静息和受LPS刺激后的细胞中均呈散在、弥漫性地分布，提示p38(刺激后无移位现象。静息时，p38(弥散地分布于细胞，刺激后细胞核膜部荧光强度增高，提示受刺激后p38(移位于核膜周围。结论 p38不同亚型在细胞受LPS刺激后移位表现不同，可能与它们在组织和细胞分布的特异性及作用途径有关。

川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶及类胰蛋白酶表达的影响

目的探讨川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶(p38MAPK)及类胰蛋白酶表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组:A组(对照组)、B组(哮喘组)及C组(川芎嗪组),每组10只,采用鸡卵清蛋白(OVA)与免疫佐剂(氢氧化铝)腹腔注射致敏及用1%OVA生理盐水溶液雾化激发的方法制备哮喘小鼠模型,C组小鼠于每次激发前1 h腹腔注射川芎嗪(80mg/kg/d),每天1次,持续5 d,A组腹腔注射等量生理盐水致敏及雾化吸入。行HE染色镜下观察各组肺组织病理改变,并采用免疫组织化学染色SP法半定量测定行肺组织中p38MAPK及类胰蛋白酶表达情况。结果 C组小鼠肺组织HE染色病理改变较B组有减轻,且免疫组化结果显示测定C组小鼠肺组织较B组p38MAPK及类胰蛋白酶MOD有降低(P<0.05)。结论川芎嗪减轻哮喘气道炎症,部分机制可能是通过影响p38蛋白激酶信号通路及肥大细胞活化实现。

P38蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶-2 mRNA表达的影响

目的 探讨 P3 8蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶 - 2 m RNA表达的影响。方法 采用蛋白质印迹、逆转录-聚合酶链反应 ( RT- PCR)和放射免疫分析法检测脂多糖 ( L PS)刺激的肺泡巨噬细胞 ( AM)核提取物 P3 8蛋白激酶、环氧合酶 - 2 ( COX- 2 ) m RNA及细胞培养上清血栓素 B2 ( TXB2 )和 6-酮 -前列腺素 F1α ( 6- Keto- PGF1α)含量的变化 ,并观察特异性 P3 8蛋白激酶抑制剂 SB2 0 3 5 80对 L PS作用的影响。结果 L PS能显著刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化 ,COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量随之增加 ( P<0 .0 1) ;SB2 0 3 5 80能显著抑制上述作用 ;P3 8蛋白激酶的活化与 COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量之间呈显著正相关 ( r=0 .862 ,0 .5 69,0 .715 ,均为 P<0 .0 1)。结论 L PS刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化可能参与了对 COX- 2 m

机械压力对牙周膜成纤维细胞P38蛋白激酶激活及转位的影响

目的:研究P38蛋白激酶是否参与机械压力在牙周膜成纤维细胞的信号转导过程,初步探讨咬合创伤对牙周组织损伤机制。方法:本实验通过免疫组化法观察机械压力刺激后,牙周膜细胞内磷酸化P38蛋白激酶不同时间定位、强度的变化。结果:当压力大于200Kpa时,细胞内P38蛋白激酶磷酸化程度增强,且在30分钟时染色颗粒由胞浆转移至胞核,约60分钟后染色降至刺激前水平。结论:初步证明机械力信号可通过细胞跨膜转导,并激活胞浆内P38蛋白激酶转移至胞核。

转化生长因子β_1的c-jun氨基端激酶和p38蛋白激酶通路及其抑制剂与纤维化

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β-)是一个多功能肽类生长因子,对生长、分化、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和免疫应答有广泛的潜在作用.TGF-β1是体内最有力的促纤维化因子之一,已表明其是多种组织纤维化发生的关键介导者.

慢性阻塞性肺疾病患者p38蛋白激酶表达的变化及其临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中p38蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化及其临床意义。方法选择COPD急性加重期患者29例、稳定期患者18例及健康对照者15例。3%～5%氯化钠注射液进行痰液诱导,计数诱导痰中细胞总数、细胞分类。分别采用蛋白质免疫印迹、ELISA方法检测诱导痰中细胞核蛋白p38MAPK含量和上清液中IL-8的含量。结果与健康对照者比较,COPD患者诱导痰中细胞总数、中性粒细胞比例、p38MAPK的表达和上清液IL-8浓度明显升高,FEV1%显著降低(P<0.05);各组诱导痰中细胞核蛋白p38 MAPK的表达与上清液IL-8浓度和中性粒细胞比例均呈正相关(r=0.531,0.664,P<0.01),与FEV1呈负相关(r=-0.468,P<0.05)。结论 COPD患者诱导痰中p38 MAPK表达增高,可能与COPD气道炎症发生发展密切相关。

p38蛋白激酶(p38 MAPK)在癫大鼠脑内的表达

目的观察p38蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在癫大鼠脑内的表达情况。方法健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组(n=8)和癫组(n=8)。采用戊四氮腹腔注射建立癫模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine的标准进行观察评分,采用Western blot和免疫荧光法比较两组大鼠脑内p38MAPK的表达情况。结果癫组大鼠脑内p38MAPK在皮层和海马的表达均显著高于正常对照组(P<0.01)。结论 p38MAPK在癫大鼠脑内表达上调。

P38蛋白激酶和核因子κB对大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶表达的调控

目的 探讨P38蛋白激酶和核因子κB (NF κB) 在脂多糖(LPS) 诱导肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS) 表达过程中的调控作用。方法 分离培养大鼠肺泡巨噬细胞, 设正常对照组, LPS刺激组, P38 蛋白激酶抑制剂SB203580干预组(SB203580+ LPS组)。分别采用免疫组织化学、RT- PCR、Western blot 及Griess 方法检测NF- κB、iNOS mRNA、核蛋白P38的表达以及培养上清NO含量。结果 LPS刺激组核蛋白P38、胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS -mRNA的表达以及培养上清NO含量均较正常对照组显著升高(P<0. 01); 加入SB203580干预后上述指标均显著降低, 与LPS刺激组相比差异均具有极显著性意义(P<0 .01)。核蛋白P38 的表达与胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA以及培养上清NO含量均呈显著正相关(r= 0. 862, 0 .569, 0. 715, 均P<0. 01), 胞核NF κB染色阳性细胞百分比与iNOS mRNA 的表达以及NO 的产生亦呈显著正相关(r= 0 .653,0 .597, 均P<0 .01)。结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞P38 活化可上调胞核NF-κB、iNOS- mRNA和NO的表达; NF-κB可能是P38信号途径下游的重要位点之一。

LPS刺激对RAW264.7细胞p38蛋白激酶的细胞内定位的影响

目的 探讨p38蛋白激酶信号传导的过程及其在细胞中的特异性作用机制。方法 应用间接荧光标记免疫探针技术及共聚焦激光扫描技术观察单核细胞中p38蛋白激酶的分布及LPS对其分布的影响。结果p38在未受刺激的静息单核细胞及内皮生长因子（EGF）刺激的单核细胞胞浆和胞核中荧光强度均呈弥散性分布；脂多糖（LPS）刺激使细胞核区的荧光强度明显增强，而胞浆区域的荧光强度降低。激酶动力学的研究显示，p38激活先于p38移位。LPS刺激后30 min，p38激酶活性即达到高峰，随后2 h内逐步下降，p38激酶活性呈一过性增高；LPS刺激45 min后，核区荧光强度达到峰值，且在2 h内维持在高水平。结论 单核细胞由LPS激活后，其p38蛋白激酶由胞浆转位到胞核，反应具有一定的特异性；p38移位入核依赖于p38磷酸化活化及由细胞浆移位到细胞核是一系列连续发生的事件。

脂多糖对哮喘小鼠肥大细胞活化及p38蛋白激酶表达的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对哮喘小鼠肥大细胞活化及p38蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:将24只BALB/c小鼠随机分为3组:A(哮喘组)、B(0.1mg LPS+OVA组)、C(对照组),每组8只,采用免疫佐剂(氢氧化铝)与卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏及用1%OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘小鼠模型。采用免疫组织化学染色SP法半定量测定肺组织中类胰蛋白酶及p38MAPK表达的情况,HE染色观察肺组织病理变化。结果:与A组相比,B组小鼠肺组织类胰蛋白酶及p38MAPK的MOD显著升高(P<0.05);光镜下,A组支气管黏膜下水肿,管壁平滑肌肥大,基底膜增厚,黏膜皱襞增多,气道、血管周围间质可见大量嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞为主的炎症细胞浸润。B组上述情况未减轻,并出现肺泡腔及间质充血。C组气道周围无炎症细胞浸润,肺泡壁结构完整。结论:LPS可明显加重哮喘气道炎症,表明部分机制可能是通过影响肥大细胞活化及p38MAPK信号通路实现的。

p38蛋白激酶抑制剂SB239063对TNF-α介导支气管平滑肌收缩性增强的影响

目的研究p38MAPK抑制剂SB239063对TNF-α介导的支气管平滑肌收缩性增强的影响。方法显微镜下分离C57/BL6小鼠的支气管,并随机分为空白对照组、TNF-α处理组、TNF-α+p38MAPK抑制剂处理组,培养24小时后,利用肌动描记技术检测5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱(ACh)诱导的支气管平滑肌等长收缩张力,比较预测收缩张力最大值(Emax)、产生50%最大收缩张力激动剂有效浓度的负对数(pEC50)。结果空白对照组、TNF-α+SB239063处理组5-HT、ACh诱导Emax小于TNF-α组。TNF-α+SB239063处理组对ACh诱导的收缩反应的pEC50小于TNF-α组。空白对照组与TNF-α+SB239063处理组之间Emax无差别,pEC50无差别。结论 p38MAPK抑制剂可抑制TNF-α介导支气管平滑肌对5-羟色胺、乙酰胆碱的收缩性增强。

p38蛋白激酶在小肠移植后肠黏膜上皮细胞凋亡机理中的作用

目的探讨p38蛋白激酶(p38MAPK)在小肠移植早期排斥反应中肠黏膜上皮细胞凋亡机理中的作用。方法选用近交系SD和Wistar大鼠进行节段性小肠移植,实验分3组:同基因移植组(Wistar→Wistar组)、异基因移植组(SD→Wistar组)和异基因移植加环孢素A组(SD→Wistar+CsA组)。分别于移植术后1、3、5及7d采集移植肠管行病理学检查排斥反应,TUNEL法检测凋亡细胞,并行Westernblotting测定p38MAPK表达;同时,ELISA法测定血清TNFα活性。结果SD→Wistar组肠黏膜上皮细胞发生轻、中、重度排斥反应中存在细胞凋亡,凋亡细胞数随排斥反应的加重而增加(P<0.01);Wistar→Wistar组排斥反应轻微,凋亡细胞数无明显变化(P>0.05);SD→Wistar+CsA组随着CsA的应用,排斥反应逐渐得到控制,且凋亡细胞数也随着减少。SD→Wistar组及SD→Wistar+CsA组的血清TNFα随移植肠管上皮细胞凋亡的轻重而发生相应的变化(P<0.01)。p38MAPK在SD→Wistar组随凋亡细胞数增加而表达加强(P<0.01),Wistar→Wistar组p38MAPK表达无明显变化(P>0.05),在SD→Wistar+CsA组随凋亡细胞数而发生相应的变化(P<0.01)。小肠移植早期排斥反应中肠黏膜上皮细胞凋亡现象与p38MAPK呈正相关(r=0.875,P<0.01),血清TNFα与移植肠上皮细胞凋亡呈正相关(r=0.837,P<0.01),血清TNFα与p38MAPK亦呈正相关(r=0.826,P<0.01)。结论大鼠小肠移植排斥反应中存在肠黏膜上皮细胞凋亡现象,p38MAPK参与细胞凋亡信号转导过程并起重要作用。

NAC和地塞米松对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶的影响

目的 观察脂多糖 (LPS)诱导肺泡巨噬细胞 (AM )p38蛋白激酶活化及抗炎药物地塞米松 (DEX)和N 乙酰半胱氨酸 (NAC)对其影响。方法 分离培养大鼠肺泡巨噬细胞 ,设正常对照组、LPS刺激组、DEX或NAC干预组 ,共 4组。分别采用Western印迹和放射免疫分析法检测AM核提取物 p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF α、IL 8含量。 结果 LPS刺激组核蛋白提取物p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF α、IL 8含量较正常对照组升高 (P <0 0 1 )。DEX组和NAC组虽较正常对照组高 ,但均低于LPS刺激组 (P <0 0 1 )。核提取物 p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF α、IL 8含量之间分别呈正相关 (r =0 754、0 62 5 ,P <0 0 1 )。结论 LPS诱导肺泡巨噬细胞 p38蛋白激酶活化 ,进而导致TNF α、IL 8表达增多 ;DEX和NAC可能通过抑制 p38活化而减少炎性介质TNF α、IL

p38蛋白激酶活性测定方法

蛋白激酶ｐ３８／ＨＯＣ１是ＭＡＰＫ家族重要组成部分，在全身性炎症反应、休克、细胞迁移、细胞凋亡、心血管疾病等方面具有重要作用，测定上述病理过程中Ｐ３８蛋白激酶活性，对于了解ｐ３８信号传导通路与疾病的关系以及ｐ３８信号传导通路作为某些疾病的治疗靶点提供理论依据。ｐ３８蛋白激酶活性有同位素和非同位素两种方法，目前主要用同位素方法测定，但非同位素方法具有无放射性污染、时间短、灵敏度高等特点。

LPS诱导乳鼠心肌细胞p38蛋白激酶的激活与转位

探讨 p38蛋白激酶信号传导通路在细胞中的特异性作用机制。应用共聚焦激光扫描技术观察心肌细胞中 p38蛋白激酶的分布及 L PS对其分布的影响。结果提示未受刺激静止的及 EGF刺激的心肌细胞中 ,p38在胞浆和胞核中荧光强度呈弥散性分布 ;L PS刺激 30分钟后 ,细胞核区的荧光强度明显增强 ,而胞浆区域的荧光强度降低。心肌细胞受 L PS刺激激活后 ,其 p38蛋白激酶由胞浆转位到胞核。