降逆护膜汤对DCA诱导食管黏膜上皮细胞凋亡中p38MARK信号通路的影响

目的观察降逆护膜汤体外对脱氧胆酸(DCA)诱导人正常食管黏膜上皮细胞HEEC凋亡中p38MAPK相关基因表达的影响,探讨降逆护膜汤治疗胃食管反流病的机制。方法通过体外培养人正常食管上皮细胞,经DCA诱导出现凋亡现象,采用MTT法观察不同浓度的降逆护膜汤对细胞凋亡的影响。运用western blot检测细胞凋亡与p38MAPK的关系。结果 MTT显示与正常对照组相比,DCA使细胞生存率明显降低(P<0.01),而降逆护膜汤提高生存率,与DCA组比较有统计学意义(P<0.05)。蛋白检测结果显示,降逆护膜汤能显著抑制细胞凋亡模型中p38MAPK的磷酸化水平,提高bcl-2/bax表达量来发挥抗凋亡作用。结论降逆护膜汤可通过抑制p38MAPK的磷酸化水平来发挥其抗凋亡作用。

黄芩苷在流感病毒致肺纤维化早期进展中的作用机制

目的探索黄芩苷在流感病毒感染致肺纤维化早期进展中的分子机制。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺指数、肺组织切片Masson染色观察纤维化程度;采用RT-PCR测定肺组织p38MARK mRNA表达,采用Western-blot测定肺组织磷酸化p38MAPK,磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1蛋白表达。结果黄芩苷187.5、375 mg·kg-1剂量均能明显抑制肺指数及肺组织纤维蛋白的分泌;明显降低肺组织p38MAPK mRNA和蛋白表达(P<0.01);明显抑制磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1蛋白表达(P<0.05)。结论黄芩苷抗流感病毒感染作用可能与其在肺炎致肺纤维化早期抑制纤维蛋白形成相关。

肺炎链球菌表面蛋白A诱导人中性粒细胞生产CXCL8的机制

目的研究肺炎链球菌表面暴露的毒性表面蛋白A(PspA)促进CXCL8分泌的可能机制。方法使用炎症相关的信号分子NF-κB、p38MARK、ERK、JNK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,观察PspA对CXCL8分泌作用的影响。从受PspA刺激的人嗜中性粒细胞中分别提取细胞总蛋白和细胞核提取物,用ELISA法测定p38MAPK蛋白的活力和NF-κB的浓度的改变,并且采用Western blot方法进一步验证PspA对p38MAPK和IkB-α蛋白磷酸化水平的影响。结果使用NF-κB,p38MARK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,可以扭转PspA促中性粒细胞分泌CXCL8的现象;而ERK,JNK的抑制剂无此效果。另一方面,PspA可以上调中性粒细胞中的P38 MAPK蛋白的含量和NF-κB的浓度,也可以提高p38MAPK和NF-κB通路抑制蛋白IkB-α的磷酸化水平。结论肺炎链球菌PspA诱导人体中性粒细胞释放CXCL8受p38蛋白和NF-κB途径的调控。

p38MAPK在肺鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)在肺鳞癌组织中的表达及意义。方法:采用real-time PCR检测肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)患者癌组织和癌旁正常肺组织(non-tumor adjacenttissues,NAT)中p38MAPK mRNA表达水平;Western blot法检测p38MAPK(p38)和磷酸化p38MAPK(P-p38)蛋白表达水平,免疫组织化学法检测p38和P-p38在肺鳞癌组织中的定位。应用SPSS12.0软件分析与临床病理参数的关系。结果:肺鳞癌组织中p38MAPK mRNA和蛋白表达水平与对照组间均无明显差异(P>0.05)。癌旁正常肺组织中P-p38蛋白表达为(0.14±0.03),肺鳞癌组织中为(0.45±0.04),差异有统计学意义(P<0.05);P-p38蛋白表达与和肺鳞癌的组织分级程度呈正相关,与临床分期呈负相关(P<0.05)。结论:p38MAPK只有经过磷酸化活化后才发挥功能,即P-p38。P-p38可能在肺鳞癌的发生和发展中起到抑制作用,可以作为肺鳞癌的早期诊断和治疗的参考指标。

MAPK信号传导通路在人参多糖诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨人参多糖诱导白血病细胞K562凋亡的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为5×105个/m L,对照组予以常规培养;人参多糖（GPS）组加入400 mg/L GPS。采用流式细胞仪（MTT法）检测GPS对K562细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法检测细胞中P-P38蛋白定位及表达量的变化。Western blotting检测细胞中P38及P-P38蛋白的变化。结果 GPS对K562细胞在体外有明显的增殖抑制作用,在100~800 mg/L质量浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,在400 mg/L时达到细胞的半数抑制率,且在48 h时抑制率达到高峰;免疫细胞化学显示,P-P38蛋白主要分布在胞浆,与对照组相比,P-P38蛋白表达明显增强,且向胞核转移。Western blotting检测结果显示P38总蛋白无明显变化（P〉0.05）;P-P38蛋白有增加趋势,且在作用48 h后增加明显（P〈0.05）。结论 GPS能促进K562细胞凋亡,其促凋亡机制可能是通过P38MAPK信号传导通路实现的。

肺炎链球菌表面蛋白C诱导人嗜中性粒细胞分泌IL-8的机制研究

目的研究肺炎链球菌表面暴露的毒性表面蛋白C(PspC)促进IL-8分泌的可能机制。方法使用炎症相关的信号分子NF-κB,p38MARK,ERK,JNK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,观察PspC对IL-8分泌的影响。从受PspC刺激的人嗜中性粒细胞中分别提取细胞总蛋白和细胞核提取物,用ELISA法测定p38MAPK蛋白的活力和NF-κB的浓度,并且采用Western blot方法验证PspC对p38MAPK和IκB-α蛋白磷酸化水平的影响。结果使用NF-κB及p38MARK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,可以扭转PspC促中性粒细胞分泌IL-8的现象;而ERK和JNK的抑制剂无此效果。同时,PspC可以上调中性粒细胞中的P38MAPK蛋白的含量和NF-κB的浓度,也可以提高p38MAPK和NF-κB通路的抑制蛋白IκB-α蛋白磷酸化水平。结论肺炎链球菌PspC诱导人体中性粒细胞释放IL-8受p38MAPK和NF-κB途径的调控。

二参益气补肾胶囊对慢性肾衰竭大鼠肾小管间质纤维化的保护及机制研究

目的:探究二参益气补肾胶囊(Ershen)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠模型肾间质小管纤维化的保护作用及其对TGF-β1/p38MARK信号通路的影响。方法:采用腺嘌呤灌胃制备CRF大鼠模型,将实验动物分为模型对照组(Model)、贝那普利组(Benazepril)(5 mg·kg^-1·d^-1)和二参益气补肾胶囊组(Ershen)(5 g·kg^-1·d^-1),另设空白对照组(Normal),给药8周,检测24 h尿蛋白、血清尿素氮、肌酐等生化指标,HE染色检测肾损伤、TUNEL检测细胞凋亡、免疫组化检测TGF-β1、Western blot检测p38 MAPK。结果:二参益气补肾胶囊组尿蛋白定量减少,血清肌酐及尿素氮较模型组减轻;二参益气补肾胶囊组肾小球数目较模型对照组增加,肾小管间质损伤程度较轻;TUNEL凋亡指数下降,其TGF-β1含量少于模型组,其肾组织p38 MAPK表达受抑制。结论:二参益气补肾胶囊改善腺嘌呤致大鼠肾小管间质纤维化可能与下调TGF-β1/p38MARK表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。

慢性鼻炎中医证型与鼻黏膜p38 MAPK表达相关性初步研究

目的探讨慢性鼻炎中医分型与鼻黏膜p38 MAPK表达的相关性。方法每例标本用p38 MAPK染色,显微镜观察阳性细胞表达分布情况并计算平均数。结果采用SPSS 8.0 for windows统计软件进行分析。结果中医分型与p38 MAPK的表达呈正相关。结论慢性鼻炎鼻黏膜p38 MAPK的表达在中医证型中存在明显差异,气虚证呈低表达,血瘀证呈高表达。

参芎化瘀胶囊对脑缺血-再灌注大鼠海马细胞凋亡机制的研究

目的探讨参芎化瘀胶囊对脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制。方法通过改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血-再灌注大鼠模型。72只雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、参芎化瘀胶囊组。术后首先应用尼氏体和TUNEL染色研究缺血-再灌注后大鼠海马区神经元的形态学变化和凋亡情况,然后以免疫组织化学法检测海马区p38MARK的表达。结果假手术组相比,模型组可见大量的凋亡细胞,p38MARK蛋白表达增多,参芎化瘀胶囊组的凋亡细胞数量较模型组明显减少(p<0.05),p38MARK蛋白表达水平较低(p<0.05)。结论参芎化瘀胶囊对脑缺血-再灌注损伤的保护作用与调控p38MAPK信号通路抑制神经细胞凋亡有关。

p38MAPK信号途径抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中TNF-α表达的调控作用

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对SAP发展和胰腺组织中TNF-α表达水平的影响。方法采用胰胆管内注射牛磺胆酸钠的方法诱导大鼠重症急性胰腺炎模型,使用SB203580抑制P38MAPK信号传导通路,通过监测大鼠血清淀粉酶(Serum amylase,AMS)和TNF-α的表达检测,观察P38MAPK抑制剂SB203580对大鼠SAP发展和TNF-α表达水平的影响。结果 SAP组TNF-α的表达明显高于对照组。胰腺组织TNF-α的表达水平随胰腺炎病情的进展而升高(P<0.05),使用p38MAPK抑制剂可以显著降低TNF-α的表达(P<0.05)。结论 SB203580可能通过抑制胰腺组织p38 MAPK信号通路进而降低TNF-α的活性,减少炎症介质的释放,达到减轻胰腺损伤,治疗急性胰腺炎的目的。

右美托咪定对病理性神经痛坐骨神经卡压性模型大鼠镇痛作用的影响

目的探讨右美托咪定对病理性神经痛坐骨神经卡压性模型大鼠镇痛作用的影响。方法选择雄性SD大鼠36只,体重为220～265 g,随机分为3组(对照组、病理性神经痛模型组、右美托咪定组),每组各12只。对照组大鼠进行假手术处理,切开肌层并进行坐骨神经分离。病理性神经痛模型组大鼠进行坐骨神经结扎,制作病理性坐骨卡压性损伤模型,每天向鞘内注射2μg/kg的生理盐水,共注射14 d;右美托咪定组大鼠进行坐骨神经结扎,制作病理性坐骨卡压性损伤模型,每天向鞘内注射2μg/kg的右美托咪定。观察各组大鼠热缩足反射潜伏期、机械缩足反射潜伏期,并用免疫组织化学法测定脊髓背根神经节P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达情况,采用反转录聚合酶链式反应检测P38MAPKA mRNA表达水平。结果与对照组比较,病理性神经痛模型组与右美托咪定组大鼠损伤同侧脚趾并拢或内收,伴随或不伴随自发性甩腿、舔足、踮地行走等疼痛表现均有所减少。在给药后第3天,右美托咪定组热缩足反射潜伏期明显长于病理性神经痛模型组(P<0.05);在给药后第3天,右美托咪定组机械缩足反射潜伏期明显长于病理性神经痛模型组(P<0.05);病理性神经痛模型组与右美托咪定组P38MAPK平均光密度明显高于对照组(P<0.05),而右美托咪定组明显低于病理性神经痛模型组(P<0.05);病理性神经痛模型组与右美托咪定组P38MAPK mRNA水平明显高于对照组(P<0.05),而右美托咪定组与病理性神经痛模型组相比,术后1 d无明显差异(P>0.05),但随着时间推移P38MAPK mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论对病理性神经痛大鼠进行鞘内注射右美托咪定可缩短大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射潜伏期,其疼痛缓解作用的发挥可能是通过下调P38MAPK mRNA表达,从而抑制P38MAPK活化实现的。

急进高原后外周血单个核细胞内相关易感基因表达与急性高原反应分析

目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1α)、P38 MAPK和血管内皮生长因子(VEGF)在急进高原后外周血单个核细胞的表达变化,以及其与急性高原反应(AMS)的关系。方法对某部队赴青海省玉树抗震的官兵分别于进入高原前后48 h采集外周血,提取单个核细胞用RT-PCR法检测P38 MAPK及HIF-1αmRNA表达,Western blot法检测HIF-1α及VEGF蛋白表达。按照《急性高原反应的诊断和处理原则》诊断AMS。结果与进入高原前相比,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平及P38 MAPK mRNA表达水平均明显增高(P<0.001);VEGF蛋白水平也上调(P<0.01);HIF-1α及VEGF蛋白表达水平与AMS的发病程度高度相关,相关系数分别为0.875和0.675(P<0.001)。结论 HIF-1α、P38 MAPK和VEGF在急进高原48 h后表达水平均显著增加,HIF-1α和VEGF蛋白表达水平与AMS发病呈显著正相关。

基于p38 MARK信号通路探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损及血清炎症因子的影响

目的探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损、血清炎症因子的影响及作用机制。方法50只SPF级SD大鼠(雌雄各半,6~7周龄,180~200 g)按照随机数字表法分为假手术组、模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组,每组10只。模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组模拟缺血再灌注法造模,假手术组仅同部位埋入磁铁不予加压。假手术组与模型组给予生理盐水0.4 ml灌胃;三乙醇胺乳膏组予三乙醇胺乳膏外用;益气生肌组予12.98 g/(kg·d)益气生肌合剂灌胃;联合用药组予三乙醇胺乳膏外用及益气生肌合剂灌胃,各组均连续给药8 d。记录各组创面情况,血清炎症因子水平及创面p38 MARK信号通路相关蛋白表达情况。结果三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组造模第8天皮损面积低于模型组,联合用药组造模第8天皮损面积低于三乙醇胺乳膏组、益气生肌组(P<0.05)。模型组白细胞介素(IL)-2、IL-12、C反应蛋白(CRP)血清炎症因子水平高于假手术组(P<0.05);三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平均低于模型组且联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。假手术组皮损组织p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MARK)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平低于模型组(P<0.05)。三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平均低于模型组,且联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。结论益气生肌合剂与三乙醇胺乳膏联用可有效修复压疮大鼠模型皮损,降低血清炎症因子水平。

p38丝裂原活化蛋白激酶在溃疡性结肠炎中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在溃疡性结肠炎(UC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用。方法①7只Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、DSS结肠炎组、p38MAPK选择性抑制剂SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日饮用5%DSS溶液,干预组小鼠则在饮用5%DSS溶液72h后,加用SB203580〔1mg/(kg.d)〕进行腹腔注射。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数(DAI);7d后处死小鼠,观察各组小鼠肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。②收集36例活动性UC患者的肠黏膜组织标本,并以18例结肠癌旁的正常组织标本作对照,通过体外组织培养,观察SB203580对UC患者肠黏膜活检组织中TNF-α和IL-1β表达的影响。结果①DSS结肠炎小鼠的DAI评分、肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P均<0.01),经SB203580干预后,其DAI评分、TNF-α、IL-1β的水平均明显降低,但仍然高于正常对照组(P均<0.01)。②体外组织培养结果显示,与未用SB203580处理的UC组比较,SB203580处理后UC患者肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.01)。结论 SB203580能阻断p38MAPK信号转导通路,从而降低促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的释放。