转染细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应的保护作用及机制研究

目的研究过度表达表氧化酶基因,增加内源性EETs的产生是否对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应具有保护作用,并初步从对血管VCAM-1表达的影响探讨其机制。方法将携带细胞色素P450表氧化酶基因的真核表达载体pCB6质粒导入大鼠体内,2周后经静脉给予TNF-α,6 h后观察去甲肾上腺素预收缩的主动脉血管环对乙酰胆碱的舒张反应,并以western blot 检测血管中VCAM-1蛋白质的表达情况。结果 TNF-α降低了主动脉环对乙酰胆碱的舒张反应, CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α降低的血管舒张反应增强。TNF-α增加了血管VCAM-1表达,CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α诱导的VCAM-1表达减少。结论CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因能提高了血管对舒血管物质的反应性。本研究提示,通过上调体内表氧化酶基因表达水平提高内源性EETs浓度可减轻炎症介导的血管损伤,这为研究动脉粥样硬化的防治提供了新的思路。

重组腺相关病毒介导的细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响

目的研究过度表达细胞色素P450表氧化酶基因引起内源性EETs产生增加是否能抑制由TNF—α诱导的内皮炎症。方法以携带三种不同表氧化酶基因的重组腺相关病毒rAAV- CYP2C11、rAAV—CYP2J2和rAAV—CYPF87V转染人脐静脉内皮细胞,然后再以TNF—α干预,来研究它们对内皮VCAM-1的表达及外周血单核细胞PBMC与内皮细胞粘附的影响。结果TNF-α诱导了 HUVEC中VCAM-1蛋白质的表达,rAAV—CYP2C11、rAAV—CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用。 TNF-α诱导了PBMC与HUVEC的粘附(100±0．0％ vs 620．1±65．3％),rAAV-CYP2C11、rAAV- CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用(分别为120．3±33．4％ vs 387．7±27．4％．131．0±28．7％ vs 535．0±69．7％)。结论CYP2C11和CYP2J2基因具有显著的保护内皮细胞、对抗炎症介质介导的内皮损伤的作用。

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠血压和细胞色素P450表氧化酶2C11基因表达的影响

目的 研究阿托伐他汀降低自发性高血压大鼠（SHR）血压的作用是否与其调节细胞色素P450表氧化酶2C11（CYP2C11）基因表达的作用有关。方法 18只SHR随机分为SHR模型组、阿托伐他汀50和10mg·kg^-1组；6只Wistar-Kyoto大鼠（WKY）作为正常对照组。阿托伐他汀ig给药，每日1次，共10周。分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压（SBP）；RT-PCR和Westem印迹法分别检测心、肝、肾及主动脉组织中CYP2C11 mRNA和蛋白质表达；ELISA方法检测尿液中14，15-二氢二十碳三烯酸（DHET）含量；并测定血脂含量。结果 阿托伐他汀50mg·kg^-1组在给药后第6～10周和10mg-kg^-1组在给药后第10周SBP明显低于SHR模型组。在CYP2C11 mRNA和蛋白质表达中，SHR模型组心、肾和主动脉均明显高于WKY组；给药10周后，阿托伐他汀50mg·kg^-1组的4种组织和10mg·kg^-1组的心、肾和主动脉的表达明显高于SHR模型组。治疗前SHR各组尿液中DHET的含量均显著高于WKY组，给药后阿托伐他汀50mg·kg^-1组的含量明显高于SHR模型组；同时，阿托伐他汀50mg·kg^-1组血脂水平明显低于SHR模型组。结论 阿托伐他汀可上调CYP2C11基因的表达，并增加其代谢产物表氧化二十碳三烯酸。这可能是其降低血压的作用机制之一。

细胞色素P450表氧化酶2J2基因G312R多态性与脑卒中的关系

目的探讨我国汉族人群细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)基因G312R多态性与脑卒中的关系。方法选择脑卒中病例180例和性别、年龄相匹配的健康人群190例,采用PCR-RFLP方法进行CYP2J2基因G312R多态性分析。结果370例均为野生型,未发现杂合子和突变后纯合子。结论CYP2J2基因G312R突变不是我国部分人群缺血性脑卒中、脑出血发病的遗传危险因素。

细胞色素P450表氧化酶对内皮细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡及NF-κB活性的影响。方法在原代培养的牛主动脉内皮细胞中,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-2J2,rAAV-2C11,rAAV-F87V两周后,用肿瘤坏死因子(TNF-α)(10ng/ml)和放线菌素D(ActD) (5ng/ml)诱导凋亡,通过DNA ladder观察细胞凋亡,同时ELISA法测定NF-κB的活性。结果与对照组相比,转染细胞色素P450表氧化酶基因后能抑制内皮细胞的凋亡,同时诱导细胞凋亡后,转染CYP450各基因组NF-κB中P65的活性较对照组明显降低。结论细胞色素P450表氧化酶能明显的抑制肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡,并通过抑制NF-κB的核转位发挥抗凋亡作用。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸生物学作用

对于花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶作用生成的环氧二十碳三烯酸(EETs),最初在心血管及肾脏系统中被广泛研究,并发现EETs的舒张血管、抑制血小板的聚集、抑制血管平滑肌细胞的炎症反应及平滑肌细胞的迁移、增强纤维蛋白的溶解等作用,为预防及治疗许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化等提供了新的研究方向。近来研究发现EETs具有促进机体肿瘤细胞的增殖、迁移等作用,其有可能使EET成为肿瘤治疗的新靶点。深入研究EETs的生物学作用及其作用机制,将为临床治疗某些疾病提供新的思路。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

细胞色素P450表氧化酶对人舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究细胞色素表氧化酶对在体肿瘤生长的影响。方法:将转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V、rAAV-antiCYP2J2和rAAV-GFP的Tca-8113细胞,分别接种至裸鼠皮下,观察皮下移植瘤的生长情况,并用免疫组织化学染色分析移植瘤细胞PCNA和CD31分子的表达情况。结果:转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V明显促进裸鼠皮下移植瘤的生长,并且使移植瘤出现时间(分别为5.8天和6.0天)明显较对照组和转染rAAV-GFP(分别为8.4天和8.6天)短;而转染反义rAAV-CYP2J2组移植瘤生长缓慢,出现时间也明显延长(约9.75天)。免疫组化结果显示,rAAV-CYP2J2、、rAAV-CYPF87V明显促进移植瘤细胞PCNA和CD31的表达,移植瘤微血管密度明显增加。结论:CYP表氧化酶能明显促进在体肿瘤的生长,其机制可能与促进肿瘤血管生成密切相关。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶在自发性高血压大鼠血压的调节中的作用

背景与目的 花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶代谢花生四烯酸产生表氧化廿烷酸(EETs),又称为内皮源性超极化因子(EDHFs),在局部微循环的调节中起着重要作用。然而EETs在血压的调节中是否起作用还不清楚。本研究通过对成年自发性高血压大鼠导入花生四烯酸细胞色素表氧化酶基因来观察其血压变化,从而进一步明确EETs在血压调节中的作用。方法:将含人类细胞色素P450表氧化酶CYP2J2 cDNA的真核细胞表达质粒pcDNA.2J2经静脉注射(3mg/kg)入雄性成年自发性高血压大鼠,并以pcDNA3.1对照。然后用尾部血压计测量血压。并在注射后3周和4周时处死动物,检测CYP2J2在不同组织中的表达情况。结果:注射质粒后对照组血压一直无显著性变化,而pcDNA.2J2治疗组大鼠血压显著降低(P<0.05),这一降压效应持续两周以上。Western blotting显示在实验组动物肺、肝和肾的总蛋白中通过特异性抗-CYPP2J2抗体可检测出显著量的人类CYP2J2蛋白的表达。结论:本实验显示对成年自发性高血压大鼠导入人类CYPP2J2基因,使CYP2J2可以在动物组织中高表达,从而引起相对持久的降压作用,这些结果提示花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶通过产生EDHFs参与了动物血压的调节作用。

花生四烯酸细胞色素p450表氧化酶基因对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的治疗作用

目的研究过表达花生四烯酸细胞色素p450表氧化酶基因CYP2J2对野百合碱(MCT)诱导的大鼠原发性肺动脉高压的治疗作用,并对其机制进行初步探讨。方法模型组18只雄性大鼠一次性注射MCT(60 mg/kg·w),对照组18只。三周后分六组:MCT+生理盐水(n=6),MCT +pCB6(n=6),MCT+pCB6-2J2(n=6),生理盐水(n=6),pCB6(n=6),pCB6-2J2(n=6)。两周后,测右室收缩压RVSP和右室肥厚指数RV/(LV+s),western blot检测CYP2J2、Smad4蛋白的表达。结果模型组注射生理盐水、pCB6组RVSP分别为(41.48±0.45)和(38.13±3.68)mm Hg,显著高于正常对照组动物(20.89±3.09)mm Hg,(P<0.05)和模型组注射pCB6-2J2组(29.48±5.67)mm Hg,(P<0.05)。模型组注射生理盐水、pCB6组RV/(LV+S)分别为(0.425±0.08)和(0.358±0.07)显著高于正常对照组动物(0.24±0.03)(P<0.01)和模型组注射pCB6-2J2组(0.28±0.02) (P<0.05)。Western blots显示模型组注射生理盐水、pCB6组Smad4蛋白表达水平均明显低于注射pCB6-2J2组。结论过表达CYP2J2基因显著缓解野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压,降低右室收缩压和减轻右心室肥厚程度,上调了TGFβ信号通道中的Smad4蛋白。

CYP450表氧化酶/EET代谢途径通过HIF-1α减轻肥胖小鼠脂肪炎症

目的:比较细胞色素P450(CYP450)表氧化酶在肥胖小鼠与正常小鼠内脏脂肪组织中的表达差异,观察外源性环氧二十碳三烯酸(EET)对肥胖小鼠胰岛素抵抗、炎症及血管再生的影响。方法:以C57BL/6Cnc小鼠为研究对象,经高脂饮食建立小鼠肥胖模型。成模后,将肥胖小鼠随机分为肥胖组(n=10)、EET组(n=10)和EET拮抗剂14,15-环氧二十碳-5(Z)-烯酸(EEZE)组(n=10),分别腹腔注射生理盐水、11,12-EET和14,15-EEZE。普通饮食饲养的非肥胖C57BL/6Cnc小鼠作为正常对照组(n=10)。Western blot检测小鼠内脏脂肪组织CYP2J2(一种CYP450表氧化酶)及低氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达水平;ELISA检测血清胰岛素及炎症因子水平;免疫组化检测内脏脂肪组织毛细血管密度。结果:与正常小鼠相比,肥胖小鼠胰岛素抵抗指数上升,内脏脂肪CYP2J2表达降低,HIF-1α表达升高,血清中炎症因子水平增高,内脏脂肪中血管样组织减少(均P<0.05)。外源性11,12-EET可以显著降低肥胖小鼠胰岛素抵抗指数、内脏脂肪组织中HIF-1α表达和血清炎症因子水平,促进内脏脂肪血管样组织生成(均P<0.05)。结论:EET可减轻肥胖小鼠胰岛素抵抗、脂肪组织缺氧和炎症,并促进血管生成。

利尿剂对高血压大鼠细胞色素P450表氧化酶及血管紧张素Ⅱ1型受体基因表达的影响

目的 噻嗪类利尿剂是广泛使用的降血压药物 ,然而其降血压机理仍然不完全清楚。本研究观察了氢氯噻嗪和吲哒帕胺对自发性高血压大鼠 (SHR)细胞色素P4 5 0 (CYP)表氧化酶 2C11及血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1)基因表达的影响 ,以探讨其降低血压的分子机制。方法 成年雄性SHR随机分为三组 ,分别每日经胃管给予氢氯噻嗪 (10mg/kg)、吲哒帕胺 (0 6 2 5mg/kg)和等量去离子水灌胃 ,并测量血压和 2 4h尿量。 4周后 ,检测主要脏器的CYP表氧化酶 2C11和AT1表达情况及形态学变化。结果 氢氯噻嗪和吲哒帕胺用药 1周后动物血压降低 ,4周时降压幅度达到非常显著水平 ,与对照组比较P <0 0 1。同时在mRNA和蛋白质水平上调肾脏、心脏和主动脉中CYP表氧化酶 2C11和下调AT1基因表达 ;胶原染色显示 ,两种药物均能显著减少心肌胶原沉积 ,减轻高血压所致的肾脏损害。结论 噻嗪类利尿剂氢氯噻嗪和吲哒帕胺可能通过上调CYP表氧化酶及下调AT1降低血压和保护器官。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET促进血管生成的研究

目的研究花生四烯酸细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶代谢产物表氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acid,EET)对牛主动脉内皮细胞(bovine endothelial cells,BAEC)、对血管生成的影响及其机制。方法分离BAEC培养,给予外源性EET刺激、重组腺相关病毒介导的各种CYP表氧化酶(CYP2J2,CYP2C11,CYPF87V)转染后,采用细胞计数、噻唑蓝比色法检测细胞增殖改变,用流式细胞仪检测对细胞增殖周期的影响,同时检测细胞趋化移行的改变,比较对Matrigel中毛细血管样结构形成的影响,观察表氧化酶过度表达对鸡胚尿囊绒毛膜血管生成和大鼠缺血后肢毛细血管生成的影响。结果各种EET刺激或表氧化酶病毒转染均显著促进BAEC的增殖、趋化和移行,并使Matrigel中毛细血管样结构的形成明显增加,且EET呈剂量依赖性效应,而合用一氧化氮合酶抑制剂、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)抑制剂或磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)抑制剂均可显著抑制上述效应,另外表氧化酶病毒转染尚能明显促进CAM小血管和大鼠缺血后肢毛细血管的生成。结论花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶及其代谢产物EET可显著促进血管的生成,可改善局部组织的缺血,其作用由MAKP和PI3K介导,部分效应由其对一氧化氮的上调作用介导。

细胞色素P450表氧化酶经线粒体途径抗内皮细胞凋亡的机制研究

目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞抗凋亡的机制。方法:原代培养主动脉内皮细胞(BAECs)2周后,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V。用肿瘤坏死因子(TNF-α)和放线菌素D(ActD)诱导凋亡,用Western blot法分别检测细胞胞质及线粒体的细胞色素C的含量。以ELISA方法检测Caspase-3、-8、-9的活性。结果:Western Blot结果表明,转染CYP P450表氧化酶后细胞胞质的细胞色素C明显减少,线粒体的细胞色素C明显增加。ELISA结果显示Caspase-3、-8、-9的活性均较对照组明显降低(均P<0.05)。结论:细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V抑制内皮细胞凋亡是通过抑制线粒体途径发挥作用的。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶转基因表达对自发性高血压大鼠血压的影响及机制探讨

目的应用重组腺相关病毒作为基因导入的载体,将CYP450表氧化酶2J2基因导入到自发性高血压大鼠(SHR)体内,观察其对SHR血压的影响。方法15只雄性SHR随机分为3组,分别予以病毒悬浮缓冲液,rAAV-GFP和rAAV-2J2尾静脉注射(1×1012pfu/只)。用尾套法监测大鼠尾动脉血压,持续6月;实验结束前采用Millar导管检测心功能。采用Western印迹法检测目的基因在大鼠体内的表达。结果2J2组的血压从第2月开始下降,并保持相对较低的水平,而对照组则缓慢上升,两者间有显著性差异。2J2组心内最大收缩压,收缩末压,dp/dtmax和dp/dtmin的绝对值与对照组相比较均显著下降。2J2组大鼠的心搏出量和心输出量与对照组相比较显著增加。结论CYP表氧化酶及其代谢产物EETs对心肌的负性肌力调节机制可能是其调节高血压的重要机制之一。

细胞色素P450表氧化酶通过PI3K/AKT及ERK/MAPK途径抗内皮细胞凋亡的机制

目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导内皮细胞抗凋亡的机制。方法:在原代培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)中,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V2周,证实其在内皮细胞中高效表达。用TNF-α(10ng/ml)和放线菌素D(ActD)(5ng/ml)诱导凋亡,流式细胞计数观察其凋亡变化,用Western blot法检测蛋白激酶B(AKT)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化水平,用流式细胞计数的方法观察空白组及转染F87V组加入AKT抑制剂、LY294002、芹菜素及PD98059后的细胞凋亡比例。结果:与对照组比较,转染细胞色素P450表氧化酶基因后BAECs能高效表达P450表氧化酶基因F87V(P<0.05);流式计数凋亡细胞数,转染表氧化酶较对照组明显减少(P<0.05);转染CYP P450表氧化酶后,AKT及ERK的磷酸化增加;磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和MKK的抑制剂后转染F87V组较对照组凋亡细胞比例明显减少(P<0.05)。结论:细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V能通过MAPK(ERK1/2)与PI3K/AKT途径发挥抗凋亡作用。

细胞色素P450表氧化酶2J2基因过表达通过抗炎减轻大鼠肺缺血再灌注损伤

目的探讨细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)基因过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法通过pcDNA3.1质粒将CYP2J2基因转染至SD大鼠,增加大鼠肺组织中CYP2J2蛋白及循环中相应代谢产物的表达。实验动物随机分为5组:空白对照组(Blank)、单纯开胸组(Sham)、肺缺血再灌注组(IR)、肺缺血再灌注+pcDNA3.1-GFP基因转染组(IR+GFP)、肺缺血再灌注+pcDNA3.1-CYP2J2基因转染组(IR+CYP2J2)。并通过阻断左侧肺门1 h,然后恢复通气和血流灌注2 h来构建大鼠急性肺缺血再灌注损伤模型。实验结束后,处死大鼠,评估肺损伤严重程度,并探讨机制。结果与对照组相比,缺血再灌注处理可导致大鼠急性肺损伤,包括增加肺重/体重的比值(LW/BW)、肺湿重/干重比值(W/D)、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度(BALF)、以及大鼠血浆IL-1β、IL-8、TNF-α、sP-selectin、sE-selectin等炎症介质水平,降低抗炎细胞因子IL-10水平,而CYP2J2基因转染可减轻大鼠肺缺血再灌注损伤[LW/BW:(4.720±0.756)×10^-3比(4.761±0.905)×10-3比(7.331±0.484)×10^-3比(7.434±0.702)×10^-3比(6.088±0.405)×10^-3,P<0.01;W/D:3.762±0.537比4.084±0.517比7.726±0.895比7.941±1.015比5.633±0.543,P<0.01;BALF:(664.827±219.547)mg/L比(637.381±83.860)mg/L比(2 138.503±81.156)mg/L比(2 130.880±473.470)mg/L比(1 208.030±256.255)mg/L,P<0.01;IL-1β:(28.100±2.930)ng/L比(30.076±5.550)ng/L比(68.532±5.587)ng/L比(66.935±6.469)ng/L比(51.450±6.300)ng/L,P<0.01;IL-8:(38.949±6.441)ng/L比(45.212±5.814)ng/L比(64.661±11.187)ng/L比(64.136±8.634)ng/L比(52.702±6.392)ng/L,P<0.01;TNF-α:(45.359±6.531)ng/L比(98.797±6.610)ng/L比(188.368±16.373)ng/L比(189.677±19.264)ng/L比(121.861±10.994)ng/L,P<0.01;sP-selectin:(4.855±3.032)μg/L比(16.670±8.177)μg/L比(59.428±11.792)μg/L比(53.845±6.925)μg/L比(40.017±8.545)μg/L,P<0.01;sE-selectin:(499.907±151.751)ng/L比(985.640±144.445)ng/L比(1 826.863±370.931)ng/L比(1 684.189±330.473)ng/L比(1 313.309±197.700)ng/L,P<0.01;IL-10:(128.995±3.114)ng/L比(126.487±9.532)ng/L比(47.992±9.730)ng/L比(55.497±4.755)ng/L比(91.854±4.166)ng/L,P<0.01]。而且,缺血再灌注可导致大鼠肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65活化及核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)降解,而CYP2J2基因转染逆转了该效应(NF-κB p65:1.000±0.000比1.090±0.078比1.762±0.082比1.681±0.057比1.296±0.142,P<0.01;IκBα:1.000±0.001比0.904±0.060比0.565±0.061比0.601±0.070比0.743±0.044,P<0.01)。结论CYP2J2基因过表达可减轻大鼠肺缺血再灌注损伤,其机制可能是通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)通路来实现的。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢物EETs的内源性心血管保护作用

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)是生物体内最丰富的多不饱和脂肪酸,其代谢产物具有广泛的生物学活性。环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)是AA经细胞色素P450表氧化酶(cytochrome P450 epoxygenase,CYP450)代谢产生的内源性小分子化合物,近20年的研究表明EETs具有广泛的心血管保护作用,是重要的内源性心血管保护因子。EETs不仅可以改善不同病因导致的心脏重构,抑制心肌肥厚,减轻不同因素导致的心肌损伤,还能明显改善上述病理过程所导致的血流动力学紊乱和心功能损害。在血管保护方面,最早的研究证明EETs是一种内皮来源的超极化因子,可以通过作用于内皮细胞和平滑肌上的钙离子敏感通道而发挥血管舒张作用,随后研究发现,EETs可能有更多非超极化效应而产生降压、改善冠状动脉血供、调节肺动脉压力等作用。此外,EETs还具有显著的内皮保护效应,可以抑制内皮细胞的炎症反应和黏附作用,抑制血小板聚集,促进纤溶和血管的新生。EETs还能改善主动脉重构,包括抑制动脉粥样硬化、主动脉外膜纤维化和主动脉钙化。EETs心血管保护作用的分子机制是多方面的,EETs可通过调控多个信号通路从而调节不同病理生理环节,是一种多靶点内源性心血管保护因子。因此研究EETs在心血管系统中的生理和病理生理作用有利于阐明心血管疾病的内源性保护机制,为心血管疾病的防治提供新策略。本文综述了EETs的内源性心血管保护作用和机制,以期为该领域的转化研究提供新的思路。

CYP2J2通过激活Notch1途径改善慢性间歇性低氧后心血管损伤的实验研究

目的:探讨细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)对慢性间歇性低氧(CIH)模型大鼠心血管损伤的影响及机制。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、CYP2J2组、CIH组、CIH+CYP2J2组、CIH+CYP2J2+DAPT组,每组10只。CIH组、CIH+CYP2J2组及CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠均构建CIH模型;造模成功后,CYP2J2组、CIH+CYP2J2组、CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠一次性尾静脉注射携带CYP2J2基因的重组腺病毒;CIH+CYP2J2+DAPT组再通过腹腔注射DAPT。2周后,采用高分辨率小动物超声影像系统测定各组大鼠左室缩短分数(FS)、射血分数(EF)、左室收缩末期容积(LVESV)和左室舒张末期容积(LVEDV);自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)与心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆内皮素-1(ET-1)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉及心肌组织形态学变化;末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡情况;生化指标检测试剂盒测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定心肌组织Notch受体1(Notch1)信号途径相关蛋白表达水平。结果:与CIH组比较,CIH+CYP2J2组大鼠FS和NO水平升高,LVESV、LVEDV及CK-MB、cTnI、ET-1水平均降低,主动脉结构基本清晰,细胞肿大、脱落及血管壁增厚等现象均有所改善,心肌纤维断裂、心肌细胞肿大等现象减轻,心肌组织TUNEL阳性细胞比例减少,SOD活性升高,MDA含量下降,Notch1和Hes1蛋白相对表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CIH+CYP2J2组比较,CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠FS和NO水平降低,LVESV、LVEDV及CK-MB、cTnI、ET-1水平均升高,主动脉组织及心肌组织病理损伤现象显著,心肌组织TUNEL阳性细胞比例增加,SOD活性下降,MDA含量升高,Notch1和Hes1蛋白相对表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CYP2J2可改善CIH大鼠心血管损伤,减少心肌细胞凋亡,并抑制氧化应激水平,该机制可能与激活Notch1途径有关。

原发性肝细胞癌组织中CYP2J2和EETs的表达及临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中细胞色素P450表氧化酶2J2(cytochrome P450 arachidonic acid epoxygenase 2J2,CYP2J2)和环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测86例HCC组织中CYP2J2和EETs的表达,分析CYP2J2和EETs表达与HCC临床病理特征及患者预后的相关性。结果CYP2J2高表达率为41.86%(36/86),低表达率为58.14%(50/86);EETs高表达率为52.33%(45/86),低表达率为47.67%(41/86)。CYP2J2和EETs高表达患者更多见于Ⅲ+Ⅳ期、中+低分化、合并静脉癌栓和淋巴结转移的胃癌。Kaplan-Meier生存分析显示,CYP2J2低表达组患者的2年生存率(52.00%,26/50)高于CYP2J2高表达组(30.56%,11/36),差异有统计学意义(χ^2=9.282,P=0.002);EETs低表达组患者的2年生存率(58.54%,24/41)高于EETs高表达组(26.67%,12/45),差异有统计学意义(χ^2=14.969,P=0.009)。多因素Cox回归分析显示,CYP2J2、EETs是影响HCC患者生存时间的危险因素(P<0.05)。经Spearman等级相关检验发现,CYP2J2和EETs表达呈正相关(r=0.810,P<0.001)。结论CYP2J2和EETs表达与HCC肿瘤分期、分化程度、是否合并静脉癌栓和淋巴结转移具有明显相关性;且CYP2J2、EETs为影响HCC患者预后的危险因素。CYP2J2和EETs能为HCC患者的诊疗及预后预测提供参考依据。