基于重组HepG_2-P4503A4与HepG_2-P4503A46全细胞体外药物代谢比较研究

本研究以探针药物硝苯地平（NF）、睾酮（TST）及其抑制剂酮康唑（KCZ）与重组HepG2-P4503A4、HepG2-P4503A46细胞全细胞在优化的重组细胞浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育，通过高效液相色谱仪检测其药物代谢（抑制）动力学参数，并将二者进行比较分析。重组HepG2-P4503A46与HepG2-P4503A4细胞的硝苯地平、睾酮的代谢活性无显著差异（P＞0.05）；在0～10 μM的浓度范围内，酮康唑对硝苯地平和睾酮的抑制活性均随酮康唑浓度的增加而增加，且其IC50值均低于1 μM，为nM级，表明酮康唑对二者的硝苯地平代谢具有较强的抑制活性，抑制剂酮康唑对重组HepG2-P4503A46与HepG2-P4503A4细胞的抑制活性差异不显著（P＞0.05）。本研究表明无论是底物代谢或底物抑制活性，重组HepG2-P4503A46细胞均与重组HepG2-P4503A4细胞差异不显著，P4503A46可能为巴马小型猪体内人P4503A4的同源酶。

液-质联用法测定中年妇科病人咪达唑仑及其代谢物的血药浓度并研究其细胞色素P4503A4酶活性分布特征

目的研究中年妇科手术病人应用咪哒唑仑(抗焦虑药)及其CYP3A4酶活性分布特征。方法以咪哒唑仑作为探针药物,用液-质联用法测定血桨中咪达唑仑、1′-羟基咪达唑仑的单点药物浓度,以1′-羟基咪达唑仑/咪达唑仑的比值评估CYP3A4酶活性。结果 260例妇科手术病人CYP3A4酶的活性为0.46±0.14,推测中年妇科手术病人CYP3A4酶活性的正常值范围为0.18～0.73。结论 CYP3A4酶活性在中年妇科手术病人中呈正态分布,酶活性的个体差异较小,对术后的个体化药物治疗影响不大。

重组细胞色素P4503A4和P4503A22细胞微粒体药物代谢动力学比较研究

目的:利用已建立的巴马小型猪细胞色素P4503A22和P4503A4稳定表达重组肝癌细胞株微粒体,分析比较二者的药物代谢动力学特征.方法:以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)、睾酮及其抑制剂酮康唑(KCZ)为探针药物,将探针药物与重组P4503A4,P4503A22细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,通过高效液相色谱仪检测其药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析.结果:P4503A22的硝苯地平、睾酮的代谢活性均低于P4503A4(p<0.05);酮康唑对P4503A4和P4503A22的硝苯地平代谢具有较强的抑制活性,但酮康唑对P4503A4的抑制活性强于P4503A22(p<0.05).结论:无论是代谢底物或抑制底物活性,重组P4503A22细胞微粒体活性均低于重组P4503A4细胞微粒体活性.

重组细胞色素P4503A4与P4503A39微粒体药物代谢活性比较研究

目的:通过考察已建立的P4503A39和P4503A4稳定表达重组细胞株微粒体药物代谢动力学特征,旨在分子水平为巴马小型猪作为临床药物代谢试验动物提供科学依据。方法:制备重组细胞微粒体,以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)、睾酮及其抑制剂酮康唑(KCZ)为探针药物,将其与重组P4503A4、P4503A39细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,获得药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析。结果:P4503A39和P4503A4体外微粒体药物代谢动力学参数Vmax、Km(S50)、Clint及IC50均表明:P4503A39的硝苯地平、睾酮的代谢活性及酮康唑的抑制活性均显著低于P4503A4(P<0.05)。结论:重组P4503A39细胞微粒体活性显著低于重组P4503A4细胞微粒体活性。

雷公藤甲素通过抑制细胞色素P4503A4酶增强肝损伤研究

目的研究雷公藤甲素诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)表达下调在其引发肝损伤中的作用。方法将L-02细胞和C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,分别为正常组(C)、雷公藤甲素(TP)组、雷公藤甲素(TP)+卡马西平(CBZ)组、雷公藤甲素(TP)+氨氯地平(AML)组, 24 h后收集培养基,C57BL/6雄性小鼠2周后安乐死,取血和肝脏。流式细胞仪观察用药后各组细胞的凋亡率,小鼠肝脏进行组织染色观察肝细胞损伤情况。试剂盒检测细胞上清液和小鼠血清的丙氨酸氨基转移酸(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)。通过Western blot法和RT-PCR法检测细胞和小鼠肝脏CYP3A4的mRNA和蛋白表达水平,应用高效液相色谱法检测细胞培养基中和小鼠血清中雷公藤甲素的含量。结果流式细胞仪检测的细胞凋亡结果和小鼠肝脏病例照片结果显示,TP组明显比C组严重,加入P450 3A4诱导剂的TP+CBZ组则明显减轻,而加入P450 3A4抑制剂的TP+AML组的细胞进一步加剧。体内外ALT和AST检测结果显示,TP组明显高于C组,TP+CBZ组则明显降低,TP+AML组进一步增加。Western blot法和RT-PCR结果显示,TP组CYP3A4表达量明显低于C组,TP+CBZ组的CYP3A4表达量则明显升高,TP+AML组的CYP3A4表达量更低。高效液相检测结果显示,TP+CBZ组中TP的含量低于TP组,而TP+AML组中TP的含量则相反。结论 TP通过抑制其主要代谢酶CYP3A4来减慢自身代谢,可能是其产生肝损伤的机制之一。

pazopanib血药浓度个体差异与细胞色素P4503A4基因多态性的关系初探

目的:分析健康受试者口服pazopanib片后体内药代动力学(PK)规律,初步探讨pazopanib片PK个体差异的遗传学机制。方法:14例健康男性受试者分别在给药当天单次口服pazopanib片(200 mg)后,采集基线至96 h血液样本,用LC-MS/MS法测定服药后各时间点血药浓度,用WinNonlin 6.3软件计算药代动力学相关参数,采用SNapShot法测定细胞色素P4503A4(CYP3A4)基因多态性。结果:Cmax变化范围(7361.65-26081.00)ng/mL,平均值±标准差(15410.72±6366.21)ng/mL;tmax变化范围(1.50-4.00)h、平均值±标准差(2.50±0.83)h;AUC0-t变化范围(228013.55-775231.63)ng·mL-1·h,平均值±标准差(516279.90±175688.41)ng·mL-1·h。个体间Cmax、AUC相差达3倍以上,tmax可相差2倍以上;14例受试者CYP3A4(RS35599367)位点皆为野生型。结论:pazopanib片在中国健康男性志愿者中个体差异较大,未观察到CYP3A4(rs35599367)位点单核苷酸多态性,pazopanib个体间PK差异可能与其他药物代谢相关基因多态性有关。

细胞色素P4503A4与肿瘤化疗耐药的关系研究进展

恶性肿瘤仍是目前威胁人类健康的重大疾病之一,化疗过程中肿瘤细胞对化学药物产生耐药性是抗肿瘤化疗失败的重要因素,严重影响患者预后及生存,明确影响肿瘤化疗耐药性的因素十分重要。细胞色素P450(CYP450)氧化代谢酶系是参与化疗药物代谢过程的关键酶之一,与多数抗肿瘤药物的生物转化、代谢消除密切相关,其中CYP4503A4(CYP3A4)是CYP450家族最重要的药物代谢酶。其可以降低和清除具有细胞毒性的化疗药物的毒性,部分抗癌前药经CYP3A4代谢后具有更强的抗肿瘤活性。其在肿瘤化疗耐药中占据重要位置,深入研究CYP3A4在肿瘤病理机制、疾病进展、预后生存中的作用,对肿瘤的防治具有重要价值。

细胞色素P4503A4与药物代谢的研究进展

细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）是一组含血红素的蛋白质,由结构和功能相关的基因超家族（superfamily）编码的同工酶组成的超家族酶系。CYP主要存在于肝脏,能代谢绝大多数药物和外源性化合物,故又称肝药酶。在肠壁、肾、肾上腺、肺及皮肤等组织中也有CYP存在。

细胞色素P4503A4酶介导的水飞蓟素对吉非替尼代谢的影响

目的考察人混合肝微粒体中吉非替尼的酶促反应动力学,探究水飞蓟素对吉非替尼代谢的影响。方法建立吉非替尼人肝微粒体体外孵育体系,用LC-MS/MS法测定体系中吉非替尼的剩余浓度,计算酶促反应动力学参数,如米氏常数(K_(m))、最大反应速率(V_(max))以及固有清除率(C_(Lint))。将系列浓度的水飞蓟素与吉非替尼共同孵育,测定水飞蓟素对吉非替尼代谢的半数抑制浓度(IC_(50))。结果在体外人肝微粒体中,测得吉非替尼的K_(m)为57.12μmol·L^(-1),V_(max)为21.09 nmol·min^(-1)·mg protein-1,C_(Lint)为0.37 mL·min^(-1)·mg^(-1)。水飞蓟素在0.5~50.0μg·mL^(-1)内对吉非替尼的代谢具有剂量依赖性的抑制作用,其IC_(50)值为20.74μg·mL^(-1)。结论水飞蓟素可剂量依赖性地抑制吉非替尼在人肝微粒体中的代谢,两药合用应密切关注可能发生的药物相互作用。

4种抗肿瘤中药注射液对大鼠细胞色素P4503A4亚型酶活性的影响

目的以睾酮为探针药物体外研究抗肿瘤中药注射液榄香烯、康莱特、鸦胆子油、艾迪对大鼠细胞色素P4503A4(CYP3A4)亚型酶活性的影响。方法用大鼠肝微粒体体外孵育法,用高效液相色谱法测定4种抗肿瘤中药注射液在孵育体系中6β-羟基睾酮(6-OHTS)生成量,反映其对CYP3A4酶活性的影响。结果与空白组相比,榄香烯对CYP3A4酶活性无明显影响;康莱特与艾迪对CYP3A4有诱导作用;鸦胆子油乳对CYP3A4有抑制作用,半数抑制率IC50值为0.78%。结论临床上在与经CYP3A4代谢的药物联合应用时,应警惕康莱特、艾迪及鸦胆子油乳潜在的药-药相互作用。

氯吡格雷对血小板聚集及肝细胞色素P4503A4表达的影响

目的探讨氯吡格雷对大鼠血小板聚集及肝细胞色素P4503A4表达的影响。方法 45只Wistar大鼠按照体重随机分为3组(空白组,对照组和实验组),每组15只。空白组大鼠灌胃生理盐水5 m L·kg-1·d-1,对照组灌胃阿司匹林100 mg·kg-1·d-1,实验组大鼠灌胃氯吡格雷20 mg·kg-1·d-1,均5m L,3组大鼠均处理7 d。药物处理7 d后,心脏取血,检测血小板聚集率和血小板聚集抑制率。Western blot法检测3组肝细胞色素P4503A4表达水平。结果实验组大鼠血小板最大聚集率为(37.23±5.01)%,显著低于空白组的(57.21±5.23)%和对照组的(47.23±4.21)%(P<0.05);实验组大鼠血小板聚集抑制率为(33.56±4.64)%,显著高于对照组的(21.12±3.36)%(P<0.05);与空白组和对照组相比,实验组大鼠肝细胞色素P4503A4表达水平显著降低(P<0.05)。结论氯吡格雷可能通过抑制大鼠肝细胞色素P4503A4表达来达到抗血小板功能的作用。

细胞色素P4503A4基因多态性与癫痫耐药的关系

目的研究细胞色素P4503A4（CYP3A4）基因中3个下调CYP3A4酶活力的多态性位点的分布特点，探讨CYP3A4基因多态性与中国南方汉族人群的癫痫耐药之间的关系。方法应用聚合酶链-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法检测CYP3A4^＊4、CYP3A4^＊5和CYP3A4^＊63个多态性位点在112例耐药性癫痫患者（耐药组）和136例健康人（健康组）中的分布，分析两组之间CYP3A4基因型的差异。结果所有受检者的CYP3A4^＊4和CYP3A4^＊6基因型均为野生型。而健康组中CYP3A4^＊5的基因型均为野生型，耐药组中则有4例为杂合子基因型，108例为野生型。两组的差异有统计学意义[136：0比108：4，0R（95％C1）=1．037（1．001～1．075），P=0．040]。结论CYP3A4^＊5的多态性位点可能和癫痫耐药性有关。

冻存对大量分离的人肝细胞色素氧化酶P4503A4活性的影响

成功的冻存使人肝细胞有可能用于暂时替代肝脏治疗急性肝衰竭和多次、反复治疗肝代谢性疾病。P4503A4是肝细胞色素P450氧化酶系中重要成分，在内外源化合物的代谢中起重要作用，包括环孢霉素、FK506。所以，该酶可衡量肝细胞冻存后功能保存，对肝移植后肝功能检测有重要意义。

非洛地平降压疗效与细胞色素P4503A4*1G基因的关系

目的探索轻中度原发性高血压患者细胞色素P4503A4*1G基因(CYP3A4*1G)不同表型对非洛地平疗效的影响。方法对2014年1月至2020年1月就诊的原发性高血压患者462例应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行CYP3A4*1G基因多态性检测,根据结果分为AA组(n=211)、GA组(n=171)、GG组(n=270),给予患者口服非洛地平治疗。在用药1个和6个月进行血压监测。对比各组患者血压水平,采用二元有序logistic回归分析CYP3A4*1G基因型、体质量指数(BMI)、高盐膳食、高脂血症及性别对非洛地平降压效果的影响。结果共有462例患者完成试验,不同基因型患者在药物治疗前的一般情况差异无统计学意义(P>0.05)。服药前AA、GA及GG基因型患者收缩压及舒张压差异无统计学意义(P>0.05),服药1个月后,AA型与GG型患者收缩压及舒张压差异有统计学意义(P<0.05);服药6个月后,AA、GA及GG型患者之间收缩压及舒张压差异有统计学意义(P<0.05)。二元有序logistic回归分析结果提示,患者CYP3A4*1G基因型与BMI独立影响非洛地平的降压疗效(均P<0.05)。结论CYP3A4*1G基因多态性与非洛地平降压疗效密切相关,结合基因多态性指导用药值得参考。

细胞色素P4503A4与P4503A5及多药耐药基因多态性对氨氯地平降压疗效影响研究

目的探讨细胞色素P450(CYP)3A4*1G、CYP3A5*3及多药耐药(MDR1)C1236T、MDR1 G2677T/A和MDR1 C3435T基因多态性对氨氯地平降压疗效的影响。方法纳入159名原发性高血压患者,予氨氯地平5 mg·d-1干预4周,检测相关基因型,分析不同个体CYP3A4、3A5及MDR1相关基因型分布特征,考察不同单核苷酸多态性(SNP)及MDR1单倍体对氨氯地平降压疗效的影响。结果 CYP3A4*1G*1G基因型舒张压(DBP)下降幅度显著低于CYP3A4*1G*1和CYP3A4*1*1(P<0.05);CYP3A5*3*3基因型DBP下降幅度显著高于CYP3A5*1*3和CYP3A5*1*1(P<0.05);MDR1 C1236T CC、MDR1 G2677T/A AA基因型收缩压(SBP)下降幅度显著高于其他基因型(P<0.05);MDR1 C3435T各基因型治疗前后SBP、DBP下降幅度差异均无统计学意义(P>0.05)。携带MDR1 C3435T CC、MDR1 C3435T CT基因型的患者的DBP下降幅度,女性显著高于男性(P<0.05)。对MDR1单倍体分析,各组单倍体治疗前后SBP、DBP下降幅度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CYP3A5*3、CYP3A4*1G基因多态性可影响氨氯地平降压疗效,MDR1各单倍体未发现与氨氯地平降压疗效相关。

没食子酸对细胞色素P4503A4介导的硝苯地平代谢的影响

目的体外研究没食子酸对细胞色素P4503A4(CYP3A4)介导的硝苯地平代谢的影响。方法将不同浓度没食子酸、人肝微粒体(HLM)与硝苯地平孵育,测定硝苯地平的减少率并计算其半抑制浓度IC_(50)值。将没食子酸与HLM预孵育0 min和30 min后作为干预1组和干预2组;将不加入没食子酸、HLM预孵育0 min设为空白组,分别将不同浓度硝苯地平加入各组启动反应,绘制米氏曲线得到酶动力学参数Km及Vmax,计算硝苯地平的代谢清除率CL(K_(m)/V_(max))。结果没食子酸对CYP3A4存在明显的浓度依赖性抑制,以硝苯地平为底物时,IC_(50)为403.9μg·mL-1。干预1组中仅有没食子酸存在,硝苯地平经CYP3A4的代谢清除率为0.37 mL·min^(-1)·mg^(-1),干预2组中没食子酸产生了代谢产物,此时硝苯地平的代谢清除率为1.5×10-2 mL·min^(-1)·mg^(-1),2组代谢清除率均显著低于空白组(0.66 mL·min^(-1)·mg^(-1))。结论没食子酸可通过抑制CYP3A4减少其对硝苯地平的代谢,具有诱导药物不良反应的风险。

肝细胞色素P4503A4的代谢活性对氯吡格雷耐药现象的作用（译文）

曾有描述用阿斯匹林(AS)或氯吡格雷(CL)后，血小板抑制有个体间差异。另外发现一些个体对AS与CL耐药。因CL的前药(prodmg)由肝细胞色素酶P450(CYP)3A4激活，故作者假设CL疗效的个体间差异可能与CYP3A4代谢活性相关。

红酒多酚对细胞色素P4503A4介导的硝苯地平代谢的影响

目的体外研究红酒多酚成分对细胞色素P4503A4(CYP3A4)介导的硝苯地平代谢的影响。方法将红酒多酚、人肝微粒体及探针底物睾酮孵育后,用高效液相色谱法测定代谢产物6β-羟基睾酮的生成量,用来考察红酒多酚对CYP3A4抑制的浓度依赖性。将不同浓度红酒多酚、人肝微粒体与硝苯地平孵育,测定硝苯地平的减少率并计算IC_(50)值。在不同浓度硝苯地平存在下,绘制米氏曲线,得到红酒多酚存在时硝苯地平的代谢清除率CL_(红酒)(K_(m-红酒)/V_(max-红酒)),对比空白组,考察红酒多酚对硝苯地平代谢的影响。结果红酒多酚对CYP3A4存在明显的浓度依赖抑制效应(IC_(50)=18.29%)。在以硝苯地平为底物时,IC_(50)为25.04%。红酒多酚对硝苯地平的代谢清除率CL_(红酒)为14μL·min^(-1)·mg^(-1),显著低于空白组(640μL·min^(-1)·mg^(-1))。结论红酒多酚可通过抑制CYP3A4的活性,减少其对硝苯地平的代谢,具有诱导食物-药物不良反应的风险。

隐丹参酮及丹参酮ⅡA对人肝HepG2细胞的细胞色素P4503A4和氯吡格雷代谢的影响

目的研究丹参胶囊中隐丹参酮及丹参酮ⅡA对人肝Hep G2细胞的细胞色素P450 3A4(CYP3A4)活性及蛋白表达的影响,及其对氯吡格雷代谢的影响。方法用肝微粒体温孵试验方法考察隐丹参酮及丹参酮ⅡA对CYP3A4活性的影响;用蛋白印迹法法考察隐丹参酮及丹参酮ⅡA在给药后48 h对人肝Hep G2细胞中CYP3A4蛋白表达的影响。上述两种方法均含空白组、对照组和实验组。空白组予以0. 1%DMSO溶液,对照组予以5 ng·m L^(-1)隐丹参酮溶液,实验组予以5 ng·m L^(-1)丹参酮ⅡA溶液,每组均设3个复孔。结果温孵20 min后,实验组、对照组和空白组的氯吡格雷相对量分别为(67. 8±2. 3)%,(59. 3±4. 2)%和(56. 9±3. 4)%,实验组和对照组相比空白组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。孵育48 h后,实验组、对照组和空白组的CYP3A4蛋白的表达分别为(70. 71±3. 29)%,(75. 65±4. 76)%和(22. 48±4. 87)%,实验组和对照组相比空白组分别增加了2. 1倍和2. 4倍,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论丹参胶囊中隐丹参酮及丹参酮ⅡA 2种活性成分能诱导肝细胞CYP3A4酶活性及蛋白的表达,且丹参胶囊对氯吡格雷的代谢具有诱导作用。

miRNA-122-5p对细胞色素P4503A4调控替格瑞洛代谢细胞学研究

目的探讨miRNA-122-5p是否通过特异性调控人正常肝细胞(LO2)中细胞色素P4503A4(CYP3A4)的表达,从而影响替格瑞洛的代谢。方法采用LO2进行4组细胞转染实验:miR-122-5p模拟物组、miR-122-5p模拟物阴性对照组、miR-122-5p抑制剂组、miR-122-5p抑制剂阴性对照组。通过蛋白质印迹和实时聚合酶链反应鉴定CYP3A4蛋白和转录的表达水平。在miR-122-5p模拟物和miR-122-5p抑制剂转染后,采用5μmol/L替格瑞洛刺激LO224 h。通过高效液相质谱联用检测细胞培养基中替格瑞洛及其活性代谢物AR-C124910XX的浓度。结果在蛋白表达水平方面,与miR-122-5p模拟物阴性对照组相比,miR-122-5p模拟物组CYP3A4的表达降低(P<0.05)。与miR-122-5p抑制剂阴性对照组相比,miR-122-5p抑制剂组CYP3A4的表达增加(P<0.05)。在转录水平上,与miR-122-5p模拟物阴性对照组相比,miR-122-5p模拟物转染组CYP3A4的表达降低(P<0.05)。与miR-122-5p抑制剂阴性对照组相比,miR-122-5p抑制剂组CYP3A4的表达增加(P<0.05)。与miR-122-5p模拟物阴性对照组相比,miR-122-5p模拟物组细胞培养基中替格瑞洛的浓度增高,其活性代谢物AR-C124910XX的浓度降低(P<0.05)。与miR-122-5p抑制剂阴性对照组相比,miR-122-5p抑制剂组细胞培养基中替格瑞洛的浓度降低,其活性代谢物AR-C124910XX的浓度增加(P<0.05)。结论miR-122-5p参与CYP3A4表达的调控,并影响替格瑞洛的代谢。