消癌平注射液对多西紫杉醇在大鼠体内的药代动力学及体外CYP450酶活性的影响研究

目的探讨消癌平注射液(XAP)对大鼠体内多西紫杉醇(DOC)药代动力学与体外细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响。方法对24只SD雄性大鼠实施体内研究,随机分为A组(DOC对照组)、B组(XAP+DOC组)、C组[(咪达唑仑(MDZ)对照组)]、D组(XAP+MDZ组)共4组。借助超高效液相色谱串联质谱法检测给药后5、10、20、30 min和1、2、3、4、6、8、12、24 h大鼠血清中DOC/MDZ浓度,计算药代动力学参数。通过重组CYP450酶3A4(CYP3A4)的体外反应体系展开研究,制备人肝微粒体,以MDZ为底物探究XAP对CYP450酶活性的抑制作用,考察XAP对DOC代谢的影响。结果体内药代动力学结果显示,XAP可使DOC的C max和AUC 0→t分别增加150%(P<0.01)和60%(P<0.05);t 1/2和MRT分别为(4.24±1.78)h、(3.92±1.14)h,较DOC对照组显著延长;XAP可使MDZ的消除延长,半衰期t 1/2延长至(0.962±0.19)h,MRT延长至(1.008±0.13)h,药时曲线下面积(AUC 0→∞)为(1510.078±242.11)ng·h/ml,均显著高于MDZ对照组(P<0.05)。以MDZ为底物进行的体外抑制实验表明,XAP(10~100 mg/ml)和C 21总甾体提取物(10~50μg/ml)能明显抑制人肝微粒体CYP3A4活性。结论XAP与DOC联合使用后,DOC的血药浓度升高,DOC的多个药代动力学参数明显改变,XAP对DOC的消除有抑制效能,同时其作用机制可能与CYP3A4受抑制有关。

脑胶质瘤组织Pax3、P4HA1、Rac1基因表达与全切术后复发的关系及意义

目的探讨组织配对盒基因3(Pax3)、脯氨酰4-羟化酶亚基α1(P4HA1)、Rac GTP酶激活蛋白酶1(Rac1)基因表达与脑胶质瘤全切术后复发关系及意义。方法选取2019年3月至2021年6月80例脑胶质瘤全切术患者,根据术后1年是否复发分为复发组、未复发组,比较2组基线资料、组织Pax3、P4HA1、Rac1基因表达,采用Logistic分析脑胶质瘤全切术后复发的相关因素,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析组织Pax3、P4HA1、Rac1基因表达预测复发的价值,并比较不同Pax3、P4HA1、Rac1基因表达水平患者术后复发时间。结果复发组病理分级、术后辅助治疗情况与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织Pax3 mRNA、P4HA1 mRNA、Rac1 mRNA表达高于未复发组(P<0.05);校正了病理分级、术后辅助治疗情况后,Pax3 mRNA、P4HA1 mRNA、Rac1 mRNA仍是复发的独立相关危险因素(P<0.05);Pax3 mRNA、P4HA1 mRNA、Rac1 mRNA及三者联合预测复发的ROC下面积(area under the curve,AUC)依次为0.840、0.825、0.828、0.940;Pax3 mRNA、P4HA1 mRNA、Rac1 mRNA高水平患者复发时间短于低水平患者(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中Pax3 mRNA、P4HA1 mRNA、Rac1 mRNA表达与全切术后复发及复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,既能保证高复发风险人群治疗的充分性,又能减少低复发风险人群治疗相关的不良反应,从而最大化患者受益。

真菌中的脂质不对称调节和P4型ATP酶

脂质组分在双分子膜中不对称分布是广泛存在于真核细胞中的现象,有助于膜系统的出芽和融合,从而促进胞吞胞吐、蛋白分选运输等生理过程。多种蛋白参与维持脂质不对称,其中P4型ATP酶是重要的脂质转运体。P4型ATP酶又称脂质翻转酶,主要介导氨基磷脂的转位。在酿酒酵母、新生隐球菌、白念珠菌和构巢曲霉中,多种P4型ATP酶亚基的缺失导致蛋白运输失常,对唑类药物的敏感性升高,细胞壁完整性受损,毒力减低,在巨噬细胞中生存能力减弱等表型,提示脂质翻转酶的重要性及其作为抗真菌靶点的潜力。

细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-In TM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果与Flp-In^(TM)CHO-空质粒组相比,Flp-In^(TM)CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-In^(TM)CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

基于P4的转发与加密一体化技术

针对当前互联网中加密传输机制普遍存在协议相关性,无法同时满足多种私有协议跨互联网安全传输需求的问题,提出了一种基于可编程协议无关报文处理(Programming Protocol-Independent Packet Processors,P4)的加密与转发一体化技术与系统模型。首先,基于可编程数据平面,设计了一种数据包缓存方法,实现了不同网络协议数据包的解析和包头存储。其次,提出了基于国密算法的加密传输机制,并在数据平面中实现了加密与转发的一体化设计。最后,在可编程交换设备上实现该系统模型,同时将加解密操作卸载到专用加密卡上,进一步弥补了软交换的性能缺陷。实验证明,该系统实现了多协议的加密和转发,通过硬件加速,系统性能得到了显著优化。

P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖

目的:探讨P4HA2在食管鳞癌中的表达情况及作用机制。方法:利用基因表达综合数据库(GEO)的RNA表达谱数据及免疫组织化学染色和Western blot技术分析食管鳞癌组织及正常食管组织中P4HA2的mRNA和蛋白表达情况;通过细胞增殖实验、集落形成实验和裸鼠移植瘤实验,在体外和体内检测P4HA2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响;利用Western blot检测P4HA2调控的下游通路及关键分子。结果:与正常食管组织相比,食管鳞癌组织中P4HA2的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01);体外和体内实验结果显示,与对照组相比,敲降P4HA2可显著抑制食管鳞癌细胞的增殖、集落形成以及裸鼠移植瘤的生长(P<0.01);分子水平检测表明,敲降P4HA2显著降低EGFR的蛋白水平,以及AKT和S6的磷酸化水平(P<0.05);在食管鳞癌细胞中敲降P4HA2后回复EGFR的表达,AKT和S6的磷酸化水平以及细胞增殖和集落形成表型均得以恢复(P<0.01)。结论:P4HA2在食管鳞癌组织中高表达,且P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖和肿瘤生长。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

P21活化激酶4在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的通过研究不同危险度胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中P21活化激酶4(P21-activated kinase 4,PAK4)的表达量,探讨PAK4与GIST危险度的关系。方法选取2020年10月至2021年4月秦皇岛市第一医院病理诊断为GIST患者24例,根据共识将患者分为高危组、中危组、低危组,通过病理切片来确定不同危险度组的PAK4的表达量,并根据Callow计算方法对不同危险度组进行评分。结果PAK4随着GIST危险度增加表达升高,并且与正常对照组织及瘤旁组织相比,GIST中的PAK4表达量升高。结论PAK4表达量与GIST危险度相关,并且随着危险度升高,表达量也升高。

农产品电商企业营销策略优化路径与保障——以某地杂粮电商企业为例

乡村振兴,重在发展乡村特色农业产业。农产品电商企业要抓住机遇,依托电商平台优化营销布局,提升农产品品牌效应和市场竞争力。当下许多农产品电商企业面临诸多困境,如产品定位不清晰,品牌化建设不够,价格策略单一,营销渠道狭窄,促销吸引力不强等问题。为此,文章通过SWOT分析理论,就农产品电商企业面临的内外营销环境进行综合分析,并利用4P分析理论,对农产品目标市场进行准确定位,分别从产品、价格、渠道、促销四方面提出优化策略,最后从组织、技术、资金、制度等方面提出保障措施。

HPV感染病例与P16^(INK4a)表达的关联研究

目的:研究P16^(INK4a)在宫颈炎症与宫颈鳞状上皮内病变以及癌组织中的免疫表达及其与临床病理特征和HPV-DNA分型的相关性。方法:收集商丘市第一人民医院2020年4月至2023年4月404例宫颈病变组织病理活检,包括炎症组织、宫颈鳞状上皮内病变以及鳞状细胞癌(SCC);统计所有病例的P16^(INK4a)免疫组化染色与HPV-DNA分型结果,并分析各病变组织中的P16^(INK4a)与HPV分型关系。结果:P16^(INK4a)的表达在各种宫颈病变组织中存在显著差异(P<0.05),且P16^(INK4a)的阳性率与表达强度随宫颈病变程度的加深而增加;宫颈组织中P16^(INK4a)的表达在低危型与高危型HPV间有显著差异(P<0.05),P16^(INK4a)的表达强度与高危型HPV有相关性(P<0.001)。结论:P16^(INK4a)免疫染色结合HPV-DNA分型能有助于鉴别高级别CIN和宫颈癌,以及区分这些病变与低级别CIN和正常宫颈组织。

乡村旅游营销策略研究——以河南省洛阳市栾川县为例

在乡村旅游逐渐成为人们生活休闲方式的趋势下,乡村旅游营销策略的制定和实施显得尤为重要。以河南省洛阳市栾川县为例,结合当地乡村旅游概况,利用波特五力模型进行旅游竞争力分析,指出乡村旅游营销现存的目标市场定位不够精准、品牌形象不够鲜明、线上营销手段运用不足等问题。运用4P理论,从产品—价格—渠道—营销4个方面探讨栾川县乡村旅游营销策略的制订和实施,以期为乡村旅游业的发展提供有益的参考和借鉴。

黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响

目的黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型组、地塞米松组(200 mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(100 mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(200 mg/kg),每组20只。除正常对照组外,模型组、地塞米松组、黄芩总黄酮低高剂量组通过卵清蛋白(OVA)建立支气管哮喘模型,并予以相应药物干预。实验结束后,检测肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数,以及肺/体比值、肺损伤评分、动脉血氧分压(PaO_(2))水平;反逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法检测肺支气管组织微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)、NADPH氧化酶4(NOX4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平。结果与正常对照组比较,模型组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、黄芩总黄酮低剂量组和黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平降低,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,黄芩总黄酮低剂量组、黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与黄芩总黄酮低剂量组比较,黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩总黄酮对大鼠支气管哮喘具有明显治疗作用,其机制可能与黄芩总黄酮促进miR-133a-3p的表达进而抑制NOX4/NLRP3信号轴的激活相关。

关于P4P问题的一点讨论

研究表明 ,在 P4P问题中 ,当空间 4个点共面时 ,不仅摄像机坐标系与物体坐标系之间的旋转矩阵 R和平移向量 t可以线性求解 ,而且可以同时确定摄像机的有效焦距 f和像素比例因子α.

FastRMT:一种面向微体系结构创新的高速数据平面可编程系统

网络数据平面可编程(Data Plane Programmability)给网络转发设备的数据平面赋予强大的可编程性,在不更换设备的情况下,可以动态部署新型机制与服务,例如路由转发核心机制、网络安全控制功能、网内计算加速服务等.由此,数据平面可编程成为业界和学术界高度关注的新兴技术,并已在主流云服务提供商投入应用.可重构匹配表架构(Reconfigurable Match Table Architecture,RMT)由于出色的处理性能和采用P4语言灵活编程的特性,成为数据平面可编程的热点研究方向.然而,受困于RMT架构复杂的体系结构设计、芯片闭源的服务机制以及门槛较高的FPGA设计开发,使得RMT研究人员难以通过FPGA,对RMT创新设计以及100 Gbps以上真实性能场景进行敏捷验证.本文提出并实现了一种数据平面可编程系统FastRMT,首次开源了FPGA级的系统实现.FastRMT支持RMT架构可编程协议解析、自定义规则匹配、超长指令字的并发动作执行引擎等核心功能,支持P4语言对系统进行编程.FastRMT具备松耦合与模块化的特点,研究人员可以替换模块或者对系统进行动态重构,从而实现新型机制或体系结构的敏捷开发与验证.本工作包含交换机原型与网卡原型两种版本,支持主流FPGA芯片,系统可完成100 Gbps的报文线速处理能力,1500 B报文处理延迟仅为1.22μs,体现了FastRMT作为基础框架对微体系结构创新和生产线级别验证的优势和可行性.

基于5P4F的电子商务模式创新方法研究

互联网的发展为商务模式创新开辟了广阔空间和自由度 ,持续创新是电子商务模式与生俱来的本质。亚马逊等商务模式在美国专利与商标局获得专利极大地刺激了商务模式创新活动。本文提出了基于 5P4F(5P指Product、Price、Place、Promotion和Potion ;4F指businessflow、informationflow、capitalflow和logisticsflow)的电子商务模式的分析方法 ,提出了基于 5P4F的企业电子商务模式创新方法。

搅拌槽内新型疏水缔合聚合物AP-P4的溶解性

由于疏水缔合聚合物聚丙烯酰胺(AP-P4)的溶解性差,制约了聚合物驱油技术在海上油田的采收率。考察了温度、矿化度、转速、搅拌器型式及搅拌方式对AP-P4溶解时间和聚合物溶液黏度特性的影响,结果表明:温度与转速的提高有利于聚合物的加速溶解,但不利于聚合物溶液的增黏,存在一个适宜聚合物溶解的最佳矿化度范围;剪切力较小、循环量较大的搅拌器更适合AP-P4的溶解;采用翼型搅拌器向上排出流体,先高转速后低转速的搅拌方式能够加快AP-P4的溶解并获得较高的溶液黏度。

以睾酮为探针采用高效液相色谱法测定细胞色素CYP450 3A4的酶活性

建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4（CYP3A4）酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。采用的色谱柱为Phenomenex C18柱（4.6mm×150mm,5μm）,梯度洗脱,流速1.0mL/min,紫外检测波长245nm,柱温30℃。睾酮与大鼠肝微粒体温孵后,过已活化好的C18固相萃取小柱,收集甲醇洗脱液,于37℃水浴中通N2吹干,用50%甲醇复溶后进样分析测定。研究结果表明,6β-羟基睾酮的保留时间为11.60min,线性范围为0.5-32μg/mL,最低检出质量浓度为0.02μg/mL,提取率为88.41%-92.73%,方法的回收率为99.07%-101.30%;睾酮的保留时间为19.27min,线性范围为0.5-40μg/mL,最低检出质量浓度为0.01μg/mL,提取率为89.59%-92.66%,方法的回收率为96.50%-98.03%。两者的日内、日间相对标准偏差均小于10%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外睾酮及其代谢物6β-羟基睾酮的测定,可应用于体外CYP3A4酶活性的评价及酶动力学的研究。

建立一种测定细胞色素P450 3A4活性的方法

目的 建立一种细胞色素P450 3A4（cytochrome P450 3A4,CYP3A4）活性定量的新方法.方法 将CYP3A4底物硝苯地平与人肝微粒体进行体外温孵,以高效液相色谱法测定硝苯地平及其氧化产物,以甲醇-水（64：36）为流动相,流速为0.5 mL·min^-1,检测波长为254 nm.结果 在所建立的HPLC条件下,硝苯地平及其氧化产物的出峰时间分别在8.44和6.15 min,能够完全分离,且无其他生物基质峰干扰;氧化硝苯地平在人肝微粒体的最低检测限为25μg·L-1（S/N=3）,线性范围是0.25～32 mg·L^-1（r=0.999 4）,符合检测要求;在0.5,4.0,20.0 mg·L^-1时的萃取率分别为（67.05±3.49）%,（66.63±3.60）%,（67.08±2.78）%（n=5）;方法回收率分别为（100.17±6.97）%,（91.96±3.71）%,（96.55±3.98）%（n=5）;日内及日间RSD均小于7%.结论 本实验所建立的HPLC能够准确、快速检测出硝苯地平及其在人肝微粒体中的氧化产物,能够对CYP 3A4活性进行快速评价,适合于体外药物代谢动力学研究和第三代多药抗药性逆转剂的筛选.

未标定摄像机非共面P4P问题的一种解析解

经典PnP问题是以摄像机内参已知为前提条件的,然而对未标定摄像机PnP问题的研究更具有实际意义.文中针对未标定二参数针孔摄像机,首次研究了非共面P4P问题解的个数,同时提出了一种解析解.不仅可以求出摄像机相对于世界坐标系的位姿,而且还能得到摄像机的内参.首先根据投影方程和旋转矩阵的性质,利用14个变量构造出了14个约束方程,然后通过消元推导出只含一个未知数的8次多项式方程,分析证实一般情况下未标定摄像机非共面P4P问题最多有8组实解,而且解的上限可以达到.大量的仿真和真实图像实验表明,该算法在确定摄像机内外参上精度很高,且鲁棒性很强.该算法在物体定位、手眼定标、路标导航等领域具有比较重要的实际应用价值.

不可分型流感嗜血杆菌脂肽P4诱导气道上皮细胞分泌黏蛋白的机制

目的研究不可分型流感嗜血杆菌脂肽P4诱导气道上皮细胞分泌黏蛋白MUC5AC的作用及机制。方法培养人气道上皮细胞NCI-H292,用不同浓度的P4孵育细胞,检测粘蛋白5AC(MUC5AC)的分泌及mRNA表达、ROS的产生及肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)的活性;分析Duox1 p47phox和P67phox亚基亚细胞转位和表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化。结果 0、30、50和100 ng/m L P4作用NCI-H292细胞24 h后,可诱导其分泌MUC5AC并表达其mRNA,并促进p47phox和P67phox亚基转位至细胞膜、增高细胞内ROS的含量,同时可上调TACE的酶活性及诱导EGFR磷酸化。NADPH氧化酶抑制剂可抑制ROS产生;而ROS抑制剂处理则可降低TACE的酶活性;沉默TACE表达后可抑制EGFR磷酸化,而EGFR抑制剂处理可降低MUC5AC分泌。结论 P4经Duox1/ROS/TACE/EGFR诱导人NCI-H292细胞分泌MUC5AC。