旋毛虫p49抗原相关抗体的快速检测

目的 建立旋毛虫病的快速检测技术。方法 基因工程抗原包被有色乳胶颗粒，抗抗体包被磁性颗粒，在抗体存在下形成抗原－ 乳胶－ 抗体－ 抗抗体－ 磁性颗粒的复合场，在磁场作用下沉淀下来，从而达到快速检测旋毛虫相关抗体的目的。结果 １９ 份人工感染鼠血清、５ 份人工感染猪血清、３ 份旋毛虫病猪血清、４ 份病人血清均呈阳性反应，而对照血清均为阴性反应；该方法在鼠感染旋毛虫后第五天可测出ＩｇＭ 抗体，第九天可测出ＩｇＧ抗体。结论 本检测技术简便易行，不需专用设备，可望成为一种快速诊断旋毛虫病的有效方法。

旋毛虫p49抗原基因原核表达产物的纯化

目的建立旋毛虫p49抗原基因原校表达产物的纯化方法。方法菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后，用离子交换和凝胶过滤层析纯化蛋白质。结果纯化后的融合蛋白P49／GST经SDS－PAGE电冰鉴定达电泳纯。双抗体夹心ELISA法检测结果表明纯化的P49／GST融合蛋白能与旋毛虫感染的鼠血清和纯化融合蛋白免疫的兔血清反应，而不与正常民和兔血清反应。结论纯化后的融合蛋白P49／GST具有较高的纯度及较强的免疫活性，可望作为旅毛虫病的免疫诊断抗原。

P49重组抗原检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法建立

以纯化的本地毛形线虫P49排泄分泌(ES)重组蛋白包被微量反应板,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并确定了最适反应参数:抗原包被浓度4μg/mL;血清稀释度1∶100,作用时间90min;酶标二抗稀释度1∶10 000,作用时间60min;最适封闭液为5g/L聚乙烯醇(PVA);最适稀释液为含20g/L PEG6000的PBS;底物最佳显色时间15min。ELISA体系评价结果表明,该方法重复性好,灵敏度高,且可用于不同种株旋毛虫感染的P49血清抗体检测。

应用旋毛虫P53和P49ES重组抗原建立的ELISA方法检测血清抗体的比较研究

通过大肠杆菌表达系统表达编码旋毛虫53kDa、49kDa ES基因重组蛋白P53、P49,这两种蛋白均可被感染旋毛虫(T.spiralis)小鼠阳性血清识别,应用重组蛋白P53和P49建立的两种间接ELISA检测感染鼠血清,探讨相关抗体消长规律及不同攻虫量血清抗体阳性时间差异。结果表明,血清相应抗体水平随感染时间的延长而增高,分别于27d和31d达到峰值,之后进入稳定期;不同数量T.spiralis攻虫后,各时期抗体阳性检出率P49-ELISA均优于P53-ELISA。综合敏感性和特异性,P49基因重组蛋白的敏感性和特异性更为适合用作检测旋毛虫病的理想抗原,并可应用于早期诊断,适合用于ELISA检测试剂盒的建立。