SSC技术及P485在电力线通信中的应用

介绍了 Intellon公司的扩频载波 (Spread Spectrum Carrier)技术及 P4 85 PL

SSC技术及P485在电力线通信中的应用

介绍了Intellon公司的扩频载波SSC(SpreadSpectrumCarrier)技术及P485PL网络接口控制器的功能和工作原理。

miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响

目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。

Circ_DCAF6通过调控miR-485-3p/FOXK1轴影响结直肠癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和凋亡

目的:探讨circ_DCAF6对结直肠癌顺铂(DDP)耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制。方法:体外培养SW480及DDP耐药细胞SW480/DDP,RT-qPCR法检测细胞中circ_DCAF6和miR-485-3p表达,蛋白质印迹法检测FOXK1蛋白表达。分别转染si-NC、si-circ_DCAF6、miR-NC、miR-485-3p及si-circ_DCAF6与anti-miR-485-3p至SW480/DDP细胞,CCK-8法检测不同浓度(0、0.156、0.625、2.5、10、40、160μg/mL)DDP作用转染后的细胞24 h的存活率,并计算半数抑制浓度(IC50值);检测细胞迁移、凋亡并验证circ_DCAF6、miR-485-3p和FOXK1调控关系。结果:与SW480细胞相比,SW480/DDP细胞中circ_DCAF6和FOXK1蛋白表达升高,miR-485-3p表达降低(P<0.05)。沉默circ_DCAF6或过表达miR-485-3p可抑制SW480/DDP细胞增殖、迁移和FOXK1蛋白表达,升高SW480/DDP细胞对DDP的敏感性,并促进细胞凋亡(P<0.05);敲低miR-485-3p可减弱沉默circ_DCAF6对SW480/DDP细胞恶性表型的影响。circ_DCAF6可靶向结合miR-485-3p;FOXK1是miR-485-3p的靶基因。结论:沉默circ_DCAF6可抑制SW480/DDP细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与靶向调控miR-485-3p/FOXK1轴有关。

miR-485-5p靶向RAPTOR影响口腔鳞状细胞癌迁移、侵袭和增殖

目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA。Western blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达。利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力。生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(microRNA,miR)。功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖。结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高。伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力。miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力。结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力。

miR-485-3p在消化系统肿瘤中的研究进展

microRNAs (miRNAs)是一类在动物、植物、病毒进化上保守的非编码RNA,并已被证明通过转录后调节发挥作用,参与多种生物学过程。最近的研究表明,miRNAs可调节基因组不稳定性,尤其在许多癌症中,miRNA的表达失调会导致肿瘤异质性和耐药性的基因改变。因此,近几年来miRNA在肿瘤中的作用是研究热点之一,miR-485-3P便是其中之一。现有研究表明,miR-485-3P可通过调控PD-L1、JAK2、STAT3、MAT1A等明星分子来改变细胞凋亡、增殖、迁移等生物学功能,从而调控结直肠癌、肝细胞癌、胃癌、胰腺癌等恶性肿瘤进展,同时也参与了其他肿瘤的调控。在本篇综述中,我们主要概述了目前关于miR-485-3p在消化系统肿瘤中的调控机制的相关研究进展。期望我们的工作可以为上述肿瘤的进一步研究带来益处。

子痫前期孕妇血清miR-411-5p和miR-485-5p水平检测联合超声血流指标对围生儿结局的预测价值研究

目的分析子痫前期(preeclampsia,PE)孕妇血清微小核糖核酸-411-5p(miR-411-5p)和微小核糖核酸-485-5p(miR-485-5p)水平检测联合超声血流指标对围生儿结局的预测价值研究。方法选择2020年1月~2021年12月在北京核工业医院产科建卡并行剖宫产术的88例PE孕妇为研究对象(PE组),另选取同期因其它各种原因剖宫产分娩的正常孕妇90例作为对照组,比较两组间超声血流指标搏动指数(pulsitility index,PI)、阻力指数(resistance index,RI)差异,实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测两组间血清miR-411-5p和miR-485-5p水平并比较,根据PE患者围生儿结局的不同分为结局良好组与结局不良组,比较组间PI,RI,miR-411-5p和miR-485-5p的差异,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法分析PI,RI,miR-411-5p,miR-485-5p以及联合检测对PE患者围生儿不良结局的预测作用。结果PE组孕妇RI(0.79±0.08),PI值(1.82±0.08)高于对照组(0.66±0.06,1.38±0.15),血清miR-411-5p(0.32±0.09),miR-485-5p(0.26±0.03)水平低于对照组(1.01±0.08,1.02±0.09),差异具有统计学意义(t=12.283,24.339,54.091,75.231,均P<0.001);结局不良组PE患者RI(0.83±0.08),PI(1.86±0.09)值高于结局良好组(0.70±0.07,1.71±0.07),血清miR-411-5p(0.27±0.02),miR-485-5p(0.24±0.02)水平低于结局良好组(0.45±0.04,0.31±0.04),差异具有统计学意义(t=11.545,12.428,37.840,14.716,均P<0.001)。超声血流指标RI,PI预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.838(敏感度为90.8%,特异度为65.2%)、0.758(敏感度为50.8%,特异度为91.3%);血清miR-411-5p,miR-485-5p预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.830(敏感度为90.8%,特异度为73.9%)、0.769(敏感度为95.4%,特异度为61.9%),四者联合检测预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.976(敏感度为98.5%,特异度为91.3%)。结论PE孕妇血清miR-411-5p和miR-485-5p水平降低,血清miR-411-5p和miR-485-5p水平联合超声血流指标PI,RI对PE孕妇围生期胎儿结局具有预测作用。

散发性结直肠癌患者血清LncRNA GACAT3 miR-485-5p表达及其临床意义

目的探讨散发性结直肠癌患者血清长链非编码RNA GACAT3(LncRNA GACAT3)、微小RNA-485-5p(miR-485-5p)的表达及其临床意义。方法对62例散发性结直肠癌患者(研究组)、53名健康志愿者(对照组)采用实时荧光定量聚合酶链反应检测GACAT3、miR-485-5p的表达;采用LncBase网站对GACAT3与miR-485-5p的结合进行预测,并采用Pearson相关分析法分析GACAT3与miR-485-5p的相关性;根据GACAT3与miR-485-5p相对表达量平均值将研究组患者分为GACAT3高表达组(29例)、GACAT3低表达组(33例)和miR-485-5p高表达组(30例)、miR-485-5p低表达组(32例),分析不同临床特征患者GACAT3、miR-485-5p表达情况;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GACAT3、miR-485-5p对散发性结直肠癌的诊断价值;采用Kaplan-Meier曲线分析散发性结直肠癌患者5 a生存情况。结果研究组血清GACAT3相对表达量高于对照组,血清miR-485-5p相对表达量低于对照组(P<0.01)。散发性结直肠癌患者GACAT3与miR-485-5p存在互补结合的核苷酸位点,GACAT3与miR-485-5p呈显著负相关(r=-0.306,P<0.05)。肿瘤不同分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期患者血清GACAT3、miR-485-5p表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。ROC曲线显示,血清GACAT3与miR-485-5p联合诊断散发性结直肠癌的曲线下面积为0.918,95%CI为0.865~0.970,诊断敏感度为0.806,诊断特异度为0.887。GACAT3低表达组平均生存期高于高表达组,miR-485-5p低表达组平均生存期低于高表达组。结论散发性结直肠癌患者血清GACAT3表达上调,miR-485-5p表达下调,二者呈负相关,并可能作为散发性结直肠癌诊断及评估患者预后的重要指标。

益气养阴通络方通过lncRNA UCA1靶向调控miR-485-5p抑制糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡及炎症反应作用机制

目的:探讨益气养阴通络方通过lncRNA UCA1靶向调控miR-485-5p抑制糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应作用机制。方法:选取雄性Wistar大鼠50只,随机分为空白组、模型组和益气养阴通络方低、中、高剂量组,每组各10只;除空白组外,其余组大鼠采用高糖高脂胆固醇饮食造模。检测各组大鼠肾功能指标和炎症因子水平;采用流式细胞术检测各组大鼠细胞凋亡率;WB检测各组大鼠细胞凋亡蛋白表达;PCR检测大鼠UCA1、miR-485-5p mRNA水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测UCA1与miR-485-5p的结合位点。结果:与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组24 h尿蛋白(24 hUTP)、血清肌酐(SCr)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组大鼠细胞凋亡率较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组UCA1 mRNA水平较高,miR-485-5p mRNA水平较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);UCA1与miR-485-5p存在结合位点,具有靶向调控关系。结论:益气养阴通络方可能通过lncRNA UCA1靶向调控miR-485-5p抑制DN大鼠肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应。

基于电力线载波通信的油井通信系统

油田采油过程中常常需要对井下温度和压力等参数进行实时监测,以充分了解井下信息。文中就此问题提出了一种井下数据传输方案,该系统的核心是采用SSC P485扩频通信芯片,结合SSC P111放大芯片,利用电力线载波通信技术,通过油井中的电力线实现数据传输。实验证明,该方案便于监测人员对数据的采集和及时了解井下情况。

miRNA-485-5p靶向调控SOX5对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响分析

目的 分析miRNA-485-5p靶向调控性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 取结直肠癌癌组织、癌旁组织,检测miRNA-485-5p、SOX5表达,购买结直肠癌结细胞株HT29,细胞培养后分为对照组、空载组、沉默组、过表达组,对照组常规培养,不做转染处理,空载组、沉默组、过表达组分别转染miRNA-485-5p-NC、miRNA-485-5pmimics、anti-miRNA-485-5p。鉴定转染效率,萤光素酶报告基因系统验证miRNA-485-5p、SOX5靶向关系,分析转染miRNA-485-5p对结直肠癌细胞生物学行为的影响。结果 结直肠癌癌组织中miRNA-485-5p表达量低于癌旁组织,SOX5表达量高于癌旁组织(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组miRNA-485-5p表达量降低,过表达组miRNA-485-5p表达量升高(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组SOX5表达量升高,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组细胞增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均升高,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05)。与空载组相比,过表达A组、过表达B组增殖活性、细胞迁移、侵袭数降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与过表达A组相比,过表达B组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-485-5p可抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为靶向调控SOX5表达,有望成为结直肠癌的治疗靶点。

circNOLC1靶向miR-485-5p对肝癌细胞紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨circNOLC1对肝癌细胞紫杉醇耐药性的影响及可能机制。方法:体外培养肝癌细胞HCCLM3和紫杉醇耐药肝癌细胞HCCLM3/Tax,用不同浓度紫杉醇干预HCCLM3、HCCLM3/Tax后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,并计算紫杉醇对HCCLM3、HCCLM3/Tax的半数抑制浓度(IC_(50)值),RT-qPCR法检测细胞中circNOLC1和miR-485-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证circNOLC1与miR-485-5p调控关系。分别转染si-NC、si-circNOLC1、miR-NC、miR-485-5p mimics、共转染si-circNOLC1与anti-miR-NC、si-circNOLC1与anti-miR-485-5p至HCCLM3/Tax细胞,然后用0.16μmol/L紫杉醇干预24 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,克隆形成实验检测细胞克隆形成数,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果:紫杉醇对HCCLM3、HCCLM3/Tax细胞的IC50值分别为(0.40±0.06)μmol/L、(2.71±0.37)μmol/L。与HCCLM3细胞比较,HCCLM3/Tax细胞中circNOLC1的表达升高(P<0.05),而miR-485-5p的表达降低(P<0.05)。circNOLC1可靶向结合miR-485-5p。与Tax+si-NC组或Tax+miR-NC组比较,Tax+si-circNOLC1组和Tax+miR-485-5p组HCCLM3/Tax细胞抑制率升高(P<0.05),克隆形成数、划痕愈合率和侵袭数及细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05)。与Tax+si-circNOLC1+anti-miR-NC组比较,Tax+si-circNOLC1+anti-miR-485-5p组HCCLM3/Tax细胞抑制率降低(P<0.05),克隆形成数、划痕愈合率和侵袭数及细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:敲减circNOLC1可通过靶向上调miR-485-5p表达增强紫杉醇耐药肝癌细胞对紫杉醇的敏感性。

miR-485-3p调控肝癌细胞铁死亡的分子机制研究

目的:探讨miR-485-3p调控肝癌细胞系HepG2铁死亡的分子机制。方法:使用转染试剂transfect-mate分别转染miR-485-3p模拟物或抑制物至肝癌细胞HepG2中并通过qPCR验证转染效果。加入铁死亡诱导剂索拉非尼(SF),通过CCK-8法检测肝癌细胞增殖水平。通过RT-qPCR验证铁死亡诱导剂作用下肝癌细胞内miR-485-3p表达水平。通过脂质过氧化物试剂盒(MDA)、C11-BODIPY、铁离子检测试剂盒、分别检测肝癌细胞内过氧化物、铁离子积累水平。Western blot测定转染miR-485-3p模拟物或抑制物后核受体共激活因子4 (NCOA4)的表达水平。结果:与“NC + SF”组相比,“Mimics + SF”组肝癌细胞活力减弱,“Inhibitor + SF”组肝癌细胞活力显著增强。qPCR结果显示索拉非尼诱导后,肝癌细胞内miR-485-3p表达水平较对照组升高。“Mimics + SF”组细胞内丙二醛(MDA)、铁离子水平较“NC + SF”组显著升高。共聚焦显微镜下观察到 “Mimics + SF”组肝癌细胞内ROS累积显著,“Inhibitor + SF”组相对较低。Western blot结果显示转染miR-485-3p模拟物后肝癌细胞内NCOA4表达增强,而转染抑制物后NCOA4表达显著下降。结论:miR-485-3p可以通过调控NCOA4影响肝癌细胞铁死亡。

长链非编码RNA NKILA和微小RNA-485-5p在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达研究

目的:分析长链非编码RNA NKILA(LncRNA NKILA)和微小RNA-485-5p(miR-485-5p)在慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中的表达及意义。方法:选取慢性鼻窦炎(CRS)患者93例,分为伴鼻息肉(CRSwNP)组49例,不伴鼻息肉(CRSsNP)组44例,另选取单纯鼻中隔偏曲患者36例作为对照组。采用视觉量表评分(VAS)、Lund-Kennedy鼻内镜评分、Lund-Mackay鼻窦CT评分(CT评分)评估所有受试对象的疾病严重程度;取CRSwNP组患者息肉组织、CRSsNP组钩突组织及对照组下鼻甲组织,qRT-PCR法检测组织中NKILA和miR-485-5p水平;采用R语言limma包分析LncRNA差异表达;Pearson法分析各变量的相关性;无序多分类Logistics回归分析影响CRSwNP的因素;ROC曲线分析NKILA、miR-485-5p水平对CRSwNP的诊断价值。结果:CRSwNP组、CRSsNP组及对照组NKILA水平依次降低,miR-485-5p水平依次升高,两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRSwNP组息肉组织中NKILA与miR-485-5p呈负相关(P<0.05)。GSE136825芯片差异分析结果显示,NKILA显著上调。无序多分类Logistics回归分析显示,随着NKILA水平升高,CRSwNP患病风险不断增大,miR-485-5p水平升高可降低CRSwNP患病风险。ROC曲线显示,NKILA、miR-485-5p均对CRSwNP有较高的诊断价值。结论:CRSwNP患者息肉组织中NKILA高表达,miR-485-5p低表达,二者均与患者疾病严重程度有关,且对CRSwNP有一定的诊断价值。

长链非编码RNAMALAT1靶向miR-485-3p调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性

目的研究长链非编码RNAMALAT1对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响机制。方法运用紫杉醇浓度梯度诱导法检测紫杉醇耐药乳腺癌细胞SK-BR-3;将si-NC组(转染si-NC)、si-MALAT1组(转染si-MALAT1)、pc DNA组(转染pc DNA)、pc DNAMALAT1组(转染pc DNA-MALAT1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-485-3p组(转染miR-485-3p mimics)、si-MALAT1+antimiR-NC组(共转染si-MALAT1和anti-miR-NC)、si-MALAT1+anti-miR-485-3p组(共转染si-MALAT1和anti-miR-485-3p),均用脂质体法转染SK-BR-3/PR细胞;MTT法检测细胞IC50;Western blot检测细胞中P-gp、Bax、Bcl-2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MALAT1与miR-485-3p的结合力。结果与紫杉醇敏感SK-BR-3细胞相比,SK-BR-3/PR细胞的IC50、MALAT1均上调,miR-485-3p下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默MALAT1或过表达miR-485-3p均可下调SK-BR-3/PR细胞的IC50,下调P-gp和Bcl-2表达,上调Bax表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-485-3p是MALAT1的靶标。抑制miR-485-3p可逆转沉默MALAT1对SK-BR-3/PR细胞的IC50、P-gp、Bcl-2和Bax表达的影响,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论长链非编码RNAMALAT1可调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与靶向miR-485-3p下调P-gp、Bcl-2,上调Bax有关。

miR-485-5p通过靶基因FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)靶向脂筏标记蛋白(FLOT)2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR与Western印迹分别检测不同甲状腺癌细胞及正常甲状腺上皮细胞中miR-485-5p与FLOT2 mRNA及蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测甲状腺癌SW579细胞转染miR-485-5p mimic、miR-NC、si-FLOT2、si-NC后的细胞增殖活性,并采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用双荧光素酶活性检测鉴定miR-485-5p与FLOT2的靶向关系。Western印迹检测SW579细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达。结果与TEC细胞相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18中miR-485-5p的相对表达量显著降低(P<0.05),而FLOT2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);miR-485-5p过表达或抑制FLOT2表达后SW579细胞OD值、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21、p27及Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测鉴定FLOT2是miR-485-5p的靶基因,miR-485-5p可负向调控FLOT2表达;FLOT2过表达可逆转miR-485-5p过表达对甲状腺癌SW579细胞增殖及凋亡的作用。结论miR-485-5p通过负向调控靶基因FLOT2抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA PCED1B-AS1靶向miR-485-5p抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的 探讨PCED1B-AS1在宫颈癌中的表达及其对预后、细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取2013年1月至2016年12月河南省人民医院80例宫颈癌患者标本。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PCED1B-AS1及靶基因miR-485-5p的表达。采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分析PCED1B-AS1表达对预后的影响。将PCED1B-AS1低表达质粒(si-PCED1B-AS1)及其阴性对照质粒(si-NC)、miR-485-5p过表达质粒(miR-485-5p模拟物)及其阴性对照质粒(NC模拟物)、miR-485-5p低表达质粒(miR-485-5p抑制物)及其阴性对照质粒(NC抑制物)分别转染至宫颈癌HeLa细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。通过生物信息学预测PCED1B-AS1的靶基因。采用双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀(RIP)实验及挽救(Rescue)实验验证PCED1B-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果 PCED1B-AS1在宫颈癌组织中高表达,且高表达患者有着较差的总体生存期(OS)。CCK-8检测结果显示si-PCED1B-AS1组细胞的增殖能力显著低于si-NC组(P<0.01)。Transwell实验结果显示si-PCED1B-AS1组的迁移细胞数为223±15,显著低于si-NC组的463±15,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,si-PCED1B-AS1组的侵袭细胞数为90±10,显著低于si-NC组的400±10,差异有统计学意义(P<0.001)。PCED1B-AS1表达与miR-485-5p表达呈负相关(r=-0.823,P<0.001)。双荧光素酶报告基因与RIP实验证实了PCED1B-AS1与miR-485-5p之间的相互作用。挽救实验表明,miR-485-5p低表达可以抵消si-PCED1B-AS1对细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.001)。结论 PCED1B-AS1在宫颈癌中表达上调,并且下调PCED1B-AS1可通过靶向负调控miR-485-5p抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-485-5p在前列腺癌组织中表达的临床意义及对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究miR-485-5p在前列腺癌(PC)组织中表达的临床意义及对PC细胞生物学行为的影响。方法:实时定量PCR(RT-PCR)检测45例PC组织、癌旁组织及3种PC细胞系(LNCaP、22RV1、PC-3)中miR-485-5p相对表达量,分析PC组织miR-485-5p表达量与各病理参数间的关系。将PC细胞分为miR-485-5p mimic组(miR组)和阴性对照组(NC组),分别转染miR-485-5p mimic及对照质粒,采用MTT法检测两组细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭。结果:PC组织中miR-485-5p相对表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),3种细胞系中LNCaP细胞miR-485-5p表达量最低。PC组织中miR-485-5p表达与淋巴结转移、临床病理分级及TNM分期相关(P<0.05)。转染后,miR组miR-485-5p表达量明显高于NC组(P<0.05)。随着孵育时间延长,miR组细胞抑制率及凋亡率均明显升高,且高于NC组(P<0.05);miR组细胞划痕愈合率及侵袭细胞数均低于NC组(P<0.05)。结论:miR-485-5p在PC组织及细胞中低表达,且与病理参数相关,通过上调其表达水平可明显抑制PC细胞增殖、迁移及侵袭并诱导凋亡。

长春新碱通过lncRNA XIST/miR-485-5p调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨长春新碱对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对lncRNA XIST/miR-485-5p通路的调控作用。方法:采用不同浓度的长春新碱处理宫颈癌细胞HeLa;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics分别转染入HeLa细胞;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics、miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST、miR-485-5p mimics+pcDNA-lncRNA XIST分别转染入HeLa细胞后加入长春新碱处理细胞。采用MTT实验检测细胞活力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,qPCR法检测lncRNA XIST、miR-485-5p表达,双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA XIST与miR-485-5p的靶向关系,Western blotting法检测CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达。结果:与NC组比较,长春新碱不同剂量组细胞活力显著降低,迁移及侵袭细胞数减少,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低,lncRNA XIST表达水平降低,miR-485-5p表达水平升高(均P<0.05)。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-lncRNA XIST组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05),而lncRNA XIST过表达可明显逆转长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。与miR-NC组比较,miR-485-5p组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05),而miR-485-5p过表达可增强长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA XIST可竞争性结合miR-485-5p。与miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组比较,miR-485-5p+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05)。结论:长春新碱可通过调控lncRNA XIST/miR-485-5p而减弱宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。