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催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究 被引量:14
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作者 李红梅 梅乐和 +1 位作者 URLACHER VLADA SCHMID ROLF D 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期630-635,共6页
以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得... 以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6.6倍(hml001),9.6倍(hml002)和5.3倍(hml003),并对突变酶的动力学参数进行了分析.突变酶DNA测序的结果表明,hml001含有一个有义氨基酸置换I39V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸置换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位. 展开更多
关键词 细胞色素p450bm-3 定向进化 靛蓝 易错聚合酶链式反应 催化活性
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定向进化细胞色素P450BM-3的研究 被引量:1
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作者 李红梅 yh +2 位作者 梅乐和 Vlada Urlacher Rolf D.Schmid 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第1期27-29,34,共4页
以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突... 以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突变体。 展开更多
关键词 定向进化 细胞色素p450bm-3 靛蓝
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Optimization of fermentation conditions for P450 BM-3 monooxygenase production by hybrid design methodology 被引量:3
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作者 LU Yan MEI Le-he 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2007年第1期27-32,共6页
Factorial design and response surface techniques were used to design and optimize increasing P450 BM-3 expression in E. coli. Operational conditions for maximum production were determined with twelve parameters under ... Factorial design and response surface techniques were used to design and optimize increasing P450 BM-3 expression in E. coli. Operational conditions for maximum production were determined with twelve parameters under consideration: the concentration of FeCl3, induction at OD578 (optical density measured at 578 nm), induction time and inoculum concentration. Initially, Plackett-Burman (PB) design was used to evaluate the process variables relevant in relation to P450 BM-3 production. Four statistically significant parameters for response were selected and utilized in order to optimize the process. With the 416C model of hybrid design, response surfaces were generated, and P450 BM-3 production was improved to 57.90×10?3 U/ml by the best combinations of the physicochemical parameters at optimum levels of 0.12 mg/L FeCl3, inoculum concentration of 2.10%, induction at OD578 equal to 1.07, and with 6.05 h of induction. 展开更多
关键词 p450bm-3 单加氧酶 发酵条件 优化 析因设计
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生物酶法催化瓦伦西亚烯生成圆柚酮 被引量:1
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作者 孟飞 俞春娜 +1 位作者 李海峰 谢恬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期194-198,共5页
在体外,利用野生型CYP450BM-3对瓦伦西亚烯进行催化,酶-底物复合物催化NADPH氧化的速率为31±1.0 nmol(nmol P450)-1min-1,但催化产物中没有检测到圆柚酮的生成。突变体R47L/Y51F/F87A与底物复合物催化NADPH氧化的速率高于野生型,为... 在体外,利用野生型CYP450BM-3对瓦伦西亚烯进行催化,酶-底物复合物催化NADPH氧化的速率为31±1.0 nmol(nmol P450)-1min-1,但催化产物中没有检测到圆柚酮的生成。突变体R47L/Y51F/F87A与底物复合物催化NADPH氧化的速率高于野生型,为79±6.5 nmol(nmol P450)-1min-1,并在催化产物中检测到圆柚酮的生成,但其产物选择性较差,圆柚酮的含量仅占总产物的6.8%。与此同时,检测了另一个突变体A74G/F87V/L188Q对瓦伦西亚烯的催化效果,发现其与底物复合物对NADPH的氧化速率与突变体R47L/Y51F/F87A相当,但产物中圆柚酮的比率更高,达8.0%。 展开更多
关键词 圆柚酮 瓦伦西亚烯 细胞色素 p450bm-3突变体 生物催化
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