在大鼠脑发育过程中Cdk5激活剂(p39)mRNA的表达

【目的】探讨Cdk5的2种激活剂p35和p39在脑发育过程中的不同表达。【方法】用Northern blot法和原位杂交法检测p39在50只大鼠脑发育过程的表达。【结果】Northern blot显示,在15天胚胎和新生大鼠脑中,p39表达较低,出生后1～3周表达最显著,到成年大鼠脑,表达降低到与新生大鼠脑相同的水平。原位杂交法显示,p39的mRNA在新生大鼠脑的所有区域神经元中的表达很弱,而在3周龄大鼠脑的所有区域转录水平最高,到成年大鼠脑,在大多数神经元中表达都降低,除小脑浦肯野细胞和颗粒细胞还保持着高水平的表达。【结论】结果表明,在大鼠脑发育的不同阶段,p39与以往发表的p35表达结果在空间上和时间上有不同的表达,它们可能在不同的脑区域中起着不同的作用。

大鼠三又神经脊束尾侧亚核内Cdk5/p39的表达与活性

目的:探讨周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)2种激活剂p35和p39在出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内的表达变化。方法:采用Western印迹分析、免疫沉降和Cdk5活性分析,检测出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内Cdk5的活性变化和Cdk5、p39的表达水平。采用SPSS11.0软件包中的两两比较和扩展t检验进行统计学分析。结果:在新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核组织中,p39表达较低;出生后2～3同时,p39的表达最高;到成体时,其表达降低到与新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核组织中的相同水平。在出生后各发育阶段,大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内Cdk5的表达一致,而Cdk5的活性逐渐减弱,新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内的Cdk5活性(115.5 Kcpm)比成体中的Cdk5活性(19.0 Kcpm)约高6倍,各组之间均有显著差异(P<0.01)。结论:在出生后各发育阶段,大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内p39的表达与p35表达结果在时间上有差异.Cdk5/p39和Cdk5/p35在出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内可能扮演不同的角色。

莱姆病螺旋体P39蛋白的基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的 克隆并表达我国莱姆病螺旋体分离株 Bm p A即 P39基因 ,为制备莱姆病螺旋体基因工程重组抗原以用于我国莱姆病的基础与临床诊断研究奠定基础。方法 应用 PCR方法及基因重组技术对我国莱姆病螺旋体分离株 P39蛋白进行全基因克隆 ,并在此基础上去掉信号肽序列 ,将 P39基因插入原核表达载体 L KB2 ,在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中进行诱导表达。表达产物以 SDS— PAGE电泳、Western blot、薄层扫描分析。结果 成功地克隆了 P39基因 ,序列分析显示 ,P39基因全长 10 2 0 bp,其核苷酸序列及氨基酸序列同源性与国外分离株均较高 ,与 Sh- 2 - 82株皆为 99% ,P39基因在大肠杆菌中以天然蛋白形式得到高效表达 ,扫描分析其分子量为 37k Da,单株表达量占菌体总蛋白的 5 8% ,Western blot实验表明其可与莱姆病患者血清发生特异性反应。结论 成功克隆了莱姆病螺旋体国内分离株 P39蛋白基因并且在原核系统中得到高效表达。重组 P39蛋白具有较好的免疫活性 。

大豆P39-1基因及其启动子表达方式的初步研究

利用实时定量PCR方法,检测大豆P39-1基因在大豆各组织中的表达方式,结果显示该基因在大豆根、茎、叶中的表达活性低,而在花和种子中的相对表达活性极高。利用PCR方法,克隆大豆P39-1基因5'端上游2 000 bp序列,命名为P39-1-p。在线启动子预测分析表明P39-1-p序列中含有多种典型的种子特异表达元件和花特异表达的元件,如SEF1 motif、SEF3motif、SEF4 motif、E-box、G-box、AACACA、AACA、ACGT、CCAA;52-box、ntp303-box、GTGA、TACPyATbox,推测大豆P39-1-p启动子具有调控下游基因大量表达在花和种子中的特性。

羊布鲁氏菌M5株P39基因的克隆与分析鉴定

目的:从羊布鲁氏菌M5株全基因组中扩增P39基因,并对扩增产物进行序列测定与分析鉴定。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌全基因组,设计特异性引物通过PCR方法扩增P39基因,将扩增产物连接到T载体(pMD19-T)的多克隆位点(MCS)中,构建成重组体(pMD19-T-P39)。将该重组体转化感受态大肠杆菌DH5(,经克隆筛选并扩增后,采用试剂盒法提取重组质粒,对该重组质粒进行酶切鉴定、序列测定并与GenBank数据库进行比对分析。结果:经PCR方法成功地从羊布鲁氏菌基因组中扩增得到了目的基因片段;酶切鉴定、序列测定与比对结果表明,该目的基因片段即是羊布鲁氏菌P39基因。结论:成功地从羊布鲁氏菌M5菌株全基因组中通过PCR扩增获得了P39基因,为后续的研究提供了可靠的基础。

毕赤酵母糖基化对布鲁菌P39抗原诱导巨噬细胞吞噬的影响

P39蛋白是通过蛋白组学从布鲁菌中鉴定出的具有较高免疫原性的优势抗原蛋白之一。本研究对布鲁菌的优势抗原蛋白P39基因在毕赤酵母中进行表达,并对其进行纯化及Western blot鉴定,利用核磁共振接合PNGaseF糖苷酶进行蛋白糖基化鉴定,并研究其与巨噬细胞相互作用的速度。结果表明,P39蛋白在毕赤酵母GS115中呈分泌表达,表达量可达5.05 g/L。核磁共振结果表明,重组P39蛋白被糖基化修饰。修饰后的蛋白被巨噬细胞捕获效应明显强于原核蛋白,说明糖基化修饰可能影响目标蛋白与细胞相互作用的效率,为进一步研究糖基化对P39蛋白的影响及布鲁菌糖基化疫苗候选抗原的研究提供参考。

羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒的构建及其免疫效果

目的构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果。方法将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定。以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MTT掺入法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1∶320),显著增加Th1型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答。

鼠脑发育过程中Cdk5激活剂—p39mRNA的表达

目的探讨Cdk5的激活剂-p39 mRNA在脑发育过程中的不同表达。方法用Northem blot法和原位杂交法检测p39mRNA在大鼠脑发育过程中的表达。结果Northem blot结果显示，存15d胚胎和新生大鼠脑中，p39 mRNA表达较低：出生后1～3周表达最显著：到成年大鼠．表达降低到与新生大鼠脑相同的水平。原位杂交法显示．p39 mRNA在新生大鼠脑中所有区域神经元中表达较低；而在3周龄大鼠脑的所有区域表达最高：到成年大鼠．大多数神经元中表达都降低．仅小脑还保持着高水平的表达。结论大鼠脑发育过程中，p39 mRNA在空间上和时间上有不同的表达．其亚细胞定位可能与激活Cdk5功能有关．

共表达羊布氏菌P39基因与增强型绿色荧光蛋白基因逆转录病毒质粒的构建

目的构建共表达羊布氏菌胞质结合蛋白P39基因和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的逆转录病毒质粒。方法提取羊布氏菌全基因组DNA,PCR扩增P39基因,连接至pMD19-T载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,经克隆筛选并进行序列测定后,将P39基因连接至逆转录病毒载体pRevIRES-EGFP的多克隆位点上,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,进行酶切鉴定。结果从羊布氏菌基因组中扩增出约1 400 bp的P39基因,与GenBank中登录的羊布氏菌16M菌株P39基因序列同源性达99%;重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP经双酶切鉴定构建正确。结论已成功构建了共表达羊布氏菌P39基因和EGFP基因的重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,为后续研究奠定了基础。

发育、成年及老年期大鼠脑中Cdk5,p35,p39的表达及Cdk5激酶活性变化

目的 研究不同发育时期大鼠脑中Cdk5 ,p35 ,p39的表达及Cdk5激酶活性变化。 方法 免疫印迹测定胚胎 12天至出生后 18个月大鼠脑中Cdk5 ,p35 ,p39的表达 ,通过测定Cdk5特定底物 组蛋白H1被磷酸化的程度检测鼠脑中Cdk5激酶活性。结果 从胚胎 12天至出生 7天 ,大鼠脑中Cdk5蛋白水平逐渐增加到峰值并保持至 18个月龄。在胚胎 12天时 ,Cdk5激酶活性和p35的蛋白水平较低 ,在胚胎 18天至出生 14天期间最高 ,然后在 3个月龄至 18个月龄的成年鼠和老年鼠脑中逐渐减少。与之相比 ,p39的表达方式与Cdk5和p35正好相反。自P14至 18M龄鼠脑中 ,大脑皮质及海马的 p35表达和Cdk5激酶活性高于小脑或纹状体。结论 大鼠发育早期 ,Cdk5激酶复合物的活化与神经发育密切相关 ,其生理作用在大脑皮质及海马有区域特异性。

伯氏疏螺旋体基因工程抗原ELISA法检测莱姆病特异IgG抗体

目的 :利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原P39建立间接ELISA法检测莱姆病特异性抗体IgG。方法 :基因工程抗原P39的包被浓度和酶二抗所用浓度及血清稀释倍数 ,均由棋盘试验确定 ,并进行了精密度 ,特异性试验 ,阻断试验 ,免疫复合物溶解试验 ,干扰试验。结果 :基因工程抗原P39最佳浓度为 2 0 0ng·ml- 1,用ELISA法鉴定 ,P39蛋白与两株P39单克隆抗体均发生特异性反应。测定 90例血清 ,其中 50例阳性 ,4 0例阴性 ,与进口试剂盒比较 ,两方法符合率 93.3% ,结论 :该方法特异性强 ,敏感性高 ,实验结果可靠 。

CDK5在细胞中的调控机理

CDK5是一个多功能的丝氨酸或苏氨酸蛋白激酶,最主要的功能是调控发育的中枢神经系统的神经迁移。其与调节亚基P35,P39或P25的结合是保持活性及其调控功能最基本的策略。因此,CDK5的活性及功能调控主要受P35和P39在细胞内的表达水平、时空分布及稳定性等因素的影响。此外,CDK5的活性调控也与CDK5自身的表达水平、磷酸化作用以及CDK5/P35超大蛋白复合物中某些蛋白因子的影响密切相关。

三种方法提取血清miRNA效果的比较

目的比较Trizol法、蛋白酶K消化+Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA的效果。方法分别选取2例健康人、2例肺炎患者和2例肺癌患者血清,以Let-7a-5p作为目标mRNA,线虫Cel-miR-39-3p作为内参,分别采用Trizol法、蛋白酶K消化+Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA,以Let-7a-5p及Cel-miR-39-3p特异性引物进行反转录PCR,以反转录PCR产物为模板运用SYBGreenⅠ法进行荧光定量PCR检测。结果 Trizol法与蛋白酶K消化+Trizol法均能有效提取到血清miRNA,而沉淀裂解法由于没有对血浆中的RNA进行富集故提取效果不佳。Trizol法提取较蛋白酶K消化+Trizol法相比,可以减少蛋白酶K的消化时间且提取效果更好,并且血清与Trizol试剂的体积比为200∶600时效果相对较好。三种方法检测Cel-miR-39-3p的Ct值基本一致。Trizol法和蛋白酶K消化+Trizol法在提取过程中加入的内参丢失较少。结论 Trizol法作为总RNA提取的手段适用于血清miRNA提取,通过调整血清与Trizol试剂的用量可使提取到的血清miRNA能够满足试验需要。

GSR-18型数字强震动记录仪事件数据格式解析

针对GSR-18型数字强震动记录仪的事件数据格式进行了解析,对记录事件数据文件头段与数据段存储方式做出了详细解释,并且对文件头段重要字段和数据段进行了分析和说明,提供了用python语言读取文件头段信息和数据段的实例。对提高强震动观测台网处理GSR-18型强震动记录仪的事件数据处理速度效率具有一定帮助,对拥有同型号仪器的强震动观测台网处理事件数据具有借鉴意义。

重组细胞色素P4503A4与P4503A39微粒体药物代谢活性比较研究

目的:通过考察已建立的P4503A39和P4503A4稳定表达重组细胞株微粒体药物代谢动力学特征,旨在分子水平为巴马小型猪作为临床药物代谢试验动物提供科学依据。方法:制备重组细胞微粒体,以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)、睾酮及其抑制剂酮康唑(KCZ)为探针药物,将其与重组P4503A4、P4503A39细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,获得药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析。结果:P4503A39和P4503A4体外微粒体药物代谢动力学参数Vmax、Km(S50)、Clint及IC50均表明:P4503A39的硝苯地平、睾酮的代谢活性及酮康唑的抑制活性均显著低于P4503A4(P<0.05)。结论:重组P4503A39细胞微粒体活性显著低于重组P4503A4细胞微粒体活性。

手法整复为主治疗翻转型肱骨外髁骨折18例

Manual reduction, splint external fixation and rehabilitation were all applied to 18 cases with turnover type of fracture of ateralcondylar of humerus. Significant result was obtained in 9 cases, good in 6 and improved in 3, with the total effective rate being 83.33%. The follow up observation was between 1 to 5 years. The curative effect was closely related to the timely treatment, plexus brachialis block anesthesia and proper fixation.

Compression behaviour of Pd39Ni10Cu30P21 bulk metallic glass up to 23.5Gpa

The compression behaviour of Pd39Ni10Cu30P21 bulk metallic glass is ivestigated at room temperature up to 23.5GPa using in situ high pressure energy dispersive x-ray diffraction with a synchrotron radiation source.Pressure induced strucural relaxation of the bulk metallic glass is exhibited within the pressure range.It is found that below about 5GPa,the existence of excess free volume contributes to rapid structural relaxation,which gives rise to rapid volumetic change.Under higher pressure,further relaxation results in structural stiffness.

渴望HCDl39（15E）P／TSDL型来电显示语言报号多功能电话机原理与维修

渴望HCD139(15E)WPSDL型来电显示语言报号多功能电话机具有FSK／DTMF双来电显示制式自动兼容、超大容量来电显示、去电查询、显示号码回拨、预拨号、来电自动语言报号等多种功能。一、电路原理 该机主要由U1(F117E)超大规模微处理芯片和U2(F117E—V1)语言芯片组成，电路如图1、2所示。1．振铃电路振铃电路主要由图1下左角的B2桥式整流二极管、1Q1和1Q2振铃音乐放大管、T1振铃输出变压器组成。外线呼入时．铃流信号经1C1和1C2隔直通交电容、1R1和1112限流电阻加到B2桥式整流二极管。整流后的脉动电压经1C3滤波后给1Q1、